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文档简介
1、血清丙氨酸氨基转移酶测定血清丙氨酸氨基转移酶测定转移酶(transferases)v催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物的酶。反应代表式为:AB+C A+BCB为被转移的基团,如氨基(NH2)等转氨酶(transaminase)v又称氨基转移酶。 大多数转氨酶是催化-氨基酸的氨基转移到-酮酸的酮基上,产生另一种-酮酸和-氨基酸。血清丙氨酸氨基转移酶测定(alanine aminotransferase, ALT)v测定方法:定时比色法(两点法)酶联-紫外连续监测法(动力学法或速率法)酶联酶联-紫外连续监测法紫外连续监测法v原理:L-丙氨酸+-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH L
2、-乳酸+NAD+在340nm连续监测NADH的消耗量,从而计算出ALT的活力。ALTLDv方法学评价: 血清中也含有酮酸及LDH,可以消耗NADH而使测定结果偏高。对策:采用过量的NADH(终浓度0.140.2mmol/L),将血清同不含-酮戊二酸的所有试剂一起预温,使其他副反应充分进行,再加入-酮戊二酸以启动酶反应,监测光吸收的变化,可完全排除这种干扰。定时比色法定时比色法v国内采用的比色测定法有三种: 赖氏法(30min) 金氏法(60min) 改良穆氏法(30min)三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度都相似,单位定义和标准曲线绘制方法有差异。v国内较多采用赖氏法,其优点为:v标准
3、曲线中两种酮酸的量客观地反映了酶作用的实际情况;v标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力的大小;1.测定结果可以直接与分光光度法相比较。v赖氏法原理:赖氏法原理: 丙酮酸和-酮戊二酸在血清ALT的作用下生成丙酮酸和谷氨酸,在酶反应到达规定时间内,加入溶于酸的2,4-二硝基苯肼终止酶反应,并分别与产物丙酮酸和剩余底物-酮戊二酸生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下均呈红棕色,二者吸收光谱在505nm处差异最大,丙酮酸苯腙的呈色强度约为-酮戊二酸苯腙的3倍,据此可算出丙酮酸的生成量,推算出ALT的酶活力。v临床意义ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。1、急性病毒性肝炎,可观察病情发展,作预后 判断。2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝,正常或轻度增高。3、肝硬化、肝癌时,ALT轻度或中度增高,提 示可能并发肝细胞坏死。4、其它原因引起的肝脏损害、骨骼肌损伤、多 发性肌炎等亦可引起ALT增高。v注意事项1、严重脂血症或黄疸血清可使测定管吸光度明 显增加,检测此类标本时,应作血清对照管。2、加入2,4-二硝基苯肼溶液后应充分混匀,使 反应完全,否则影响重复性。3、呈色物质配制必
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