分离以尿素为氮源的微生物

1、实验实验2 2 分离分离以尿素为氮源的以尿素为氮源的微生物微生物尿素又称尿素又称脲脲, ,是是蛋白质的降解产物蛋白质的降解产物, ,哺乳动哺乳动物的尿液中含有物的尿液中含有, ,植物不能直接吸收尿素植物不能直接吸收尿素, ,因此因此, ,大量尿素的存在对环境造成污染大量尿素的存在对环境造成污染. .有有些细菌可产生些细菌可产生脲酶脲酶, ,以尿素为氮源以尿素为氮源, ,将尿素将尿素分解为氨分解为氨, ,被植物吸收被植物吸收. .一.实验目的、原理 使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）；菌（有脲酶的细菌）； 利用利用指示剂颜色的变化指

2、示剂颜色的变化检知脲酶所催化的反应。检知脲酶所催化的反应。二、实验中涉及到的一些问题：二、实验中涉及到的一些问题：（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）（选材的问题）（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（三）统计微生物的数量可用哪些方法？（三）统计微生物的数量可用哪些方法？松软，腐殖质丰富的土壤松软，腐殖质丰富的土壤碳源、碳源、尿素（唯一氮源）尿素（唯一氮源）、无机盐、水、酚红、无机盐、水、酚红涂布分离法、血细胞计数板涂布分离法、血细胞计数板能用蛋白胨吗？三、操作步骤

3、：三、操作步骤：、倒平板、倒平板、制备一定浓度梯度的细菌悬液：、制备一定浓度梯度的细菌悬液：、涂布分离法分离细菌、涂布分离法分离细菌、制备无菌的、制备无菌的全营养固体培养基全营养固体培养基和和尿素固体培养基尿素固体培养基、培养观察（、培养观察（倒置，倒置， ）（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）稀释时尽量只取悬液1.配制培养基 尿素培养基（25mL） 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 2g LB培养基（25mL） 蛋白胨： 0.25g 酵母提取物： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组对照组灭菌？

4、灭菌？实验组实验组G6G6玻璃砂漏斗过滤尿素溶液，其它玻璃砂漏斗过滤尿素溶液，其它成分混合后成分混合后500g/cm500g/cm2 2、9090高压高压蒸汽蒸汽灭菌灭菌3030分钟分钟琼脂是含氮的未纯化的混合物，琼琼脂是含氮的未纯化的混合物，琼脂糖不含氮脂糖不含氮每个稀释度设计每个稀释度设计1个个LB对照平板对照平板每个稀释度设计每个稀释度设计3个尿素平板个尿素平板（平行重复组）（平行重复组）菌落数组别稀释度2.倒平板3.配置细菌悬液10-410-5LB培养基尿素培养基10-410-54.涂布分离4.涂布分离涂布前后玻璃刮刀需要怎样处理？涂布前后玻璃刮刀需要怎样处理？5.培养观察同一浓度捆成

5、一摞同一浓度捆成一摞恒温培养箱恒温培养箱倒置，倒置， 实验组结果示意图能分解尿素的细菌菌落 原因：以尿素为氮源的细菌向胞外分泌脲酶，使培养原因：以尿素为氮源的细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解为氨，基中尿素水解为氨，氨为碱性氨为碱性，酚红酚红在酸性环境里呈在酸性环境里呈黄色，碱性里黄色，碱性里呈红色呈红色。有脲酶的细菌菌落周围有着色的环带出现有脲酶的细菌菌落周围有着色的环带出现在该培养基上生长的菌落也可能有少量固氮微生物2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，等离子形成化合物，使使土壤板结土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且降解，而且利用了所形成的氨利用了所形成的氨，有利于自然界，有利于自然界中氮的循环。中氮的循环