微生物的实验室培养 第2课时 阳腊梅

1、专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用基础知识再现：基础知识再现：1 1、与液体培养基相比，固体培养基在成分上还应加、与液体培养基相比，固体培养基在成分上还应加入入 。2 2、各种培养基的成分各不相同，但一般都含有、各种培养基的成分各不相同，但一般都含有 、 、 和和 。灭菌方法灭菌方法对对 象象所用设备、仪器所用设备、仪器或试剂或试剂灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌高压蒸高压蒸汽灭菌汽灭菌接种针、接种环、试接种针、接种环、试管口、锥形瓶口等管口、锥形瓶口等酒精灯（外焰）酒精灯（外焰）玻璃器皿、金属玻璃器皿、金属用具等用具等培养基培养基干热灭菌箱干热灭菌箱高压蒸汽灭高压蒸汽灭

2、菌锅菌锅消毒方法消毒方法对对 象象方法、设备或试剂方法、设备或试剂饮用水、汤状食物等饮用水、汤状食物等煮沸消毒法煮沸消毒法100 56min巴氏消毒法巴氏消毒法化学剂消化学剂消毒法毒法双手双手不耐高温的液体不耐高温的液体7075 30min水源水源接种室、接种箱、接种室、接种箱、超净工作台表面超净工作台表面紫外线紫外线酒精酒精氯气氯气石碳酸或煤酚皂石碳酸或煤酚皂溶液溶液空气、接种室、接空气、接种室、接种箱、超净工作台种箱、超净工作台表面表面紫光灯紫光灯进行大肠杆菌的纯化培养，即获得进行大肠杆菌的纯化培养，即获得较多纯净的大肠杆菌菌种。较多纯净的大肠杆菌菌种。制备培养基制备培养基纯化大肠杆菌纯化

3、大肠杆菌计算计算溶化溶化灭菌灭菌称量称量倒平板倒平板根据牛肉膏蛋白胨配方的比例根据牛肉膏蛋白胨配方的比例牛肉膏、蛋白胨易吸潮，称量需迅速牛肉膏、蛋白胨易吸潮，称量需迅速称量纸与牛肉膏一同放入烧杯，后挑出；最称量纸与牛肉膏一同放入烧杯，后挑出；最后加琼脂；不断搅拌；最后要定容。后加琼脂；不断搅拌；最后要定容。培养基培养基高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌（用法见（用法见85页）页）培养皿培养皿干热灭菌干热灭菌教材教材17页图示流程。页图示流程。1、不烫手即可。、不烫手即可。2、防止瓶口的微生物污染培养基。、防止瓶口的微生物污染培养基。3、防止皿盖上的水珠落入培养基，使培养基污染、防止皿盖上的水珠落入培养基

4、，使培养基污染同时避免培养基中的水分过快地挥发。同时避免培养基中的水分过快地挥发。4、不能。空气中的微生物可能在此滋生，进而污、不能。空气中的微生物可能在此滋生，进而污染整个培养基。染整个培养基。接种接种恒温培养恒温培养保藏菌种保藏菌种得到纯净的菌种得到纯净的菌种在固体培养基上得到单在固体培养基上得到单菌落菌落必须对菌液进行稀释必须对菌液进行稀释由一个细胞由一个细胞繁殖而来的繁殖而来的肉眼可见的肉眼可见的子细胞群体。子细胞群体。原理原理：通过接种环在琼脂固体培养基表：通过接种环在琼脂固体培养基表面面连续划线连续划线操作，将聚集的菌种操作，将聚集的菌种逐步稀逐步稀释分散释分散到培养基的表面。到培

5、养基的表面。操作方法：操作方法：见教材见教材18页。页。1、灼烧灼烧时间时间操作前操作前每次划线结束每次划线结束划线结束划线结束灼烧灼烧接种接种环的环的目的目的杀死接种杀死接种环上原有环上原有的杂菌的杂菌杀死上次划线后接杀死上次划线后接种环上残留的菌种，种环上残留的菌种，保证本次划线的菌保证本次划线的菌种只来自上次划线种只来自上次划线的末端，从而达到的末端，从而达到稀释的目的稀释的目的防止细菌防止细菌感染实验感染实验人员和污人员和污染环境染环境2、避免接种环温度太高，杀死菌种。、避免接种环温度太高，杀死菌种。3、划线后，线条末端细菌的细菌数目比起始处少，从、划线后，线条末端细菌的细菌数目比起始

6、处少，从上次划线末端开始，能使细菌数目随着划线次数的增加上次划线末端开始，能使细菌数目随着划线次数的增加逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。原理原理：将菌液进行一系列的：将菌液进行一系列的梯度稀释梯度稀释，然后，然后将不同稀释度的菌液将不同稀释度的菌液分别涂布分别涂布到琼脂固体培到琼脂固体培养基的表面，进行培养。养基的表面，进行培养。操作方法：操作方法：见教材见教材19页。页。注意事项：注意事项： 用于稀释的水、试管、移液管等要事先灭菌。用于稀释的水、试管、移液管等要事先灭菌。 每次注入菌液后要吹吸三次，使菌液与水充分混匀。每次注入菌液后

7、要吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 操作时，试管口和移液管应在离火焰操作时，试管口和移液管应在离火焰1-2cm1-2cm处。处。讨论：讨论：第二步应如何进行无菌操作？第二步应如何进行无菌操作？注意事项：注意事项： 方法：方法：将接种后的培养基和一个未接种的培养基将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入都放入3737中，培养中，培养12h12h和和24h24h后，分别观察并记后，分别观察并记录结果。录结果。思考：培养一个未接种的培养基的目的是思考：培养一个未接种的培养基的目的是什么？什么？补充：补充：大肠杆菌的检测可用大肠杆菌的检测可用伊红伊红美蓝美蓝试试剂，见剂，见26页旁栏。页旁栏。保藏方法保藏方法具体方法具体方法条件和注意事项条件和注意事