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文档简介

1、毛系田管ft泳倭鹰用於中蕖成分之分析定量行政院南生署II物食品椀蹶r局I1祐瑞博士一前言中H悬我阈重要的文化之一,原本就值得推廉舆重视,近年来阈内多大企it投入大肇,致力於中II新II之研樊。由於中II材之成分亲隹,且常因基原、地、探收季、炮裂、储存等槿槿因素,致使其成分有相常大的差累,迤而影警中II材的品II。因此,有信司中II成分之分析及品之管制,建得相富的重要。行政院衢生署悬了提昇中!渡彳宿裂剜的品II,已於八十九年七月二十四日公告,自九十年一月一日起,凡申言青葛根浸等十槿中II方剜之浸缩裂剜,查瞬登言已新案及!品可If有效期展延日寺,鹰制言丁指檄成分定量方法。美WI物食品管理局(FDA

2、)亦於八十九年八月公怖,GuidanceforIndustry(Draft)BotanicalDrugProducts(美H FDA 植物性 1B物 11品烧靶草案),提出中草II新II研彝,需以 CMC(即化裂造、品)加以管制。目前中II成分之分析定量,以高效液相)1析(HPLC)最普遍,然而 HPLC分析日寺存在著若干燮数及困莫隹,例如通常分析畤且分析完成彳爰管柱之清洗畤亦甚更换溶媒、管柱,清洗管柱需要畤致使倭器自勤化限制多;成分易残留於管柱内,清洗不易,使用之彳蓟溶液等添加剜,即易损害管柱内之填充物;管柱及溶剜费用高,尤其生大量含有有毒溶剜(如乙月青、二氯甲烷)之屡液。毛区田管甯泳(Ca

3、pillaryelectrophoresis 或 Highperformancecap川aryelectrophoresis), UWCE或HPCE ,是最近十年来蓬勃樊展的分析方法,霜泳是雷介II中带重粒子在H埸作用下,以不同速度向雷荷相反的H趣方向移勤的垣象, 利用道槿琪象封某些化成分迤行分析的技秫亍。毛区田管重泳的樊展,在1967年Hjerten等率先提出在高霜埸,直彳空3mm毛区田管中作自由溶液的毛区田管Hi带重泳(Capillaryzoneelectrophoresis) , UWCZ CZE; 1984 年 Terabe 等建立一槿重要的分雕模式,即以各成分(特别是中性成分),在毛

4、区田管内的夥束(Micelle)及彳蓟溶液之的分配悬基磁之 II 束雷力 毛区田管)1 析(Micellarelectrokineticcapillarychromatography),M热MECC或MEKC ; 1990年Honda 等最早符毛区田管雷泳鹰用於芍桀中Paeoniflorin 及Oxypaeoniflorin之定量,樊琪毛区田管重泳之再垣性佳,定量结果典HPLC相似。毛区田管重泳的槿槿方法中以上述CZE及MEKC最常用,其中CZE是毛区田管重泳中最曾罩的一槿方法,毛区田管内只充入彳蓟溶液,分析之成分以不同的速率在分立的I带内迤行遭移,正、子化合物即可分雕,而中性化合物在H埸中期

5、不曾移勤。MEKC是毛区田管ft泳中鹰用最廉的方法之一,既能分雕中性成分,也能分蹄带重成分,MEKC主要是在彳蓟溶液中,加入一定渡度以上的界面活性剜,以形成束,其鹰用靶圉包括雉生素、大部分II物及中II成分。本文所聚之天麻及玄参雨偃I例子,皆悬 MEKC方法,且均以脑酸金内作悬界面活性剜,分析二槿II材中之不 带重荷高趣性成分。毛区田管雷泳之分析方法,保利用不同檬品蹄子重荷泳勤速度的差累,配合毛区田管内重解II在外加高H埸下所生的H渗流,形成各槿檬品蹄子在毛区田管中浮移勤速度不同,因而逵到分蹄效果。典傅统的平板重泳或高效液相)1析比较,毛区田管重泳的分蹄效率趣高,理板数常在10 510 7左右

6、。另外,毛区田管口彳空小,散热效果佳,因此可使用高H埸迤行重泳,大幅缩短檬品分雕日寺毛区田管重泳舆高效液相)1析皆腐液相分蹄技循:,雨者之分蹄械制不同,各有其鹰用的僵值,惟就分蹄效率、分析速度、成本花费及檬品用量而言,毛区田管重泳之理考病板数较高,分析速度更快,黑乎不消耗溶剜,而檬品用量僮高效液相)1析的数百分之一。毛区田管重泳只要金十封不同便可分蹄不同的的分子性(如分子大小、重荷数、疏水性等)改建操作模式和彳蓟溶液的成分, 檬品。相较之下毛区田管重泳具有更大的逗撵性,欲分析不同的檬品亦不需更换僵格昂贵的管柱。毛区田管甯泳舆高效液相Jf析之比较整理如下:毛区田管甯泳高效液相析分析速度较快的曼理

7、板数敕局较低溶媒消耗机或少多檬品量低(以nl言十)iWj (心)管柱僵格低高管柱清洗快、容易费日寺自勤化高不容易(一)麻 材中 Parishin、ParishinB 及 ParishinC 之含量测定:天麻,原名赤箭,别名明天麻,彳系篇科(Orchidaceae) 植物天麻 Gastrodiaelata 的乾燥根套Parishin(tris4-( -D-glucopyranosyloxy)benzylcitrate) 、ParishinB 及 ParishinC(1,2-及1,3-bis4- ( -D-glucopyranosyloxy)benzylcitrate)悬自天麻分It得到之三槿高趣

8、性成分,分别卷带有三偃I及二偃I葡萄糖之椁檬酸蜜,肇者建立了三槿成分之毛区田管重泳典高效液相Jf析之分析方法,其修件如下:1.高效液相)1析之修件:高效液相析it: Hitachi W牌 HPLCL-6200pump 速接 Hitachi W牌 L-3000Photodiodearray椀限)器及Shimazu W牌SIL-9A自勤注射器。x 150mm分析柱:Cosmosil5C 18-AR , 5 心 m,内彳空4.6mmI.D.椀刘波:UV222nm 移勤相:A:甲醇,B: 0.1%磷酸溶液日寺 (分)AB01585性梯度修件152575303070403070流速:1.0mL/min

9、。内部檄型品:Sulfamethoxypyridazine 。2.毛系田管雷泳)1析之修件:毛区田管重泳倭:Beckman W牌P/ACE5500。毛余田管:Beckman 内筏 75mm x 67cmuncoatedcap川ary。椀刘波 :UV222nm 。彳蓟液:20mMSodiumtetraborate 及 20mMSodiumdihydrogenphosphate配悬 pH6.5含 100mMSodiumch01ate之溶液。温度: 30 Co匐g: 15KV。内部檄型品: Methylparaben 。天麻三槿成分之毛区田管重泳分析,彳蓟液用pH6.5四硼酸金内及磷酸二氧金也加入脑

10、酸金内作界面活性膏I,其6111如圃一所示,可在十七分金童内完成,3t且有很好的回收率(94.8100.5%)及再琪性(同日内之相却票津偏差悬1.232.80% ;累日之相和票津偏差悬1.723.24%),高效液相)1析分析畤如6I二所示,悬毛区田管重泳之二倍。比较二槿方法之再琪性(如表一),毛区田管雷泳瓢在三次分析成分畤或含量测定之相封檄型偏差,其结果均在2%以下,典高效液相析相富。以二槿方法定量分析四件市售天麻II材,其结果相差不多(如表二所示)。表一天麻II材中指檄成分分别以高效液相)1析及毛区田管重泳分蹄之再琪性比较指檄成分高效液相Jf析毛区田管甯泳相封檄型偏差(%,n=3)相封檄型偏

11、差(%,n=3)滞留日寺含量测定遭移日寺含量测定Parishin1.240.481.541.18ParishinB1.140.201.312.01ParishinC1.221.751.261.59(二)玄参中2-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl1-O- oL-arabinopyranosyl(1f-6)uloyl(1-4)- a-L- rhamnopyranosyl(1- -3)-D-glucopyranoside(SN-A)、Harpagoside(SN-B)及 Cinnamicacid(SN-C)之含量测定:玄参别名元参黑参,保玄参科(Scrophulari

12、aceae) 植物玄 Scrophularianingpoensis 或S.buergeriana 之乾燥根。SN-A、SN-B及SN-C悬自玄参分It得到之三槿高趣性成分,其中SN-A悬带有阿拉伯fg糖、鼠李糖及葡萄糖之亲隹化合物;SN-B悬带有一偃I葡萄糖之化合物;SN-C(桂皮酸)小分子化合物,三槿成分之分子量分别悬784、 494及148 ,其差累颇大,但因毛区田管重泳之逗撵性高,仍可在短畤内完成分析。毛区田管重泳舆高效液相)1析分析方法之修 件如下:1.高效液相)1析之修件:高效液相Jf析倭:舆天麻相同)1 析管:Cosmosil5C i8-AR,5mm,内彳空 4.6mm x 15

13、0mm表二四件市售天麻f!材分别以高效液相析及毛区田管霜泳定量之结果毛区田管甯泳高效液相析指檄成分市售IB材(mg/g)(mg/g)Parishin112.5613.51214.5515.1536.866.9946.456.42ParishinB14.834.6424.884.5333.313.0642.462.32ParishinC12.172.2522.172.0831.381.3741.251.30椀限!波 :UV278nm移勤相:A:乙月青B: 1.0%醋酸溶液。日寺 (分)AB性梯度修件01585442773流速:1.0mL/min 内部檄型品:Sorbicacid 。2.毛系田管雷

14、泳析之修件:毛区田管重泳倭:典天麻相同。毛余田管:Beckman 内筏 75mm x 67cmuncoatedcap川ary表三玄材中指檄成分分别以高效液相)1析及毛区田管重泳分蹄之再琪性高效液相Jf析毛区田管重泳指檄成分相封檄型偏差(%,n=3)相封檄型偏差(%,n=3)滞留日寺含量测定遭移日寺含量测定SN-A0.061.000.221.11SN-B0.011.720.282.80SN-C0.041.720.211.22椀限J 波 :UV280nm 。彳蓟液:20mMSodiumtetraborate 及 20mMSodiumdihydrogenphosphate配悬 pH7.5含 120m

15、MSodiumch01ate 及 12% 甲醇之溶液。温度: 25 C。8: 25kV。内部檄型品:Propylparaben 。玄参三槿成分之毛区田管重泳分析,彳蓟液用pH7.5四硼酸金内及磷酸二氧金也加入脑酸金内作界面活性剜、甲醇作修解配 其圃|如圃三所示,可在十九分金童内完成,也有很好的回收率(102.4103.5%) 及再琪性(同日内之相却轲偏差悬0.551.71% ;累日之相和禀津偏差悬1.363.83%),高效液相)1析分析日寺房,如圃四所示,亦悬毛区田管重泳之二倍。比较二槿方法之再琪性(如表三),毛区田管雷泳在三次分析成分畤其结果均在0.3%以下,含量测定之相封檄型偏差,其结果均

16、在3.0%以下,舆高效液相Jf析相富。以二槿方法定量分析七件市售玄HII材,其结果亦相差不多 (如表四所示)。三?结言吾毛区田管重泳具有高逗择性、分析日寺短、管柱清洗日寺短、再现性佳、可自勤化等特性,遹合用於大量品管分析之用。由上述所聚例之二偃I研究觐之,毛区田管雷泳可用於中II成分之分析,其回收率及再琪性均不至於高效液相)1析,用毛区田管重泳优事中II成分之分析碓腐可行。表四七件市售玄mi材分别以高效液相)1析及毛区田管霜泳定量之结果毛区田管甯泳HPLC指檄成分市售材(mg/g)(mg/g)11.701.7922.092.0031.971.91SN-A41.121.0651.671.6360

17、.700.6571.451.4510.450.4620.600.60SN-B31.461.4241.221.2251.441.4160.330.3470.670.7010.160.1620.320.3230.110.11SN-C40.280.2950.270.2760.070.0770.270.28圃二天麻之高效液相)1析分析gm。1: : ParishinB ;2: ParishinC ;3: Parishin。IS:内部檄型品(Sulfamethoxypyridazine) 圃一天麻之毛区田管ft泳分析圃11。1: : ParishinB ;2: ParishinC ;3: Parishi

18、n 。IS:内部檄型品(Methylparaben) 。H三玄参之毛区田管雷:泳分析HH。IS:内部檄型品(Propylparaben)。H四玄参之高效液相眉析分析。 IS:内部檄型品(Sorbicacid)。参考文献1.BealeSC.,1998,Capillaryelectrophoresis. AnalticalChemistry 70:279R-300R.2.McLaughlinGM,NolanJA,LindahlJL,PalmieriRH,AndersonKW,MorrisSC,MorrisonJAandBronzertTJ.,1992,PharmaceuticaldrugseparationsbyHPCE:Practicalguidelines.JournalofLiquidChromatography 15:961-1021. 3.崟U英玫,前嗔吉,1993,毛区田管雷泳在中桀分析上的鹰用,蕖物食品分析,4(2):131-140.4檎祐瑞 制宜祝,郝景平,1林哲辉 潢文滤,1995,天麻!材中指檄成分 Parishin,ParishinB 及 C之高效液相唇5析定量法之探言寸

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