美国注射剂协会(PDA)技术报告NO[1]1：环境监控计划的基本原理介绍

1、环境洁净级别分类环境洁净级别分类环境监测体系环境监测体系系统性的监测系统性的监测洁净级别悬浮粒子最大允许数/米3At rest 静态In operation 动态 0.5m 5.0m 0.5m 5.0mA3 520203 52020B3 52029352 0002 900C352 0002 9003 520 00029 000D3520 00029 000不作规定Not defined级别b浮游菌CFU/m3沉降碟（）CFU/4小时c接触碟（）CFU/碟5指手套CFU/手套A 1 111B10555C1005025D20010050微生物控制标准微生物控制标准清洁和消毒清洁和消毒取样位置的选择

2、取样位置的选择取样频率取样频率警戒和纠偏限度警戒和纠偏限度环境监测数据管理环境监测数据管理细菌鉴定细菌鉴定偏差调查偏差调查/CAPA1，清洁和消毒，清洁和消毒执行清洁和消毒程序是整个工厂管理的重要组成。要用执行清洁和消毒程序是整个工厂管理的重要组成。要用环境监测数据来评价这些程序的有效性环境监测数据来评价这些程序的有效性影响消毒消毒的因素：消毒剂类型，左右时间，待影响消毒消毒的因素：消毒剂类型，左右时间，待消毒表面消毒表面消毒剂效率测试消毒剂效率测试残留去除残留去除 空气悬浮粒子监测空气悬浮粒子监测确定采样点位置确定采样点位置 按公式（按公式（B.1）求出最少的采样点数目：）求出最少的采样点数

3、目： NL 式中式中 NL 最少采样点数（四舍五入为整数）。最少采样点数（四舍五入为整数）。 A 洁净室或洁净区的面积，以洁净室或洁净区的面积，以计。计。 注注: 在水平单向层流时，面积在水平单向层流时，面积A可以看作是与可以看作是与气流方向呈垂直流动的空气的截面积。气流方向呈垂直流动的空气的截面积。 空气悬浮粒子监测空气悬浮粒子监测每个采样点的每次采样量每个采样点的每次采样量VS用下式确定：用下式确定： 20 VS 1000 Cnm VS 每个采样点每次最少采样量，用升表示每个采样点每次最少采样量，用升表示 Cnm 为相关等级规定最大被考虑粒径之等级限值为相关等级规定最大被考虑粒径之等级限值

4、（pc/m3 空气）。空气）。 20 粒子浓度处于该等级限值时，可被检测到粒子数粒子浓度处于该等级限值时，可被检测到粒子数连续监测系统连续监测系统 空气浮游菌监测空气浮游菌监测 浮游菌监测（主动法）浮游菌监测（主动法） 撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪 应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）应取一定体积的空气（取样体积应有代表性） 仪器应经过校验仪器应经过校验 沉降菌监测（被动法）沉降菌监测（被动法） 沉降碟在空气中的暴露时间沉降碟在空气中的暴露时间4小时小时 监控整个灌装过程监控整个灌装过程 只能给出定性和半定量的数据只能给出定性和半定量的数据 应结

5、合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价 环境表面监测环境表面监测 应当对接触产品的表面、地面、墙以及设备定期进行监测应当对接触产品的表面、地面、墙以及设备定期进行监测 接触碟接触碟 用于平整表面用于平整表面 取样面积取样面积25cm2 培养基要凸起，高于碟子边缘培养基要凸起，高于碟子边缘 培养基中含有中和剂培养基中含有中和剂 表面擦试法表面擦试法-用于非规则表面用于非规则表面 擦拭面积大约为擦拭面积大约为25cm2 定性或定量定性或定量 表面样应在无菌操作结束时取表面样应在无菌操作结束时取（以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险）（以

6、最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险） 擦拭法和接触碟法均可使用擦拭法和接触碟法均可使用2，取样位置的选择：，取样位置的选择：哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？在生产过程中，什么地点最容易长菌？在生产过程中，什么地点最容易长菌？取样点的选择需要统计学设计或根据网格法来确定？取样点的选择需要统计学设计或根据网格法来确定？ 在在常规监测中，有一些点需要周转取样吗？常规监测中，有一些点需要周转取样吗？哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难凑接触或最难凑效的部位？效的部位？什么活动

7、会导致污染的扩散？什么活动会导致污染的扩散？在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？2，取样位置的选择：，取样位置的选择：系统取样点环境空气（灌装线）接近敞开和/或者已灌装的容器洁净室空气最接近工作区域水使用点表面（厂房）地面、门把手、墙、帘子表面（设备）灌装线、 控制面板、供胶塞的料斗压缩空气离开压缩机最远点无菌检查系统最接近真空源的接口灌装线操作人员至少要检手指印 单向流（例如，单向流罩）靠近活动最多的区域取样点举例取样点举例2，取样位置的选择：无菌灌装线

8、，取样位置的选择：无菌灌装线 应以微生物污染的风险为基础来考虑应以微生物污染的风险为基础来考虑 取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如：取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如： 在灌装针头处在灌装针头处 将产品装载入冻干腔室处将产品装载入冻干腔室处 胶塞供料桶胶塞供料桶 无菌部件进行连接操作的部位无菌部件进行连接操作的部位 不影响生产过程的操作人员频繁活动处不影响生产过程的操作人员频繁活动处靠近产品，但不接触产品的位置靠近产品，但不接触产品的位置3，取样频率，取样频率批生产动态监测批生产动态监测日常监测日常监测轮转监测轮转监测选择取样频率的关键点是尽可能鉴别出系统潜在选择取样频率的关键

9、点是尽可能鉴别出系统潜在的缺陷。的缺陷。3，取样频率，取样频率: USP 1116洁净区洁净区取样频率取样频率100100级或更高级别级或更高级别每班一次每班一次100100级区毗连的支持性区域级区毗连的支持性区域( (如：如：10,00010,000级级) )每班一次每班一次其它支持性区域其它支持性区域(100,000(100,000级级) )每周二次每周二次可能与产品可能与产品/ /容器相接触的区域容器相接触的区域每周二次每周二次无菌生产区的其它支持性区域（不与产无菌生产区的其它支持性区域（不与产品相接触，通常为品相接触，通常为100,000100,000级或更低）级或更低）每周一次每周一

10、次4，警戒和纠偏限度，警戒和纠偏限度纠偏限度：纠偏限度： 相关相关GMP和药典的法规要求，和药典的法规要求， 连续三次超过下列警戒限度视为超过一次纠偏限度连续三次超过下列警戒限度视为超过一次纠偏限度警戒限度：警戒限度： 根据验证数据根据验证数据 历史的运行监测结果基于统计学制定的历史的运行监测结果基于统计学制定的5，数据管理，数据管理监测日期监测日期取样地点取样地点取样方法取样方法微生物菌落数或微粒数，微生物菌落数或微粒数，鉴别结果鉴别结果产品批号产品批号目前的纠偏限度目前的纠偏限度5，数据管理：趋势分析，数据管理：趋势分析分析的目标分析的目标用警戒用警戒/纠偏值来确定纠偏值来确定“纠偏措施纠

11、偏措施”确定现行的警戒确定现行的警戒/纠偏限度纠偏限度标准是否恰当标准是否恰当用定期报告来更新管理。用定期报告来更新管理。年度报告中包括数据的总结和对纠偏限度的回顾年度报告中包括数据的总结和对纠偏限度的回顾6，细菌鉴定，细菌鉴定BioMerieux Vitek, Inc. (Vitek)Biolog PE Applied BiosystemsQualicon, a DuPont SubsidiaryAPI革兰氏染色革兰氏染色7，偏差调查，偏差调查/CAPA:压缩气体系统压缩气体系统 立即重复测试立即重复测试 测试该过滤器的完整性测试该过滤器的完整性 检查并在必要时（如复测证实超标时）更检查并在

12、必要时（如复测证实超标时）更换过滤器。换过滤器。 评估偏差对已处理组件和评估偏差对已处理组件和/或产品的影响或产品的影响 7，偏差调查，偏差调查/CAPA: HVAC系统系统 回顾检查人员活动的水平回顾检查人员活动的水平 回顾检查回顾检查/进行气流方式进行气流方式/烟雾试验烟雾试验 回顾无菌操作人员的技术回顾无菌操作人员的技术 回顾生产区内更衣要求回顾生产区内更衣要求 对气体过滤器进行泄漏检查并测试二侧的减差对气体过滤器进行泄漏检查并测试二侧的减差 回顾车间的清洁回顾车间的清洁/消毒程序，消毒间隔时间和消毒效率消毒程序，消毒间隔时间和消毒效率 检查区域压差，尤其是上一次消毒后的压差检查区域压差

13、，尤其是上一次消毒后的压差 对机械设备潜在的污染源进行评估对机械设备潜在的污染源进行评估 检查、评估房间的完整性（例如油漆剥落，天花板、墙和地面上检查、评估房间的完整性（例如油漆剥落，天花板、墙和地面上的裂缝，）的裂缝，） 回顾审核产品的风险回顾审核产品的风险 7，偏差调查，偏差调查/CAPA：水系统：水系统 检查水系统的内毒素和化学项目数据检查水系统的内毒素和化学项目数据 检查水系统其它样品或取样点的生物负荷，将出水检查水系统其它样品或取样点的生物负荷，将出水点与系统的污染水平对比点与系统的污染水平对比 回顾检查消毒程序的有效性及和程序的执行周期回顾检查消毒程序的有效性及和程序的执行周期 回

14、顾检查系统预防性维护记录回顾检查系统预防性维护记录 检查样品的收集和使用规程检查样品的收集和使用规程 检查系统是否有盲管，倾斜度？取样点和取样口位检查系统是否有盲管，倾斜度？取样点和取样口位置是否适当置是否适当 评估所述系统对已处理组件及评估所述系统对已处理组件及/或产品的影响或产品的影响 7，偏差调查，偏差调查/CAPA：人员：人员 评估人员对产品可能的影响评估人员对产品可能的影响/污染污染 回顾审查无菌检查的数据回顾审查无菌检查的数据 回顾检查其他区域环境监测的数据回顾检查其他区域环境监测的数据 回顾检查有于手套的消毒剂的配制及其有效期回顾检查有于手套的消毒剂的配制及其有效期 鉴定所有独特

15、形态的分离菌（人与环境对比）鉴定所有独特形态的分离菌（人与环境对比） 对操作人员的培训情况进行评估对操作人员的培训情况进行评估 面试操作人员，看潜在的风险面试操作人员，看潜在的风险 对操作人员再培训，重新确认资质（考核）对操作人员再培训，重新确认资质（考核） 水系统监测水系统监测 压缩空气监测压缩空气监测 生产环境监测生产环境监测 人员监测人员监测 产品和组件的微生物负荷监测产品和组件的微生物负荷监测 无菌检查环境监测无菌检查环境监测人员监控及资质确认人员监控及资质确认取样方法：取样方法：接触碟法：操作服接触碟法：操作服手指印法手指印法棉签擦拭取样：手套棉签擦拭取样：手套人员监控及资质确认人员

16、监控及资质确认取样方法：取样方法：接触碟法：操作服接触碟法：操作服手指印法手指印法棉签擦拭取样：手套棉签擦拭取样：手套 取样位置：取样位置： 双手手指印双手手指印 头部、头部、 口罩口罩 肩部肩部 前臂前臂 手腕手腕 腿部腿部/靴子靴子 眼罩眼罩接触碟法接触碟法27基于无菌操作的污染风险级别进行监控基于无菌操作的污染风险级别进行监控针对不同无菌操作人员采用不同的取样频率、不同的针对不同无菌操作人员采用不同的取样频率、不同的取样数量，取样数量， 装机人员（装机人员（A级区操作人员）级区操作人员） 无菌胶塞等物料添加人员无菌胶塞等物料添加人员 B级区工作人员级区工作人员 维修人员维修人员/QA人员

17、人员/环境监测人员环境监测人员接触碟法接触碟法28 取样时机：取样时机： 工作结束，离开级区前取样工作结束，离开级区前取样 处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套）处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套）不得在刚刚消毒过后不得在刚刚消毒过后29 微生物负荷监测微生物负荷监测 应有灭菌前、中间控制及原料测试生物负荷的规程应有灭菌前、中间控制及原料测试生物负荷的规程 应对低浓度微生物的恢复应对低浓度微生物的恢复/回收方法进行验证回收方法进行验证 如有证据表明环境中存在厌氧菌，则应考虑采用厌如有证据表明环境中存在厌氧菌，则应考虑采用厌氧培养基氧培养基 应有生物负荷的目标值、警戒限度，并有超过这些应有生物负荷的目标值、警戒限度，并有超过这些指标应取措施的文件指标应取措施的文件工艺工艺生产活动拟考虑的监测生产活动拟考虑的监测监测地点监测地点发酵/主要捕获 将菌种接种至扩增罐培养 接种至发酵罐 收集物的均质 产品收集 转移管连接点线 靠近密封圈及发酵罐的位置 靠近均质器的活塞 接近离心机 无菌方式补料/取样口纯化 工艺罐、层析柱加料 收集各个组分 将收集的组分合并 在产品暴露环境靠近生产活动的空气和表面 单向流工作台 靠近组分收集器 层析柱加料口或超滤口处配制 配制容器 在配制时投料 除菌过滤 配制容器的开口处