大三上学期诊断学溶贫8版98

1、 第二节溶血性贫血的实验室检测P260 授课教师：王鲁娟Tel： 溶血性贫血（溶血性贫血（hemolytic anemia）一、定义一、定义 各种原因导致红细胞生存各种原因导致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加时间缩短、破坏增多或加速，而骨髓造血功能不能速，而骨髓造血功能不能相应代偿而发生的一类贫相应代偿而发生的一类贫血。血。正常骨髓有正常骨髓有6-8倍的代偿能力倍的代偿能力溶血性疾病溶血性疾病 溶血性贫血溶血性贫血溶血性黄疸溶血性黄疸红细胞的可塑变形性红细胞的可塑变形性(plastic deformation(plastic deformation） 正常红细胞在外力作用下具有变形的能力，正常

2、红细胞在外力作用下具有变形的能力， 称为称为 可塑变形性。可塑变形性。 变形能力的大小与红细胞的形态、膜特性及内容物变形能力的大小与红细胞的形态、膜特性及内容物的性质和量有关。的性质和量有关。 例如：球形红细胞；膜弹性降低；例如：球形红细胞；膜弹性降低；Hb变性或浓度变性或浓度过高，粘度增高都可使红细胞变形性下降。过高，粘度增高都可使红细胞变形性下降。渗透脆性渗透脆性(osmotic fragility)(osmotic fragility)概念：红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的特性概念：红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的特性 渗透脆性反映红细胞抵抗低渗溶液的能力。渗透脆性反映红细胞抵抗低渗

3、溶液的能力。 脆性大脆性大= =抗低渗液的能力小抗低渗液的能力小= =容易破容易破 脆性小脆性小= =抗低渗液的能力大抗低渗液的能力大= =不易破不易破 临床意义临床意义: :衰老的红细胞，遗传性球形红细胞增多症衰老的红细胞，遗传性球形红细胞增多症其脆性特别大。其脆性特别大。 体内过程：成人每天需体内过程：成人每天需202030mg30mg合成合成HbHb，其中，其中5%5%由食物补充，由食物补充，95%95%来自体内铁（衰老红细胞被巨噬来自体内铁（衰老红细胞被巨噬细胞吞噬破坏，细胞吞噬破坏，HbHb分解释放的铁）的再利用。分解释放的铁）的再利用。Fe3+Fe3+需还原成需还原成Fe2+Fe2

4、+才能被利用。才能被利用。 进入血液的铁与转铁蛋白结合被运送到幼红细胞，进入血液的铁与转铁蛋白结合被运送到幼红细胞，来合成血红蛋白。来合成血红蛋白。 临床：造血功能增强而供铁不足（婴幼儿、孕妇、临床：造血功能增强而供铁不足（婴幼儿、孕妇、乳母），铁吸收利用障碍（胃酸、乳母），铁吸收利用障碍（胃酸、VitCVitC缺乏缺乏) )或铁或铁丢失过多（慢性失血）丢失过多（慢性失血）缺铁性贫血（小细胞低色缺铁性贫血（小细胞低色素性贫血）。可口服硫酸亚铁补充铁盐。素性贫血）。可口服硫酸亚铁补充铁盐。铁：铁：HbHb合成必需原料合成必需原料 平均寿命约为平均寿命约为120120天。天。90%90%的衰老红细

5、胞在脾的衰老红细胞在脾和骨髓等处被巨噬细胞吞噬（血管外破坏）和骨髓等处被巨噬细胞吞噬（血管外破坏） ，吞噬后释放出的铁、氨基酸被重新利用，而脱吞噬后释放出的铁、氨基酸被重新利用，而脱铁血红素转变为胆色素随粪或尿排出体外。此铁血红素转变为胆色素随粪或尿排出体外。此外，外，1010的衰老红细胞在血管内破坏，游离血的衰老红细胞在血管内破坏，游离血红蛋白与结合珠蛋白结合被肝摄取。红蛋白与结合珠蛋白结合被肝摄取。红细胞的破坏红细胞的破坏分类分类（一）按病因和发病机制分类（一）按病因和发病机制分类红细胞内在缺陷：多为遗传疾病红细胞内在缺陷：多为遗传疾病红细胞外在因素损伤：均为后天获得性疾病红细胞外在因素损

6、伤：均为后天获得性疾病分类分类(二二)按溶血发生部位分类按溶血发生部位分类（RBC破坏场所）破坏场所）血管内溶血血管内溶血血管外溶血血管外溶血血管内溶血：急性溶血血管内溶血：急性溶血红细胞破坏（血循环中）游 离 血 红 蛋 白结合珠蛋白 血红蛋白尿 含铁血黄素尿高铁血红蛋白白蛋白血红蛋白尿 含铁血黄素尿返回返回Hb尿含铁血黄素尿含铁血黄素尿free Hb(a2b2 tetramers)HbdimersHpHp-Hbcomplex肾脏肾脏肝肝高铁高铁Hbbinds tohemopexin &albuminferriheme (Fe3+)globin血管外溶血：慢性溶血血管外溶血：慢性溶血

7、红细胞破坏（脾脏）血红素珠蛋白卟啉铁游离胆红素尿胆原粪胆原循环血液红细胞血红蛋白非结合胆红素单核巨噬细胞系统单核巨噬细胞系统尿胆原正常红细胞代谢正常红细胞代谢与葡萄糖醛酸结合结合胆红素粪胆原尿胆原尿胆素门静脉溶血性黄疸发生机理示意图溶血性黄疸发生机理示意图循环血液红细胞血红蛋白非结合胆红素与葡萄糖醛酸结合结合胆红素单核巨噬细胞系统单核巨噬细胞系统尿胆原尿胆原粪胆原尿胆原尿胆素门静脉三三 、实验室检查、实验室检查一一 溶血性贫血的筛查检测溶血性贫血的筛查检测（一）（一） 血浆游离血浆游离Hb测定（敏感）测定（敏感）正常值：正常值：50mg/L意义意义:血管内溶血时明显增加（血管内溶血时明显增加（

8、60650mg/L） 血管外溶血时正常血管外溶血时正常（二）（二） 血清结合珠蛋白测定（血清结合珠蛋白测定（Hp） 正常值：正常值：0.71.5g/L 溶血存在时，溶血存在时，Hp减少。以血管内溶血时减减少。以血管内溶血时减低为显著。低为显著。（三）血浆高铁血红素清蛋白检测：（三）血浆高铁血红素清蛋白检测： 正常人：正常人： 阴性阴性 阳性：严重血管内溶血。阳性：严重血管内溶血。生化法生化法高血红素清蛋白与硫化氨形高血红素清蛋白与硫化氨形成铵血色原，光谱仪观测在成铵血色原，光谱仪观测在558nm处有一吸收光带处有一吸收光带电泳法电泳法醋酸纤维膜电泳，出现一条醋酸纤维膜电泳，出现一条高铁血红素清

9、蛋白带高铁血红素清蛋白带（四）尿含铁血黄素试验（四）尿含铁血黄素试验（Rous test) 铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的铁铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的铁氰化铁，即普鲁士蓝反应。氰化铁，即普鲁士蓝反应。（五）（五） RBC寿命测定寿命测定 正常值：正常值：2532天天 51Cr同位素标记。同位素标记。 溶血性贫血时半衰期溶血性贫血时半衰期15天，说明有溶血存在。天，说明有溶血存在。（六）（六）Hb尿测定尿测定红细胞代偿性增生的检查红细胞代偿性增生的检查网织红细胞计数网织红细胞计数（无特异性）（无特异性）正常：正常：百分数百分数0.51.5%绝对值（绝对值（2484）109

10、/L溶贫时达溶贫时达525%，甚至，甚至75%以上。以上。 血象血象 见图见图骨髓象骨髓象 见图见图Cabots ring 嗜多色性红细胞嗜多色性红细胞Howell-Jolly body嗜碱点彩红细胞嗜碱点彩红细胞骨髓象骨髓象 幼红细胞显著增生，以中幼和晚幼红细胞最多，核分裂象多见。二二 红细胞膜缺陷的检测红细胞膜缺陷的检测 红细胞膜上的蛋白（膜蛋白带红细胞膜上的蛋白（膜蛋白带、1、 2、收缩蛋白、骨架蛋白、功能蛋白、收缩蛋白、骨架蛋白、功能蛋白 ）的数量或结构发生变化，出现形态和功能异的数量或结构发生变化，出现形态和功能异常，发生溶血性贫血。常，发生溶血性贫血。 遗传缺陷遗传缺陷遗传性球形、

11、椭圆形、口形红细遗传性球形、椭圆形、口形红细胞增多症。细胞在脾脏清除，属于血管外溶胞增多症。细胞在脾脏清除，属于血管外溶血。血。 后天获得性红细胞膜缺陷后天获得性红细胞膜缺陷阵发性睡眠性血阵发性睡眠性血红蛋白尿红蛋白尿, 膜上糖化肌醇磷脂（膜上糖化肌醇磷脂（ GPI ）锚连蛋）锚连蛋白异常。为慢性血管内溶血。白异常。为慢性血管内溶血。膜脂质丢失膜脂质丢失 = 变形能力下降变形能力下降 = 脾清除率增加脾清除率增加NormalHereditary spherocytosis细胞膜细胞骨架红细胞膜缺陷的检验红细胞膜缺陷的检验 红细胞渗透脆性试验红细胞渗透脆性试验 红细胞孵育渗透脆性试验红细胞孵育渗

12、透脆性试验 自身溶血试验及纠正试验自身溶血试验及纠正试验（一）红细胞渗透脆性试验（一）红细胞渗透脆性试验 检测红细胞对不同浓度低渗检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力盐溶液的抵抗力主要取决于红细胞表面积与主要取决于红细胞表面积与其体积之比。其体积之比。表面积大而体积小对低渗盐表面积大而体积小对低渗盐水抵抗力较大（脆性较水抵抗力较大（脆性较小），小），反之抵抗力较小（脆性增反之抵抗力较小（脆性增加）。加）。等体积的血液加入一系列的低等体积的血液加入一系列的低渗渗NaClNaCl溶液中溶液中; ; 达到平衡达到平衡; ; 高速离心并测定光密度高速离心并测定光密度. . 大多数正常大多数正常RBC

13、RBC在在NaClNaCl浓度浓度约约 0.50% 0.50%时开始结构破坏时开始结构破坏. .当盐浓度进一步降低当盐浓度进一步降低 渗漏和渗漏和溶血增加溶血增加. .正常渗透脆性正常渗透脆性HS时低渗溶液中的异常溶血n 参考值参考值 n开始溶血：开始溶血：0.42%0.46%（4.24.6g/L）NaCIn 完全溶血：完全溶血：0.28%0.34%（2.83.4g/L）NaCIn临床意义临床意义 n开始溶血开始溶血0.50、完全溶血、完全溶血0.38 为脆性增高为脆性增高 n （1）脆性增高）脆性增高 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症n （2）脆性减低）脆性减低 小细胞低色素性贫

14、血：海洋性贫小细胞低色素性贫血：海洋性贫 n 血、缺铁性贫血血、缺铁性贫血 （二）红细胞孵育渗透脆性试验原理：37孵育24小时，细胞内葡萄糖消耗增加，ATP减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀脆性增高 。参考值 未孵育 50%溶血44.45g/L 孵育 50%溶血4.655.9g/L意义 ： 1、脆性增高：遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶血性贫血。2、脆性减低：缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血。（三）自身溶血试验及其纠正试验（三）自身溶血试验及其纠正试验 红细胞在红细胞在37孵育孵育48小时，其小时，其间由于膜异常引起钠内流倾向间由于膜异常引起钠内流倾向明显增加，明

15、显增加，ATP消耗过多；或消耗过多；或糖酵解途径酶缺乏所引起糖酵解途径酶缺乏所引起ATP生成不足等原因可导致溶血，生成不足等原因可导致溶血，称为自身溶血试验。称为自身溶血试验。在孵育时，加入葡萄糖或在孵育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察溶血可否有作为纠正物，观察溶血可否有一定的纠正，称为纠正试验。一定的纠正，称为纠正试验。参考值：参考值：正 常 人 轻 微 溶 血 ， 溶 血 度正 常 人 轻 微 溶 血 ， 溶 血 度3.5%； 加葡萄糖、加葡萄糖、ATP溶血明显纠正，溶血明显纠正， 溶血度溶血度5% ，多者可，多者可50% G6PD缺陷缺陷 ： ATP：可纠正：可纠正 但不能纠至正常

16、但不能纠至正常 G： 同上同上 PK缺陷缺陷 ： ATP：可纠正：可纠正 G： 不纠正不纠正 （一）（一） 高铁血红蛋白还原试验高铁血红蛋白还原试验 G6P 6-PGA 核酸-5-磷酸G-6-PDG-6-PDNADP+ NADPHNADP+ NADPHNADPH是高铁血红蛋白还原酶和谷胱甘肽还原酶的辅酶。 G6PD缺陷NADPH减少时，高铁血红蛋白和谷胱甘肽还原下降。参考值：高铁血红蛋白还原率参考值：高铁血红蛋白还原率75% 高铁血红蛋白高铁血红蛋白0.3-1.3g/LG6PD缺陷缺陷高铁血红蛋白还原率明显下降高铁血红蛋白还原率明显下降（三）变性珠蛋白小体生成试验（三）变性珠蛋白小体生成试验受

17、检受检RBC乙酰苯肼乙酰苯肼 作活体染色（甲基紫）作活体染色（甲基紫） 有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒计算含计算含5个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率 正常人含正常人含5个及以上珠蛋白小体的红细胞一般小于个及以上珠蛋白小体的红细胞一般小于30% 见图见图3712h G6PD缺乏症常高于缺乏症常高于45%，故可作为，故可作为G6PD缺乏的缺乏的筛检试验。筛检试验。 还原型谷胱甘肽缺乏症也增高。还原型谷胱甘肽缺乏症也增高。 不稳定血红蛋白病含小体的细胞百分率为不稳定血红蛋白病含小体的细胞百分率为75%84%。 HbH病

18、和化学物质中毒时也增高。（病和化学物质中毒时也增高。（ G6PD缺乏缺乏症，症，NADPH减少时，红细胞内还原型谷胱甘肽减减少时，红细胞内还原型谷胱甘肽减少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体）少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体） Heinz Body Haemolytic AnaemiaG6PD deficiency is the most common enzymopathy causing hereditary haemolytic anaemia.咬合形细胞咬合形细胞 、 盔形红细胞盔形红细胞水泡细胞水泡细胞Blister cellHeinz bodiesG6P 6-PGA 核

19、酸-5-磷酸G-6-PDG-6-PDNADP+ NADPHNADP+ NADPHNADPH在紫外线照射下会发出荧光在紫外线照射下会发出荧光NADPH的吸收峰在波长的吸收峰在波长340nm处，可通过单位时间处，可通过单位时间 生成的生成的NADPH的量来测定的量来测定G-6-PD活性。活性。 正常人有很强荧光正常人有很强荧光,酶活性为（酶活性为（4.971.43）U/gHbG-6-PD缺陷者荧光很弱或无荧光缺陷者荧光很弱或无荧光杂合子或某些杂合子或某些G-6-PD变异者则可能有轻到中度荧光变异者则可能有轻到中度荧光(4)G6PD荧光斑点试验和活性测定荧光斑点试验和活性测定(5) PK荧光斑点试验

20、和活性测定荧光斑点试验和活性测定 标记荧光于标记荧光于NADHNADH上，此时有荧光的上，此时有荧光的NADHNADH变为无荧光的变为无荧光的NAD NAD 正常人正常人PKPK活性斑点在活性斑点在2020钟内消失钟内消失, ,酶活性酶活性15.115.11.99 U/gHb 1.99 U/gHb 荧光斑点不消失或时间延长说明荧光斑点不消失或时间延长说明PKPK活性缺乏活性缺乏 中间缺乏（杂合子）时，荧光中间缺乏（杂合子）时，荧光25min60min25min60min消失消失 严重缺乏（纯合子）时，荧光严重缺乏（纯合子）时，荧光60min60min不消失。不消失。PEPPKADPATP丙酮酸

21、丙酮酸LDNADHNAD乳酸乳酸四四 珠蛋白生成异常的检测珠蛋白生成异常的检测 血红蛋白由珠蛋白和血红素构成，珠蛋白分子由血红蛋白由珠蛋白和血红素构成，珠蛋白分子由两对肽链组成，一对是两对肽链组成，一对是链，另一对是非链，另一对是非链（链（、），正常成人血红蛋白有），正常成人血红蛋白有3种：种：HbA(22)、HbA2 (2 2)、HbF(2 2)。 珠蛋白异常分为两大类，一类是某个肽链合成量珠蛋白异常分为两大类，一类是某个肽链合成量减少，即地中海贫血（减少，即地中海贫血（ 、 ），另一类是多肽），另一类是多肽链的结构发生质的改变，即异常血红蛋白病。链的结构发生质的改变，即异常血红蛋白病。 （

22、一）血红蛋白电泳检测：（一）血红蛋白电泳检测： 醋酸纤维膜电泳法，检查有无异常血红醋酸纤维膜电泳法，检查有无异常血红蛋白区带。蛋白区带。 诊断地中海贫血诊断地中海贫血异常异常HB带带+醋酸纤维蛋白膜电泳醋酸纤维蛋白膜电泳临床意义：HbA2：-地中海贫血。恶贫、巨贫轻度。HbA2：缺铁、铁粒幼红细胞贫血。（二）胎儿Hb酸洗脱试验HbF抗酸能力较强，不易被酸洗脱。血片置酸性缓冲液保湿一定时间。含HbF的红细胞不被洗脱，再用伊红染色呈鲜红色成人1%，地中海贫血轻型少数RBC呈阳性，重型阳性RBC明显增多。（三）胎儿血红蛋白测定或（三）胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验碱变性试验在碱性溶液中，在碱性溶

23、液中， HbF不易变性沉淀，其他不易变性沉淀，其他Hb在碱在碱性溶液中易变性沉淀，测定滤液中性溶液中易变性沉淀，测定滤液中Hb含量，即含量，即HbF含量。含量。成人成人2%，新生儿，新生儿5585%, 1岁左右同成人岁左右同成人增高：增高：地中海贫血明显（地中海贫血明显（8090%）。急性白血）。急性白血病、再障、红白血病、淋巴瘤轻度病、再障、红白血病、淋巴瘤轻度。（四）（四）HbA2定量测定：定量测定：1.13.2%临床意义同临床意义同Hb电泳电泳（五）限制性内切酶谱分析：（五）限制性内切酶谱分析：意义：意义：Hb病的基因诊断。病的基因诊断。 （五）自身免疫性（五）自身免疫性 溶血性贫血检测

24、溶血性贫血检测 自身免疫性溶血性贫血自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia AIHA） 是体内免疫发生异常，产生自身抗体或（是体内免疫发生异常，产生自身抗体或（和）补体。结合在和）补体。结合在RBC膜上，膜上， RBC 易被单易被单核巨噬细胞系统所吞噬，核巨噬细胞系统所吞噬，RBC破坏加速破坏加速而引起一组溶血性贫血。而引起一组溶血性贫血。（一）抗人球蛋白试验（一）抗人球蛋白试验 ( Coombs) 原理原理 ： 直接抗人球蛋白试验：直接抗人球蛋白试验： 自身免疫性溶血性自身免疫性溶血性贫血（贫血（AIHA）血清中有抗自身红细胞的不）血清中有抗自身红细胞的

25、不完全抗体，他与表面附有相应抗原的红细完全抗体，他与表面附有相应抗原的红细胞结合，成为致敏红细胞，加入抗人球蛋胞结合，成为致敏红细胞，加入抗人球蛋白与红细胞表面不完全抗体结合，使红细白与红细胞表面不完全抗体结合，使红细胞相互连接起来出现凝集现象。来证实红胞相互连接起来出现凝集现象。来证实红细胞表面有不完全抗体。细胞表面有不完全抗体。抗人球蛋白抗人球蛋白直接试验阳性直接试验阳性间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验 ：检查血清中有无游：检查血清中有无游离的不完全抗体，敏感性差。离的不完全抗体，敏感性差。抗人球蛋白抗人球蛋白IgG不完不完全抗体全抗体RBC直接抗球蛋白试验（直接抗球蛋白试验（DAT）

26、 阳性（右）阳性（右）参考值：正常人抗人球蛋白试验直接、间接均阴性。参考值：正常人抗人球蛋白试验直接、间接均阴性。临床意义：临床意义： 新生儿溶血病、新生儿溶血病、AIHA等。等。自身免疫性溶血性贫血阳性（主要见于温抗体自身免疫性溶血性贫血阳性（主要见于温抗体型型 ，在，在37条件下作用最强条件下作用最强 IgG）,(冷抗体型冷抗体型 4条件下进行试验条件下进行试验 IgM) 间接抗人球蛋白试验：新生儿同种免疫溶血病母间接抗人球蛋白试验：新生儿同种免疫溶血病母体血清中不完全抗体的检测。体血清中不完全抗体的检测。 （二）冷凝集素试验（二）冷凝集素试验原理：冷凝集素是一种可逆性抗体，原理：冷凝集素

27、是一种可逆性抗体，在低温时可与自身在低温时可与自身RBC、“O”型型RBC或与患者同型或与患者同型RBC发生凝集，发生凝集，当温度升高时，凝集块又复消失。当温度升高时，凝集块又复消失。参考值：效价参考值：效价1：40，适合温度，适合温度4。临床意义：临床意义：冷抗体型（冷抗体型（ IgM ）AIHA病人效价病人效价很高。很高。（三）冷热双相溶血试验（三）冷热双相溶血试验（Donath-Landsteiners test ,D-L test） 原理：阵发性寒冷性血红蛋白尿症原理：阵发性寒冷性血红蛋白尿症（PCH）病人血清中有双相溶血素，）病人血清中有双相溶血素，在在04 时，溶血素与时，溶血素与

28、RBC结合，并结合，并吸附补体，但 不 溶 血 ； 当 升 高 至吸附补体，但 不 溶 血 ； 当 升 高 至3037则发生溶血。则发生溶血。临床意义：临床意义：阳性：见于阳性：见于PCH；麻疹、水痘、流；麻疹、水痘、流行性腮腺炎，传染性单核细胞增多症。行性腮腺炎，传染性单核细胞增多症。 （六）（六）阵发性睡眠性血红蛋白尿症阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关检测有关检测 阵发性睡眠性血红蛋白尿 Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria（PNHPNH）是一种获得性造血干细胞基因突变引起）是一种获得性造

29、血干细胞基因突变引起的慢性血管内溶血，异常的慢性血管内溶血，异常PNHPNH细胞缺乏一种通过细胞缺乏一种通过糖肌醇磷脂连接在细胞表面膜蛋白，导致细胞糖肌醇磷脂连接在细胞表面膜蛋白，导致细胞对激活补体异常敏感，临床表现以与睡眠有关对激活补体异常敏感，临床表现以与睡眠有关的、间歇发作的血红蛋白尿为特征。的、间歇发作的血红蛋白尿为特征。 病因发病机制 造血干细胞发生基因突变，导致糖化磷脂酰肌醇（GPI）合成障碍,使异常造血干细胞分化而来的血细胞膜出现GPI连接蛋白缺陷,异常血细胞对补体敏感而破坏,导致溶血. PNH细胞可以是白细胞或红细胞。 20-40岁多发，男性女性 1、血红蛋白尿 以此首发者占1

30、/4，酱油、葡萄酒样，乏力、胸骨后及腰腹部疼痛、发热，晨间重、下午轻，睡眠有关。 睡眠呼吸中枢敏感性酸性物细胞溶血. 2、贫血、感染、出血 3、血栓形成：肝、肠系膜、肢体末梢血管 RBC破坏促凝物Plt膜聚集 补体Plt膜聚集临床表现： PNH是红细胞膜的获得性缺陷引起的对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血，临床表现以与睡眠有关的、间歇发作的血红蛋白尿为特征，可伴有全血细胞减少或反复血栓形成。PNH不同时间尿样不同时间尿样含铁血黄素含铁血黄素 （ 1）酸溶血试验 (Ham) 原理：红细胞+弱酸血清（pH6.66.8） 37 1小时 红细胞膜对补体敏感， 备解素作用下溶血。 临床意义：正常人阴

31、性，临床意义：正常人阴性， 阵发性睡眠性阵发性睡眠性 血红蛋白尿阳血红蛋白尿阳 性（性（PNH）Ham试验试验（2）蔗糖水溶血试验）蔗糖水溶血试验 离子浓度低，增强补体离子浓度低，增强补体与红细胞结合，膜与红细胞结合，膜 孔，孔，蔗糖进入蔗糖进入-细胞破坏细胞破坏 原理：蔗糖溶液离子浓度低，经孵育可加强补体与RBC膜的结合，使PNH病人的RBC膜上形成小孔，随之蔗糖进入RBC而导致溶血。PNH阳性，巨贫、再障、AIHA、先天性球形红细胞增多症轻度溶血。筛选试验。 （3）蛇毒因子溶血试验）蛇毒因子溶血试验 眼镜蛇毒中提取的一种蛋白眼镜蛇毒中提取的一种蛋白质，它能直接激活血清中的补体质，它能直接激

32、活血清中的补体C3，通过旁路激活补体系统，通过旁路激活补体系统，PNH红细胞破碎而引起溶血。特红细胞破碎而引起溶血。特异性异性PNH试验。试验。流式细胞仪检测CD55和CD59 PNH时，红细胞、淋巴细胞、粒细胞和单核细胞的细胞膜上CD55和CD59表达下降。分子生物学方法检测GPI锚连蛋白 PNH 时， GPI （糖化肌醇磷脂）锚连蛋白缺乏。 血管内溶血血管内溶血血浆游离血浆游离HB检测检测 血红蛋白尿血红蛋白尿血浆高铁血红素清蛋白检测：血浆高铁血红素清蛋白检测：含铁血黄素尿试验（含铁血黄素尿试验（Rous试验）：试验）：血管外溶血血管外溶血 血清间接胆红素血清间接胆红素 增高增高尿胆原增高

33、尿胆原增高血管内外溶血血管内外溶血 RBC寿命测定寿命测定血清结合珠蛋白检测：血清结合珠蛋白检测： 红细胞膜缺陷的检验红细胞膜缺陷的检验 红细胞渗透脆性试验红细胞渗透脆性试验 RBC孵育渗透性试验孵育渗透性试验 脆性增高脆性增高 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症 脆性减低脆性减低 海洋性贫血、缺铁性贫血海洋性贫血、缺铁性贫血自身溶血试验及纠正试验自身溶血试验及纠正试验 1、球形、球形RBC增多症时，溶血明显增加，加增多症时，溶血明显增加，加葡萄糖、葡萄糖、ATP溶血明显纠正。溶血明显纠正。 2、G-6-PD缺乏症溶血增加，加葡萄糖、缺乏症溶血增加，加葡萄糖、ATP溶血部分纠正。溶血部分纠正。 3、PK缺乏症加葡萄糖不能纠正。加入缺乏症加葡萄糖不能纠正。加入ATP能纠正。能纠