罗氏HE4试剂性能评估_刘万里主任

1、罗氏罗氏HE4试剂性能评估综述试剂性能评估综述中山大学附属肿瘤医院中山大学附属肿瘤医院刘万里刘万里内容内容 罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结内容内容 罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结标记免疫电化学发光检测标记免疫电化学发光检测ECL (IA) Technology E Electro C Chemo L Luminescence I Immuno A AssayRoche HE4检测试剂设计检测试剂设

2、计双抗体夹心一步法双抗体夹心一步法原理：双抗体夹心法 检测时间：18分钟 1st 孵育孵育: 分钟10 L血样, 生物素标记HE4特异性单克隆抗体，钌标记HE4特异性单克隆抗体，形成抗原抗体复合物 2nd 孵育孵育:分钟加入链酶亲和素包被的磁珠，通过生物素和链酶亲和素反应，形成复合物 检测检测:反应复合物送入测量池，磁珠结合至电极表面，未结合的反应物通过ProCell清除通过对电极增加电压触发化学发光光电子释放，后者通过光电倍增管检测Roche HE4检测试剂设计检测试剂设计HE4检测原理检测原理生物素标记的生物素标记的HE4单克隆抗体单克隆抗体Ru待检样本中的待检样本中的HE4 (10 L)

3、钌标记的钌标记的HE4单克隆抗体单克隆抗体Ru链酶亲和素链酶亲和素包被的磁珠包被的磁珠Ru进行检测进行检测9 min9 minRoche HE4试剂成分试剂成分试剂试剂 工作溶液工作溶液 M: 包被链酶亲和素的微粒（透明盖），1 瓶，6.5 mL：包被链霉亲和素的微粒0.72 mg/mL；防腐剂 R1: 生物素化抗人HE4抗体（灰盖），1瓶，10 mL：生物素化单克隆抗HE4抗体（小鼠）0.75 mg/L，磷酸盐缓冲液100 mmol/L，pH值6.5；防腐剂 R2: 钌复合物标记的抗人HE4抗体（黑盖），1 瓶， 10 mL：钌复合物标记的单克隆抗HE4抗体（小鼠）1.5 mg/L；磷酸盐缓

4、冲液100 mmol/L，pH值7.4；防腐剂Roche HE4试剂成分试剂成分需要的材料需要的材料试剂名称试剂名称货号货号规格规格Elecsys HE4 05950929 190100 测试Elecsys HE4 CalSet05950945 1904 x 1 mLPreciControl HE405950953 1902 x 1 mL each of PreciControl HE4 1 and 2试剂名称试剂名称货号货号规格规格Elecsys CA 125 II11776223 322 100 tests per rackpackElecsys CA 125 II CalSet11776

5、240 322 4 x 1 mLPreciControl Tumormarker11776452 122 2 x 3 mL each of PreciControl Tumormarker 1 and 2 卵巢癌肿瘤标志物卵巢癌肿瘤标志物提供提供HE4和和CA125检测的厂家检测的厂家HE4HE4CA 125CA 125Roche (Elecsys, cobas e)Roche (Elecsys, cobas e)Abbott (Architect)Abbott (Architect)Beckman (Access)Beckman (Access)Siemens (Immulite, Cent

6、aur, Siemens (Immulite, Centaur, Vista)Vista)Diasorin (Liaison)Diasorin (Liaison)B.R.A.H.M.S (Kryptor)B.R.A.H.M.S (Kryptor)Becton Dickinson (TriPath)Becton Dickinson (TriPath)plannedplannedCanAgCanAg（ELISAELISA）罗氏所有免疫平台均可以同罗氏所有免疫平台均可以同时提供时提供CA125CA125和和HE4HE4的检测的检测内容内容 罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研

7、究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结Elecsys HE4 SFDA注册研究注册研究研究概况研究概况 研究时间：2011.12011.6 研究中心中国医学科学院肿瘤医院浙江大学医学院附属妇产科医院华中科技大学同济医学院附属同济医院山西省肿瘤医院Elecsys HE4 SFDA注册研究注册研究 研究目的一：与康乃格公司HE4 (酶联免疫法) 进行比对检测，评价试验结果 研究目的二：盆腔肿块患有卵巢癌风险的评估：Elecsys HE4和Elecsys 125II联合检测计算ROMA指数，评估风险高低 研究目的三：血清,血浆对比试验，验证不同类型样本结果的一致性El

8、ecsys HE4 SFDA注册研究结果注册研究结果共入组共入组1487例样本例样本标本类型标本类型医科院肿瘤医科院肿瘤 浙大妇产浙大妇产武汉同济武汉同济山西肿瘤山西肿瘤合计合计卵巢上皮癌卵巢上皮癌103494045237疑似样本疑似样本 （盆腔包块患者）（盆腔包块患者）611916868388其他肿瘤其他肿瘤 （子宫内膜癌、（子宫内膜癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、膀胱癌等）膀胱癌等）621363648282表观健康人群表观健康人群12012511082437RF阳性阳性111091040溶血溶血1010101141脂血脂血1011101142黄疸黄疸10001020合计

9、合计3875322832851487Elecsys HE4 SFDA注册研究结果注册研究结果各研究中心不精密度结果各研究中心不精密度结果 CV（低浓度）（低浓度）CV(中浓度中浓度)医科院肿瘤医院医科院肿瘤医院2.21%4.35%浙江大学妇产医浙江大学妇产医院院1.05%1.11%武汉同济医院武汉同济医院1.06 %0.62 %山西省肿瘤医院山西省肿瘤医院1.61%0.66%选取中、低浓度的样品各一份，分别检测10次，计算CV值Elecsys HE4 SFDA注册研究结果注册研究结果各研究中心质控结果良好各研究中心质控结果良好参比试剂参比试剂考核试剂考核试剂CA125CA125医院医院名称名称

10、质控名称质控名称HE4HE4质控名称质控名称PreciControl HE4PreciControl HE4质控名称质控名称PC TMPC TM质控批号质控批号2796427964270922709227093270931560800015608000 1560810015608100靶值靶值47.5pmol47.5pmol/L/L391.5pmo391.5pmol/Ll/L45pmol/L45pmol/L341pmol/341pmol/L L32.6(U/m32.6(U/mL)L)101(U/mL)101(U/mL)范围范围33-6233-62313-470313-47035.0-35.0-

11、53.653.6262 262 40240225.7639.25.7639.444479.791279.79122.212.21医科院肿医科院肿瘤瘤检测结果检测结果43.7843.78447.4447.446.1846.18340.8340.828.728.7101.7101.7浙大妇产浙大妇产 检测结果检测结果41.3441.34367.74367.7447.847.8344.5344.529.0229.0280.2480.24武汉同济武汉同济 检测结果检测结果39.5939.59360.5360.542.7442.7432132133.6233.6291.9491.94山西肿瘤山西肿瘤 检

12、测结果检测结果50.9850.98441.71441.7143.4343.43343.9343.932.9632.9686.9186.91Elecsys HE4 SFDA注册研究结果注册研究结果与参与试剂有良好的一致性与参与试剂有良好的一致性y = 1.0942x + 2.7976y = 1.0942x + 2.7976相关系数相关系数r r0.9490.949回归系数回归系数R R2 20.89970.8997Elecsys HE4 SFDA注册研究结果注册研究结果ROMA指数可将盆腔肿块患者进行风险分级指数可将盆腔肿块患者进行风险分级绝经绝经前前:PI = -12,0 + 2,38*LNH

13、E4 +0,0626*LNCA125绝经绝经后后:PI = -8,09 + 1,04*LNHE4 + 0,732*LNCA125582例样本被正确分入高例样本被正确分入高/低风险组低风险组ROMA (%) =Exp(PI) x 1001 + Exp(PI)注：风险指数注：风险指数PI（Predictive Index） LN为自然对数为自然对数内容内容 罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结病例报告病例报告 患者，女，患者，女，4545岁，岁，B B超检查发现卵巢肿块，超检查发现卵巢肿块， 罗氏试剂电化

14、学发光法检测血清罗氏试剂电化学发光法检测血清HE4HE4浓度，浓度，结果为结果为 136 pmol/L 136 pmol/L。如何判断这患者如何判断这患者HE4HE4结果是否异常？结果是否异常？临床判断临床判断HE4HE4检测结果应考虑的问题检测结果应考虑的问题参考值参考值HE4HE4实验室检测误差实验室检测误差样本检测前误差：样本检测前误差：标本采集影响标本采集影响 标本保存的影响标本保存的影响 干扰物质的影响干扰物质的影响 人生理变异人生理变异治疗措施的干扰（药物）治疗措施的干扰（药物）其他疾病的干扰其他疾病的干扰三组各年龄段三组各年龄段HE4浓度比较浓度比较a 均值标准差pmol/l（例

15、数）； 青年组：45岁；中年组：45-59岁；老年组：60岁。*LSD检验；#经随机区组设计方差分析组别组别总计总计a a (323)青年组青年组a a (34)中年组中年组a a (108) # 老年组老年组a a (181) #OC组组337.5156.4(160)304.6143.2(19)334.7156.4(60) 373.3132.5(81)良性组良性组72.038.7(54)*50.616.3(10)68.712.6(18)96.638.7(26)健康组健康组59.222.9(109)*42.28.9(5)58.77.6(30)76.85.6(74)1 1、参考值、参考值HE4在

16、不同观察组间的差异 OC组，不同年龄的HE4良性病变组，不同年龄的HE4健康对照组组，不同年龄的HE4 年龄因素对年龄因素对HE4HE4浓度的影响浓度的影响HE4在各年龄在各年龄组参考值的设定和诊断价值评估组参考值的设定和诊断价值评估 所有病例的ROC曲线 青年组的ROC曲线 AUCAUCCutoffCutoff点点(PM)(PM)敏感性敏感性特异性特异性总体总体0.8390.839828267.3%67.3%93.6%93.6%青年组青年组0.9460.946757583.4%83.4%92.6%92.6%HE4在各年龄在各年龄组参考值的设定和诊断价值评估组参考值的设定和诊断价值评估 中年组

17、的ROC曲线 老年组的ROC曲线 AUCAUCCutoffCutoff点点(PM)(PM)敏感性敏感性特异性特异性中年组中年组0.8700.870* *808075.0%75.0%93.1%93.1%老年组老年组0.7750.775* *13013050%50%93.2%93.2%2、实验室检测误差 日间精密度（罗氏）日间精密度（罗氏） 日间精密度（验证）日间精密度（验证）在三个研究中心进行的在三个研究中心进行的重复性检测的结果：不重复性检测的结果：不精密度（精密度（CV)CV)低值（低值（44.344.3） CV=2.1%CV=2.1%高值高值 （13171317） CV=1.9%CV=1.

18、9%2、实验室检测误差初步结论初步结论实验室检测误差实验室检测误差 5%5%样本检测前误差样本检测前误差血清、血浆（血清、血浆（EDTA、肝素）、肝素） 样品保存（样品保存（24h24h内）内）血清血浆，血清血清血浆，血清24h24h内检测，内检测，HE4HE4无显著性差异无显著性差异样本检测前误差样本检测前误差 干扰物质影响（罗氏）干扰物质影响（罗氏） 药物的影响（罗氏）药物的影响（罗氏）回收率均回收率均 10%10%结论：上述浓度下的干结论：上述浓度下的干扰物质和药物对扰物质和药物对HE4HE4检测检测无显著影响。无显著影响。样本检测前误差样本检测前误差 对对HE4HE4浓度分别在浓度分别

19、在65 pmol/L 65 pmol/L 和和155 pmol/L155 pmol/L进行检测，判进行检测，判断与乳清酸性蛋白家族其他断与乳清酸性蛋白家族其他成员的交叉反应性成员的交叉反应性 Elafin :弹性蛋白酶特异性弹性蛋白酶特异性抑制剂抑制剂 SLPI：分泌性白细胞蛋白：分泌性白细胞蛋白酶抑制剂酶抑制剂 干扰物质的影响 ： 交叉反应（罗氏）结论：交叉反应对结论：交叉反应对HE4HE4结结果的影响可忽略不计。果的影响可忽略不计。样本检测前误差样本检测前误差 HE4生理变异的影响（n=2)初步结论初步结论: :HE4HE4个体日间变异度个体日间变异度10%10%样本检测前误差样本检测前误

20、差 肺部疾病的影响肺部疾病的影响 肾功不良的影响肾功不良的影响结论：肺部疾病，尤其是结论：肺部疾病，尤其是肾衰肾衰显著影响显著影响HE4水平水平总结总结1、HE4的参考值需按年龄段设定的参考值需按年龄段设定2、HE4实验室检测误差实验室检测误差52、HE4个体日间变异度约个体日间变异度约103、肺部疾病和肾衰、肺部疾病和肾衰HE4水平显著升高水平显著升高4、其他样品前检测影响因素对、其他样品前检测影响因素对HE4的影响不显著的影响不显著5、HE4结果结果超过参考值上限超过参考值上限20判断为异常判断为异常，对高于，对高于 正常参考限但未大于正常参考限但未大于20的患者，应连续追踪观察。的患者，

21、应连续追踪观察。患者患者HE4结果的初步判断结果的初步判断 患者，女，患者，女，4545岁，岁，B B超超检查发现卵巢肿块，检查发现卵巢肿块， 罗氏试剂电化学发光罗氏试剂电化学发光法检测血清法检测血清HE4HE4浓度，浓度，结果为结果为 136 pmol/L 136 pmol/L 肾功正常，无肺部疾肾功正常，无肺部疾病病 病理诊断：卵巢癌病理诊断：卵巢癌实验室检测误差约实验室检测误差约136x56.8个体变异个体变异36x10%=13.6预计该患者预计该患者HE4的结果为的结果为115.6156.4范围内范围内该年龄组参考限为该年龄组参考限为80pmol/L结论：该患者结论：该患者HE4异常增高异常增高内容内容 罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结Elecsys HE4性能参数性能参数 小结小结Elecsys HE4 性能参数性能参数检测时间检测时间18