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1、会计学1细菌的芽孢和荚膜染色细菌的芽孢和荚膜染色 2、芽孢菌体的特点芽孢菌体的特点：不能繁殖的休眠体，含水少、含脂高、致密不透明，对不良环境有很强的抵抗能力。 有的芽孢在一定条件下可保持活力数年甚至数十年之久。条件适宜时能重新萌发。 芽孢尤其能耐高温： 枯草杆菌的芽孢，在沸水中可存 活1小时； 破伤风芽孢杆菌可在沸水中存活 3小时； 肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢可在沸水 中存活6小时，即使在1800C干燥箱中仍可存活10分钟。 芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据。第2页/共15页肉毒芽孢杆菌第3页/共15页n在杆菌中能形成芽孢的种类在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌较多，在球菌和螺旋菌中只有少

2、数菌种可形成芽孢和螺旋菌中只有少数菌种可形成芽孢 产生芽孢的几个属：产生芽孢的几个属：n芽孢杆菌属芽孢杆菌属(Bacillus)n梭状芽孢杆菌属梭状芽孢杆菌属(Clostridium)n芽孢八叠球菌属芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)第4页/共15页4 4、芽孢染色的原理：、芽孢染色的原理： 利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。 细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁厚，致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。 第5页/共15页 一般采用碱性染料（孔雀绿）并在微火上加热或延长染色时间，使菌体和芽孢同时都染上色后，再用水冲洗

3、脱去菌体的染料，此时仍保留芽孢的着色，并用对照染料来染菌体，这样就将芽孢和菌体分别染成两种不同的颜色。第6页/共15页 （二）（二）荚膜染色法：荚膜染色法： 有些细菌生活在一定营养条件下，可向细胞壁表面分泌一层松散透明、疏松、柔软、粘度极大，粘液状或胶质状的物质即为荚膜（Capsule）。 荚膜的化学成分主要是多糖、多肽、蛋白质、脂以及由它们组成的复合物脂多糖、脂蛋白等。 荚膜虽不是细胞的主要结构，但它是细胞外碳源和能源性贮藏物质，并能保护细胞免受干燥的影响，同时能增加某些病原菌的致病能力，抵御宿主吞噬细胞的吞噬。 第7页/共15页 荚膜染色原理：荚膜化学成分为多糖类衍生物、糖原或多肽，对染料

4、结合力很弱，因此不易染色。一般采用负染色负染色的方法，使细菌和背景着色，背景与菌体之间形成一透明区即荚膜。由于荚膜很薄，容易变形，在制片时一般不用加热固定。肺炎球菌荚膜染色钾细菌荚膜染色第8页/共15页第9页/共15页第10页/共15页（一）芽孢染色（一）芽孢染色 取枯草杆菌制成涂片、干燥、固定； 用试管夹夹住玻片一端，涂层上加孔雀绿3-4滴； 加热5分钟使冒蒸汽，中途补加孔雀绿，勿煮干； 冷却、水洗（细水）； 蕃红溶液复染2 - 3分钟，水洗； 干燥、镜检； 结果：芽孢呈绿色，菌体呈红色。 第11页/共15页（二）荚膜染色（二）荚膜染色 取钾细菌一环，做成涂片，自然干燥（不能加热）， 可用吹风机冷风吹干； 甲醇固定； 水洗； 蕃红溶液12分钟； 水洗； 自然干燥、镜检； 结果：背景红色、

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