第十五章甾体激素类药物的分析教材

1、第十五章甾体激素类第十五章甾体激素类药物的分析药物的分析基本结构：环戊烷并多氢菲基本结构：环戊烷并多氢菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819第一节第一节 基本结构与分类基本结构与分类母核母核分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素 HOO CO CH2OHH皮质酮（肾上腺皮质激素类）ABCD4A环 酮基C17位COCH2OH醇酮基肾上腺皮肾上腺皮质激素质激素OHOOHOCH2OHHHH氢化可的松氢化可的松肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素OHOOHOHFHOCH3

2、OHCH3肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睾酮丙酸睾酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙 O C O CH3黄体酮（孕激素类）4A环 酮基甲酮基COCH3位C17孕激素孕激素孕激素结构特点孕激素结构特点OC OCH3醋醋酸酸甲甲地地孕孕酮酮OCCH3OCH3孕激素孕激素雌激素 A环为苯环，C3位有酚羟基 HOOH雌二醇（雌激素类）C3位有酚羟基位有酚羟基 A环为苯环环为苯环雌激素结构特点雌激素结构特点CHOHHHOHCH雌激素雌激素炔雌醇炔雌醇第二节第二节 理化性质与鉴别试验理化性质与鉴别试验一、性状特征一、性

3、状特征1.1.性状与溶解度：白色至微黄色粉末或结晶性粉性状与溶解度：白色至微黄色粉末或结晶性粉末，在水中不溶或几乎不溶。末，在水中不溶或几乎不溶。2.2.熔点：具有鉴定意义，还可以反应药物的纯度。熔点：具有鉴定意义，还可以反应药物的纯度。3.3.比旋度：多有手性碳原子，具有旋光性。比旋度：多有手性碳原子，具有旋光性。4.4.吸收系数：具有紫外吸收。吸收系数：具有紫外吸收。结构与性质结构与性质1. 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试剂、与羰基试剂反应反应 C C1717 醇酮醇酮基基还还 原原 性性 常见药物有氢化可的松、醋

4、酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。米松等。2.2.雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试剂、与羰基试剂反应反应 C C17 17 羟基羟基可成酯可成酯 常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。3.3.孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应C C17 17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰化钠反与亚硝基铁氰化钠反应应C C17 17 乙炔基乙炔基与与AgNOAgNO3

5、 3反应反应 常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。4.4.雌激素雌激素主要活性基团主要活性基团性性 质质A A环为环为3 3OH OH 苯环苯环UVUV、与重氮苯磺酸盐、与重氮苯磺酸盐反应反应C C17 17 乙炔基乙炔基与与AgNOAgNO3 3反应反应C C17 17 羟基羟基可成酯可成酯 常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。二、化学鉴别法二、化学鉴别法甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反

6、应与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀释加水稀释泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙色带橙色 清清（二）（二） 官能团的反应官能团的反应1. C17 醇酮基醇酮基(还原性还原性)肾上腺皮质激素+氨制AgNO3Ag（黑色）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素+碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 Cu2O（红色（红色）肾上腺皮质激素 + 红四氮唑 红色OH-肾上腺皮质激素 + 兰四氮唑 兰色OH-甾酮激素甾酮

7、激素类药物类药物呈色呈色羰基试剂羰基试剂2.2.酮基的呈色反应（酮基的呈色反应（C C3 3酮基和酮基和C C2020酮基）酮基）常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼具有甲酮基具有甲酮基或活泼亚甲或活泼亚甲基的甾体激基的甾体激素类药物素类药物呈色呈色 亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠间二硝基酚、芳香醛间二硝基酚、芳香醛3.3.甲酮基甲酮基黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁氰化钠氰化钠其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色COCH3O黄体酮黄体酮 NOCNFe OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO雌激素类雌激素类药物药

8、物红色偶氮红色偶氮染料染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸4.4.酚羟基酚羟基含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银5.5.炔基的沉淀反应炔基的沉淀反应RCCHAgNO3RCCAg有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl6.6.有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸- -硝酸银硝酸银AgCl 呈蓝紫色呈蓝紫色 OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOH茜素氟蓝茜素氟蓝OOOHOCH2NCH2COOCeCH2COOFOHF- Ce7.7.酯的反应酯的反应C C1717或或C C2121位上有羟基的酯，一般先进行水位上有羟基的酯，一般先进行水解，生成相应的

9、羧酸，再根据羧酸的性质来解，生成相应的羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴别。进行鉴别。戊酸酯戊酸酯戊酸（臭气）戊酸（臭气）己酸酯己酸酯己酸（臭气己酸（臭气）-3-酮酮 240nm苯环苯环 280nmOCCCCCCCCC 三、三、UVUV法法CH33003000cm-1HC 30002700cm-1OC 19001650cm-1CC 16501450cm-11000650cm-1CH 四、四、IRIR法法37503300cm-1OH 醋酸可的松醋酸可的松COOOOHCH2OCOCH3结构特征：结构特征：43酮、酮、C17 OHC20 酮基、酮基、 C11 酮基、醋酸酯酮基、醋酸酯1630cm-1OC

10、 OH3420cm-1亚甲基、亚甲基、角甲基吸收带角甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1COC 五、色谱法五、色谱法 薄层色谱法：主要用于甾体激素类药物制剂薄层色谱法：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求：供试品溶液所显主斑点的要求：供试品溶液所显主斑点的颜色颜色和和位置位置 与对照品溶液的主斑点相同。与对照品溶液的主斑点相同。 HPLCHPLC法法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法方法：对照品法 要求：在含量

11、测定项下记录的色谱图中，供要求：在含量测定项下记录的色谱图中，供 试品峰的试品峰的t tR R与对照品峰的与对照品峰的t tR R一致。一致。第三节第三节 特殊杂质与检查特殊杂质与检查一、有关物质的检查一、有关物质的检查（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法 判定方法：判定方法： 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色 取本品加氯仿取本品加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）制）制成成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适作为供试液，精密量取适量，加氯仿量，加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）稀释成）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱作为对照液；照薄层色谱法，各取法，各取5

12、l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿板上，以氯仿-甲醇（甲醇（97 : 3）为展）为展开剂，展开后晾干，在开剂，展开后晾干，在105干燥干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试%.% 限量限量液，立即检视，供试品溶液如显杂液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于质斑点，不得多于2 2个，其颜色与对个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。照液的主斑点比较，不得更深。12 特点：特点： （1 1）简便易行，不需特殊的仪器；）简便易行，不需特殊的仪器； （2 2）不需对照品；）不需对照品； （3 3）只能控制单个杂质的限量；）只能控制单个杂质的限量

13、； （4 4）要求杂质与主成分的显色灵敏度）要求杂质与主成分的显色灵敏度 接近。接近。（二）（二）HPLCHPLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积规定杂质峰面积来源：合成中用二氧化硒来源：合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢剧毒剧毒原理：原理：nmA 环己烷苯并苯硒二唑二氨基萘5 , 43,24 Se .pH SeSe盐酸羟胺盐酸羟胺氧瓶燃烧氧瓶燃烧S二、硒的检查二、硒的检查三、有机溶剂（三、有机溶剂（甲醇和丙酮）甲醇和丙酮）的检查的检查甲醇甲醇 不得出峰不得出峰（灵敏度法）（灵敏度法） 检测限检测

14、限= 3.1ng= 3.1ng丙酮丙酮 5.0%5.0% 内标法内标法 + + 校正因子校正因子GCGC法法四、游离磷酸盐的检查四、游离磷酸盐的检查（对照品法）（对照品法）地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠原理：原理： OnHMoOPHPOHPOMoOH还原还原钼蓝钼蓝对照液对照液供试液供试液对对样样还原还原钼酸铵钼酸铵AAnm 方法：方法：第四节第四节 含量测定含量测定一、一、UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯环苯环 2

15、80nm280nm（）雌激素雌激素二、比色法二、比色法1. 适用于非分光光度活性药物适用于非分光光度活性药物2. 使待测组分光谱位移，避免干扰使待测组分光谱位移，避免干扰3. 增加测定灵敏度增加测定灵敏度4. 增加选择性增加选择性弱、非分光光弱、非分光光度活性药物度活性药物强分光光度强分光光度活性药物活性药物化学反应化学反应 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C17 -醇酮基醇酮基强还原性强还原性有色甲臜四氮唑盐醇酮基 17COH -还原还原（一）四氮唑比色法（一）四氮唑比色法（1 1）原理：）原理：CNNNNH三苯甲三苯甲臜臜深红深红CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四

16、氮唑（红四氮唑（RT）nmmax490480 OHe2 （2 2）种类）种类Cl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3蓝四氮唑蓝四氮唑（BT） OHe4 HCNNNNOCH3HCNNNNOCH3双甲双甲臜臜（暗蓝）（暗蓝）nmmax525 ChPChP TTC TTC（RTRT） BP TTCBP TTC（RTRT）USP BTUSP BT 氢氢氧氧化化四四甲甲基基铵铵对对照照液液供供试试液液ATTC4045暗暗（2 2） 操作方法操作方法（对照品法）（对照品法）F 基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C11= O C11OHC21OH C21-酯酯C16无论何种取代基无论何种取

17、代基（3 3）讨论）讨论F 溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%5%含水含水10%10%A10%A10%含水含水30%30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 A 无水乙醇无水乙醇F O O2 2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O O2 2影响颜影响颜色强度和色强度和稳定性稳定性隔绝空气、隔绝空气、 快速、充快速、充N N2 2F 碱的种类及加入顺序碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75pH13.75）条件下）条件下进行，以进行，以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结果最佳。的结果最佳。碱碱试试

18、液液四四氮氮唑唑盐盐皮皮质质激激素素溶溶液液加入顺序：加入顺序：F 温度与时间温度与时间t、甲臜分解甲臜分解%ChP 25 4045BP 30 1h（4 4）特点：）特点： 缺点缺点 影响因素太多影响因素太多 优点优点 测定结果能指示药品的稳测定结果能指示药品的稳 定性（氧化及降解产物无此反应）定性（氧化及降解产物无此反应）2. 2. 其他比色法其他比色法l 异烟肼比色法异烟肼比色法l KoberKober反应比色法反应比色法异烟肼比色法 1. 原理 具有43酮基的肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合成异烟腙，在一定波长下具有最大吸收 。2. 2. 讨

19、论讨论（1 1）溶剂的选择溶剂的选择：无水甲醇或无水乙醇：无水甲醇或无水乙醇（2 2）酸的种类：酸的种类：HClHCl、H H2 2SOSO4 4、HAcHAc均可，且酸与均可，且酸与异烟肼的摩尔比为异烟肼的摩尔比为2:12:1时可获得最大吸收。时可获得最大吸收。（3 3）水分、温度、光线和氧的影响：水分、温度、光线和氧的影响： 水分使反应逆转，温度使反应加快，水分使反应逆转，温度使反应加快，具塞玻管中反应，光线和氧不影响。具塞玻管中反应，光线和氧不影响。（4 4）关于反应专属性关于反应专属性： 在一定的反在一定的反应条件下，只有应条件下，只有C C3 3- -酮基起反应，故本酮基起反应，故本

20、法对法对4 4-3-3-酮甾体具有专属性。酮甾体具有专属性。KoberKober反应比色法反应比色法 KoberKober反应是指雌激素与硫酸反应是指雌激素与硫酸- -乙醇乙醇反应呈色，在反应呈色，在515nm515nm附近有最大吸收。附近有最大吸收。可用于雌激素的比色法测定。 ChP（2005）、）、USP、BP、JP均采用均采用RP-HPLC（大多内标法）（大多内标法）特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快测定速度快三、三、HPLCHPLC法法1甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团显色反应

21、的基团 A. 酚羟基酚羟基 B. 活泼次甲基活泼次甲基 C. 甲酮基甲酮基 D. C17 -醇酮基醇酮基 E. 酮基酮基习题2. 用异烟肼比色法测定甾体激素药物含用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是量时，其溶液的环境是A强酸性强酸性 B中性中性 C强碱性强碱性 D弱碱性弱碱性 E以上都不对以上都不对3.问题（问题（1）（）（5） A维生素维生素B1 B醋酸地塞米松醋酸地塞米松 C两者皆是两者皆是 D两者皆不是两者皆不是 （1） 异烟肼比色法异烟肼比色法 （2）硫色素反应）硫色素反应 （3）紫外分光光度法）紫外分光光度法 （4）绿奎宁（）绿奎宁（Thaciaquin）反应）反应BACD4. 可用于氢化可的松鉴别的试剂有可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银氨制硝酸银 B异烟肼异烟肼 C红四氮唑红四氮唑 D硫酸硫酸 E重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 可用于甾体激体类药物的测定方法有可用于甾体激体类药物的测定方法有 A