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文档简介

1、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳甘肃中医药大学甘肃中医药大学2电泳技术v带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。1809年俄国物理学家Pece首先发现了电泳现象，但直到1937 年瑞典学者 A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪 ，分离了马血清白蛋白的3种球蛋白，创建了电泳技术。 一、一、 实验目的实验目的1. 1. 掌握电泳的基本原理掌握电泳的基本原理 ; ;2. 2. 熟悉琼脂糖凝胶电泳技术；熟悉琼脂糖凝胶电泳技术； 3. 3. 了解凝胶成像电泳图谱。了解凝胶成像

2、电泳图谱。二、实验原理二、实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。浓度。DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。M 1 2 3

3、4PCR产物的产物的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳核酸核酸电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，溴化乙锭（琼脂糖，溴化乙锭（EB），），6加样缓冲液加样缓冲液三、实验材料、器具及药品三、实验材料、器具及药品四、实验步骤四、实验步骤1 制胶制胶： 60ml(0.5TBE)+0.72g琼脂糖琼脂糖 三角瓶三角瓶(1/3) 煮煮胶胶 溶解，冷却至溶解，冷却至60(不烫手不烫手)， 加加EB，倒板，倒板(4-6mm)，室温下充分凝固，竖直拔，室温下充分凝固，竖直拔下梳子下梳子 2 点样点样：3 电泳电泳：电压电压3-5V/cm，约，约80-90V，注意，注意电极方向电极方向4 观察观察：紫外透射分析仪下观察，时间不紫外透射分析仪下观察，时间不要太久要太久 图图1 1 基因组基因组DNA1%DNA1%琼脂凝胶电泳图琼脂凝胶电泳图 图图2 2 PCRPCR产物琼脂凝胶电泳图产物琼脂凝胶电泳图 (1(1、2 2、3 3、4 4为为PCRPCR产物

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