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文档简介

1、实验步骤实验步骤苯酚硫酸法测多糖试剂： （1）90%的苯酚溶液： 称取90克苯酚，加蒸馏水10ml，在室温下可保存数月 （2）9%苯酚溶液： 取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水30ml，现配现用 （3）浓硫酸实验步骤实验步骤苯酚硫酸法测多糖 2ml（水、空白培养基、无菌发酵液）+1ml 9% 苯酚+5ml 浓硫酸 =8ml 恒温条件下，30min后测A485nm实验步骤实验步骤Bradford法测蛋白试剂试剂：Bradford储存液 100ml 95%乙醇 200ml 88%磷酸 350mg Serva G蓝 室温下长期保持稳定100l蛋白质溶液蛋白质溶液+1ml 工作液工作液 2min测测A

2、595 1h内完成内完成Bradford 工作液 425ml 双蒸水 15ml 95%乙醇 30ml 88%磷酸 30ml Bradford贮存液Whatman 1号滤纸过滤，保温与室温棕色瓶中，可使用数周，但使用前需要过滤实验步骤实验步骤培养温度与初始pH对抑菌效果的影响:1.取OD=0.4的CL菌株1ml分别接入初始pH为4.0、5.5、7.0、8.5的100ml海水牛肉膏蛋白胨培养基中，25 170r/min振荡培养4d2.取OD=0.4的CL菌株1ml接入100ml海水牛肉膏蛋白胨培养基中，分别在20、25、30、37 170r/min振荡培养4d3.制备无菌发酵液后利用牛津杯法观察抑菌圈大小实验结果实验结果1.抑菌活性物质是蛋白质还是多糖?Bradford测蛋白苯酚-硫酸法测多糖1.11.151.21.251.31.351.4空白CL（1）CL（2）实验结果实验结果CL菌株在发酵过程中并不产胞外多糖，可以断定抗菌物质不是多糖。但是利用Bradford法测蛋白质，发酵前后蛋白质含量有明显变化，但是并不能断定抗菌物质是蛋白质类，有可能是CL菌株产的胞外蛋白酶类，使蛋白质含量发生变化。为探索其物质可能还需要进一步验证实验结果实验结果培养温度与初始pH对抑菌效果的影响由此可以看出，最佳培养条件为： 初始pH 5.5 培养温度 25 培养时间 4d 下一步任务下一步任

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