病毒(类)蛋白载体

1、病毒纳米颗粒（ Viral nanoparticles） -成像与载药纳米材料新载体报告人：陈天翔时间：2015.04.03宁波材料所主要内容u病毒纳米颗粒简介u病毒纳米颗粒修饰方法u相关实例（文献）分析病毒纳米颗粒基本概念 Viral nanoparticles (VNPs) 病毒（类）纳米载体，是基于病毒蛋白（衣壳蛋白）自组装形成的纳米颗粒，可作为新型纳米材料的基件或载体，或具有感染力。 Viruslike nanoparticles (VLPs) 是VNPs的基本构成单位，不包括遗传信息，因而不具备感染力。T4 BacteriophageInfluenza VirusHeadTail s

2、heathDNATail fiberRNACapsidSurfaceproteinsMembraneenvelopeRNACapsidproteinsTobacco Mosaic Virus病毒纳米颗粒材料优势基因编码-自组装高度对称-三维蛋白结构高通量位点-多阶拷贝结构均匀-单分层结构特异性潜在优势生物相容性与生物可降解性可修饰性（基因/化学修饰）对人体无害、不会感染Journal of Biomedical Engineering 2014.31(3): 718-722.病毒纳米颗粒分类u病毒按宿主分为：噬菌体、植物类病毒、动物类病毒l二十面体植物病毒雀麦草斑纹病毒BMVu病毒按纳米材料结

3、构分：豇豆花叶病毒CPMV红三叶草坏死花叶病毒RCNMVl二十面体噬菌体芙蓉褪环斑病毒HCRSV豇豆褪绿斑驳病毒CCMVM13丝状噬菌体Q噬菌体MS2噬菌体l棒状植物病毒马铃薯X病毒PVX烟草花叶病毒TMX病毒纳米颗粒研究过程u病毒纳米颗粒VNPs/VLPs制备植物提取 细菌、酵母提取uVNPs/VLPs修饰u体内体外评价试验从植物或者细菌中得到的病毒对人畜不会造成感染和危害， 这些优点使病毒在医学领域有着潜在的应用前景。实例文献分析雀麦花叶病毒吲哚花青绿人支气管上皮细胞二十面体植物病毒(1) 透析解离BMV病毒；(2) 离心丢弃大部分RNA及未解离BMV病毒 (15k RPM, 30 min

4、)，取上清得到衣壳蛋白； (3) 丢弃未分离BMV病毒与RNA(90k RPM, 1 h)，取上清得到衣壳蛋白； (4)透析去除剩余RNA；(5) 丢弃重新自组装的BMV病毒(90k RPM, 1 h)； (6) 取上清收集BMV衣壳蛋白；(7) 加入ICG染料；(8)重新自组装形成BMV病毒结构（不含RNA）并透析24h；(9) 高速离心，弃上清液中的多余ICG (90k RPM,1 h)，取沉淀OVGs； (10) 重悬。荧光及共聚焦成像：a：不含OVG，b：含OVG（ICG浓度10 ug/mL）及c：含OVG（ICG浓度143 ug/mL）细胞毒性：a：Control，b：ICGC：含O

5、VG（ICG浓度10 ug/mL）D：含OVG（ICG浓度143 ug/mL）既可作磁性纳米材料的载体，又具备表皮生长因子受体的靶向功能。多瘤病毒多瘤病毒SV40-VLPs 解离形成 VP1-五聚体。CMNPs 表面包裹形成 VP1-五聚体。不同粒径的CMNPs 8, 20, 27 nm 分别孵育。bar: 100 nm。CMNPs 与 VP1-CMNPs 的DSL数据。 Zeta 电势。T1 与T2成像 MRI。利用聚乙二醇交联剂交联VP1与EGF。铁与EGF的含量对比偶联EGF的VP1材料电泳图谱雀麦花叶病毒乙肝病毒BMV 自组装：纳米材料与 BMV以1:99混合于TNKM buffer

6、(0.05 M Tris-HCl, 0.05 M NaCl, 0.01 M KCl, 0.005 M MgCl2) 100 L，蛋白浓度为0.5 mg/mL。并用TNKM溶液透析24 h，完成后用低离子浓度的pH 4.6SAMA buffer (0.05 M NaOAc, 0.008 M Mg(OAc)2)再次透析，并完成自组装。HBV自组装： 用1.5 M 胍（guanidine）-HCl buffer (0.5 M LiCl, 50 mM HEPES, 2 mM DTT, pH7.5) 透析解离HBV病毒，并去除RNA等沉淀物，剩余物用HPLC分离纯化。将分离所得的HBV衣壳蛋白以同样的1

7、：99比例与磁性纳米粒子混合，并在低离子强度的缓冲液中(0.1 M NaCl, 50 mM Tris,pH 7.5)进行透析与自组装。Chem. Mater. 2015,27, 327-335. -Fe2O3与Fe3O4的TEM图谱及XRD图谱TEM图谱-Fe2O3Au NPs -Fe2O3Au NPsBMV与-Fe2O3Au NPsHBVVNPs冷冻电镜 图谱(100 nm scale bar) 16.5 分辨率重建图(C) BMV 结构(D) X-ray crystallography filtered 图(E) VNP 重建图1.86,0.74, 0.28, 0.12, 0.08, 0.

8、02 mM Fe病毒纳米颗粒修饰方法缺电子的重氮盐马来酰亚胺 卟啉 紫杉醇-120倍 超极化氙钆琥珀密码子抑制-180倍ACCOUNTS OF CHEMICAL RESEARCH, 2013, 44(9):774-783.the powerful method of amber codon suppressionP22病毒螯合Gd（III）复合物寡肽：GGLVPRGSGAS P22 K118C 和 S133C WB 载体先用马来酰亚胺或重氮盐活化，然后与 5 M Gd(III)DOTA 或Gd(III)DTPA药剂室温下混合孵育，并缓慢搅拌过夜， 透析去除过于的药物分子即可。注射前后的BALB/C裸鼠血管成像图A：P22 K118C载体与Gd(III)DOTA螯合；B： P22 K118C载体与Gd(III)DTPA螯合；C：水；D： P22 K118C载体；叶酸偶联N-羟基硫代琥珀酰亚胺聚己内酯乙烯基吡啶DOXHCl溶解于DMF （三乙胺），DMF预先混合含