醋酸纤维素膜电泳装置实验原理简介

1、醋酸纤维素膜电泳装置实验原理简介 一 操作1、醋酸纤维薄膜的预处理A 在膜片的无光泽面上用铅笔轻轻地画一条加样线。加样线可选在距膜片一端2CM处。B 在一培养器内装入电极缓冲液，将膜片小心地浮铺在电极缓冲液面上，一般是将膜片的无光泽面朝下。膜片的底面吸收电极缓冲液后便逐渐下沉，直至电极缓冲液将膜片完全浸没。C 待膜片在电极缓冲液内浸透数分钟后，用钝头镊子取出，夹在两层滤纸之间以吸去多余的电极缓冲液，但不可过干。D 在膜片无光泽面的加样线上进行加样，通常作线形加样，不作点状加样。用印模（长15mm，宽3mm的有机玻璃）蘸取血清蛋白样品“印盖”在加样线上。印盖时，注意印模两端到膜片边缘之间的距离基

2、本相等。E 样品的加样量或加样体积随样品的浓度，染色和检定方法等条件的不同而有较大的变化，通常每条加样线上加0.5mg蛋白质样品的量，如印盖一次不足量，可在原位再印盖一次。F 用钝头镊子将加过样的膜片安放在电泳槽膜支架上，膜片两端约10mm的部分与支架的顶面紧贴，醋酸纤维素膜依靠自身在电极缓冲液中的粘着力会紧绷在电泳槽两端的膜支架上。在同一电泳槽内同时安放几张膜片，相邻膜片之间应相距3mm以上。G 在电泳槽的两个电极室内注入适量的电极缓冲液，用长40mm滤纸23层作搭桥，滤纸条一端与支架前沿对齐，另一端侵入电泳槽的缓冲液。待滤纸条湿润后，去除气泡，使滤纸紧贴于支架上。H 用钝头镊子将加过样的膜

3、片安放在电泳槽的支架上，加过样的一端平贴在负极端支架，另一端平贴在正极端支架，呈绷状态。I 盖上电泳槽盖，让膜片在电泳槽内水平静置平衡10分钟。然后将电泳槽的两个电极与电泳仪直流电源的正负极分别相接。J 通上电源让电泳仪工作在稳压状态，电压调至120160V，相当于电场强度为1520V/cm，也可让电泳仪工作在稳流状态，电流强度视膜片多少而定，一般每厘米膜宽电流强度控制在0.40.8mA。电泳时间5070min。K 醋酸纤维素膜电泳通常在室温下进行。提高电场强度，可加快电泳速度。但在单位时间内膜上产生的热量也越高，导致缓冲液的大量蒸发，所以需要有效地冷却，避免膜片干燥。通常在冷却槽里放置自来水

4、，冷盐水和冰块不断冷却。L 电泳完毕。M 将膜片浸入为止。N 注意事项 膜片电泳前的预处理 醋酸纤维素膜对水的亲和力比纸小，电泳时要保证膜片上含有一定量的缓冲液，必须预先将膜片在缓冲液中浸透。浸膜的正确方法应该是将膜片小心地浮铺在缓冲液的表面上，依靠膜片的底面逐渐吸收缓冲液然后下沉到缓冲液中。如果一开始就将膜片全部浸没，膜片上会聚集许多小空气泡从而形成许多不透明的斑点，这就需要很长时间才能将膜片浸透，不仅浪费时间而且影响以后的分离效果。此外，膜片浸透后用滤纸吸去多余的缓冲液时既不能吸得太干也不能过湿。太干，不利于电泳分离；太湿，会影响加样，使样品线条扩散变宽，电泳时各组分的起始点参差不齐，从而影响分离效果。 2 、电极缓冲液浓度的选择 常用的pH8.6巴比妥缓冲液，其浓度一般都是在0.05mol/L到0.09mol/L之间进行选择的。选择时，先初步定上某一浓度，例如电泳槽内两极之间的膜条长度为810cm，每厘米膜长需要有电压25V，电流强度要求每厘米膜宽为0.40.5mA。如果电泳时达不到或超过这个值，就应增加缓冲液浓度或进行稀释。缓冲液浓度过低，所造成的影响是区带移动速度过快、区带宽度增大；缓冲液浓度过高，会使区带移动速度过慢，从而导致某些分离区带过于集中不易分辨。需要特别指出的是，在醋酸纤维素膜电泳中，由于电流的大部分是由样品传导的，因此会产生很多的热。有时所选择的缓冲液浓