深部真菌的研究进展2

1、郭兵申郭兵申绪论绪论一、真菌的概况二、该流行因素三、致病的机理四、真菌的基本知识五、试验诊断方法六、真菌药敏试验 深部真菌感染是指由深部真菌或条件深部真菌感染是指由深部真菌或条件致病性真菌致病性真菌( (机会致病性真菌机会致病性真菌) )侵犯内脏侵犯内脏引起的感染。引起的感染。 近年来，深部真菌感染的发病率和近年来，深部真菌感染的发病率和死亡率呈持续上升趋势，涉及到临床各死亡率呈持续上升趋势，涉及到临床各个学科，如：肺部真菌感染，消化道真个学科，如：肺部真菌感染，消化道真菌感染，血液病伴发真菌感染，肿瘤伴菌感染，血液病伴发真菌感染，肿瘤伴发真菌感染，外科烧伤伴发真菌感染，发真菌感染，外科烧伤伴

2、发真菌感染，妇科真菌感染，泌尿系统真菌感染，免妇科真菌感染，泌尿系统真菌感染，免疫缺陷患者真菌感染，骨髓移植患者的疫缺陷患者真菌感染，骨髓移植患者的真菌感染以及艾滋病的真菌感染，。真菌感染以及艾滋病的真菌感染，。 真菌的概况真菌的概况深部真菌的流行因素深部真菌的流行因素广谱抗生素广谱抗生素皮质类固醇皮质类固醇用免疫抑制剂用免疫抑制剂化疗的病人化疗的病人HIV感染病人感染病人肿瘤的病人肿瘤的病人肺部疾病的人肺部疾病的人手术烧伤病人手术烧伤病人ICU的病人的病人血液透析病人血液透析病人导管、插管等导管、插管等1高危人群高危人群 对容易感染系统性真菌感染对容易感染系统性真菌感染的患者，应及时发现，及

3、早进行预的患者，应及时发现，及早进行预防，尤其是在住院病人中更防，尤其是在住院病人中更 应应该注意防止院内感染。该注意防止院内感染。2 2、高危因素、高危因素深部真菌的流行因素深部真菌的流行因素血液肿瘤血液肿瘤骨髓移植骨髓移植实质器官移植实质器官移植HIV感染感染其他免疫障碍其他免疫障碍骨髓移植骨髓移植：血液肿瘤：血液肿瘤：2、高危因素的详解、高危因素的详解白血病进行化疗而引起粒细胞减少是引起真菌感染的一个重白血病进行化疗而引起粒细胞减少是引起真菌感染的一个重要原因。文献报导要原因。文献报导20%-50%并发有侵袭性真菌感染。其中最常并发有侵袭性真菌感染。其中最常见的致病真菌是白念珠菌和曲霉菌

4、。其次成人易感染光滑念珠见的致病真菌是白念珠菌和曲霉菌。其次成人易感染光滑念珠菌，儿童易感染近平滑念珠菌。粒细胞减少并发深部真菌感染菌，儿童易感染近平滑念珠菌。粒细胞减少并发深部真菌感染是主要致死原因。是主要致死原因。 易发生侵袭性曲霉菌感染，主要是因为宿主移植反应而易发生侵袭性曲霉菌感染，主要是因为宿主移植反应而应用免疫抑制剂应用免疫抑制剂,皮质类固醇所引起。文献报导，有皮质类固醇所引起。文献报导，有84%的的病人是死于曲霉菌或其他霉菌（镰刀菌，毛孢子菌，梨头病人是死于曲霉菌或其他霉菌（镰刀菌，毛孢子菌，梨头霉）感染。霉）感染。实质器官移植实质器官移植：2、高危因素的详解、高危因素的详解由于

5、需要应用免疫抑制剂来防止排斥反应而易于导致真菌感由于需要应用免疫抑制剂来防止排斥反应而易于导致真菌感染。如肝脏移植受体发生侵袭性真菌感染的机率约为染。如肝脏移植受体发生侵袭性真菌感染的机率约为7-24%，其中其中80%以上是由于念珠菌和曲菌感染，常在移植术后头以上是由于念珠菌和曲菌感染，常在移植术后头2个月个月内发生，死亡率达内发生，死亡率达50%-70%。HIV感染感染：HIV感染的免疫缺陷患者，特别容易发生真菌感染，如感染的免疫缺陷患者，特别容易发生真菌感染，如感染荚膜组织胞浆菌，马尔尼青霉、球孢子菌等，一些严感染荚膜组织胞浆菌，马尔尼青霉、球孢子菌等，一些严重的致死性真菌。重的致死性真菌

6、。2、高危因素的详解、高危因素的详解其他免疫障碍：其他免疫障碍： 免疫障碍时常并发真菌感染的危险，包括院内获得免疫障碍时常并发真菌感染的危险，包括院内获得性真菌感染。以念珠菌性真菌感染。以念珠菌,曲霉常见曲霉常见.其中曲菌是最严重的真其中曲菌是最严重的真菌感染之一。菌感染之一。曲菌有很多种可由空气传播，如可由医院的通风设备传播，曲菌有很多种可由空气传播，如可由医院的通风设备传播，医务人员的手可传播念珠菌引起院内感染，这也是一个重要医务人员的手可传播念珠菌引起院内感染，这也是一个重要的传播途径。所以洗手很重要，但尚未引起足够的重视。的传播途径。所以洗手很重要，但尚未引起足够的重视。深部真菌感染的

7、致病机理深部真菌感染的致病机理列列举举深部真菌感染的致病机理深部真菌感染的致病机理念珠菌致病机理：念珠菌致病机理：w 念珠菌为双形态真菌（即酵母相和菌丝念珠菌为双形态真菌（即酵母相和菌丝相），一般以芽生孢子的形式传播，不引起相），一般以芽生孢子的形式传播，不引起临床症状。当机体局部防御能力减退情况下临床症状。当机体局部防御能力减退情况下孢子大量繁殖，并转化为菌丝相黏附于黏膜孢子大量繁殖，并转化为菌丝相黏附于黏膜细胞上使之穿孔，通过所分泌的蛋白酶及水细胞上使之穿孔，通过所分泌的蛋白酶及水解酶而加重炎症损伤，并进一步繁殖扩散引解酶而加重炎症损伤，并进一步繁殖扩散引起一系列的病理变化。其毒力因子主要

8、是黏起一系列的病理变化。其毒力因子主要是黏附素，它是促进念珠菌黏附于宿主细胞的生附素，它是促进念珠菌黏附于宿主细胞的生物分子。物分子。深部真菌感染的致病机理深部真菌感染的致病机理曲霉菌致病机理：曲霉菌致病机理：231 烟曲菌可产生烟曲菌可产生烟曲菌素，粘帚烟曲菌素，粘帚霉素和烟曲霉酸霉素和烟曲霉酸以及内毒素，通以及内毒素，通过抑制免疫反应过抑制免疫反应或破坏局部组织或破坏局部组织引起疾病。引起疾病。 这些致病因子主要通过扰乱黏膜这些致病因子主要通过扰乱黏膜防御功能、抑制吞噬细胞功能，降防御功能、抑制吞噬细胞功能，降低调理作用，促进曲菌与组织黏附低调理作用，促进曲菌与组织黏附发挥作用。发挥作用。

9、 曲菌病临床表现，如过敏性曲菌病、曲菌病临床表现，如过敏性曲菌病、肺真菌球空洞、急性或慢性致死性侵入、肺真菌球空洞、急性或慢性致死性侵入、眼部感染、鼻曲菌病以及皮肤感染。眼部感染、鼻曲菌病以及皮肤感染。真菌的基本知识真菌的基本知识1、真菌的定义、真菌的定义2、真菌的分类及特性、真菌的分类及特性3、真菌的形态分类、真菌的形态分类真菌的定义：真菌的定义：真菌的基本知识真菌的基本知识 真菌属生物界，是微生物学的一个重要组成部分，其种类繁多，真菌属生物界，是微生物学的一个重要组成部分，其种类繁多，数量达上万种，体积大的如蘑菇、小的几微米需借助显微镜才能看数量达上万种，体积大的如蘑菇、小的几微米需借助显

10、微镜才能看到。医学真菌都属于微小真菌，是由菌丝和孢子组成的。菌丝呈微到。医学真菌都属于微小真菌，是由菌丝和孢子组成的。菌丝呈微细的管状，表面光滑，粗细一致，弯曲自然，菌丝两端整齐，无色细的管状，表面光滑，粗细一致，弯曲自然，菌丝两端整齐，无色或有色、分隔或不分隔。是由孢壁、孢浆、孢核、多细胞组成的菌或有色、分隔或不分隔。是由孢壁、孢浆、孢核、多细胞组成的菌丝体。孢子是真菌繁殖的最小单位，为单细胞、可芽生，具有孢壁、丝体。孢子是真菌繁殖的最小单位，为单细胞、可芽生，具有孢壁、孢浆、孢核。孢浆、孢核。真菌的基本知识真菌的基本知识真菌的分类及特性：真菌的分类及特性： 真菌包括的范围很广：医学真菌、药

11、用真真菌包括的范围很广：医学真菌、药用真 菌、菌、工业真菌、食用真菌。工业真菌、食用真菌。我们接触的主要是医学真菌它包括：我们接触的主要是医学真菌它包括： （1）致病性真菌（病原性真菌）致病性真菌（病原性真菌）： 浅部真菌浅部真菌引起各种皮肤真菌病。引起各种皮肤真菌病。 深部真菌深部真菌引起各种原发性或继发性的引起各种原发性或继发性的 深部真菌病（组织胞浆菌、深部真菌病（组织胞浆菌、 条件致病真菌一引起各种深部真菌感染条件致病真菌一引起各种深部真菌感染 （2）致敏性真菌：）致敏性真菌： 真菌过敏症真菌过敏症哮喘、过敏性肺炎、过敏哮喘、过敏性肺炎、过敏 性鼻炎、过敏性结膜炎、性鼻炎、过敏性结膜炎

12、、 过敏性皮炎等。过敏性皮炎等。（3）致毒性真菌：）致毒性真菌： 真菌中毒症真菌中毒症真菌污染或储藏在食物内（如真菌污染或储藏在食物内（如甘蔗）产生的代谢产物即真菌毒素，可引起甘蔗）产生的代谢产物即真菌毒素，可引起 严重严重的急性或慢性中毒。的急性或慢性中毒。（4）致癌性真菌：）致癌性真菌： 黄曲霉菌等多种真菌可产生致癌因子，引起黄曲霉菌等多种真菌可产生致癌因子，引起肝癌等。肝癌等。 (5)条件致病性真菌条件致病性真菌: 念珠菌、曲霉菌、毛霉菌、镰刀菌、青霉菌念珠菌、曲霉菌、毛霉菌、镰刀菌、青霉菌等。主要引起深部（系统等。主要引起深部（系统 性）真菌感染。性）真菌感染。 真菌的的病原学形态分类

13、：真菌的的病原学形态分类：（1）酵母菌）酵母菌： 酵母菌是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单酵母菌是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元；酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物；可元；酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物；可在缺氧环境中生存。目前已知有在缺氧环境中生存。目前已知有1000多种酵母。多种酵母。 （2）酵母样菌（条件致病菌）酵母样菌（条件致病菌）：真菌的的病原学形态分类：真菌的的病原学形态分类： 念珠菌属（白念珠菌、（热带念珠念珠菌属（白念珠菌、（热带念珠菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌等）菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌等） （3）霉菌（条件致病菌）霉菌（条件致病菌）：真菌的的

14、病原学形态分类：真菌的的病原学形态分类： 曲霉属（烟曲霉、黄曲霉属（烟曲霉、黄 曲霉）、青曲霉）、青霉属（马内菲青霉）、镰刀菌属（串霉属（马内菲青霉）、镰刀菌属（串珠镰刀菌、茄病镰刀菌）珠镰刀菌、茄病镰刀菌）（4）双相菌双相菌：真菌的的病原学形态分类：真菌的的病原学形态分类： 37呈酵母或孢子型，呈酵母或孢子型，25呈菌丝呈菌丝型、组织胞浆菌型、组织胞浆菌（5）细菌样真菌细菌样真菌：真菌的的病原学形态分类：真菌的的病原学形态分类：放线菌类（肺放线菌病）放线菌类（肺放线菌病）深部真菌感染的实验室诊断方法深部真菌感染的实验室诊断方法真菌感染已成为严重危及高危患者的并真菌感染已成为严重危及高危患者的

15、并发症。艾滋病最常见的感染也是真菌感染，发症。艾滋病最常见的感染也是真菌感染，发病率在发病率在80-90%80-90%，致死率很高。，致死率很高。深部真菌或条件致病性真菌感染的诊断、深部真菌或条件致病性真菌感染的诊断、治疗和预防已引起世界各国医学工作者的高治疗和预防已引起世界各国医学工作者的高度重视，也是我们医学领域的重点研究课题。度重视，也是我们医学领域的重点研究课题。深部真菌感染的实验诊断，显得更加重深部真菌感染的实验诊断，显得更加重要，它是治疗和预防深部真菌感染的前提。要，它是治疗和预防深部真菌感染的前提。深部真菌感染的实验室诊断方法深部真菌感染的实验室诊断方法真菌学检查的手段：真菌学检

16、查的手段：1.直接镜检直接镜检2.真菌培养真菌培养3.组织病理学检查组织病理学检查4.血清学方法：具有简便、快速、血清学方法：具有简便、快速、敏感性和特异性相对较高的特点。敏感性和特异性相对较高的特点。常用方法有半乳甘露聚糖实验，常用方法有半乳甘露聚糖实验，可以特异、定量检测曲霉菌可以特异、定量检测曲霉菌 。5. PCR技术：近年来随着分子生物技术：近年来随着分子生物学技术发展，应用学技术发展，应用PCR技术对深部真技术对深部真菌病快速诊断已成为关注的焦点。方菌病快速诊断已成为关注的焦点。方法有：分子探针、限制性酶切片段长法有：分子探针、限制性酶切片段长度多态性分析（度多态性分析（RFLP）、

17、）、DNA指纹指纹图谱、随机扩增图谱、随机扩增DNA多态性（多态性（RAPD）用于深部念珠菌感染的诊断研究。用于深部念珠菌感染的诊断研究。真菌学检查的手段：真菌学检查的手段：真菌感染实验诊断步骤：真菌感染实验诊断步骤：深部真菌感染的实验室诊断方法深部真菌感染的实验室诊断方法标本采集标本采集镜检镜检培养培养标本采集方法：标本采集方法：念珠菌念珠菌 痰标本：取清晨的痰液，必须先刷牙，清洗口腔，痰标本：取清晨的痰液，必须先刷牙，清洗口腔，应取深入气管或支气管的分泌物。鼻咽分泌物，唾液或应取深入气管或支气管的分泌物。鼻咽分泌物，唾液或口腔分泌物均不适宜作检查。所取标本应放在灭菌的容口腔分泌物均不适宜作

18、检查。所取标本应放在灭菌的容器内。器内。 便标本：取清晨第一次便，挑取不成形及带有粘液便标本：取清晨第一次便，挑取不成形及带有粘液样的便。样的便。 尿标本：外阴清洗后，取中段尿。根据感染累及的尿标本：外阴清洗后，取中段尿。根据感染累及的部位不同采集不同的标本，血液科部位不同采集不同的标本，血液科血液，神经内科血液，神经内科脑脊液，或活检组织。脑脊液，或活检组织。 曲霉菌感染是由多种曲霉引起，常侵犯肺、脑、眼、曲霉菌感染是由多种曲霉引起，常侵犯肺、脑、眼、耳、鼻、皮肤粘膜、神经系统或骨骼，引起急慢性炎耳、鼻、皮肤粘膜、神经系统或骨骼，引起急慢性炎症或肉芽肿等，严重者可发生曲霉败血症，甚至死亡，症

19、或肉芽肿等，严重者可发生曲霉败血症，甚至死亡，近年来又证明一些曲霉毒素可引起急性中毒和致癌。近年来又证明一些曲霉毒素可引起急性中毒和致癌。 曲霉属有曲霉属有18个群个群132个种，绝大部分为非致病菌。个种，绝大部分为非致病菌。致病性的曲霉有：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、致病性的曲霉有：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉和棒曲霉、杂色曲霉、米曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉和棒曲霉、杂色曲霉、米曲霉、灰绿曲霉、聚多曲霉、亮白曲霉、日本曲霉、阿姆斯丹曲霉、焦聚多曲霉、亮白曲霉、日本曲霉、阿姆斯丹曲霉、焦曲霉、局限曲霉、黄柄曲霉、多育曲霉。而以烟曲霉曲霉、局限曲霉、黄柄曲霉、多育曲霉。而以烟曲霉和

20、黄曲霉最多。和黄曲霉最多。 系统性曲霉菌感染：系统性曲霉菌感染：标本采集方法：标本采集方法： 直接镜检：直接镜检：A、氢氧化钾法、氢氧化钾法 将标本置于在玻片上，加一滴将标本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮载液，盖上盖浮载液，盖上盖玻片放置玻片放置510分钟后或直接在火焰上快速通过分钟后或直接在火焰上快速通过23次微加热，次微加热，轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查。先轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查。先在低倍镜下观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和在低倍镜下观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征、大小和排列等。对于角质标本，必要时可菌丝

21、的形态特征、大小和排列等。对于角质标本，必要时可在在10%KOH溶液中，加入终浓度为溶液中，加入终浓度为40%二甲亚砜，促进其溶二甲亚砜，促进其溶解。此法适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、解。此法适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、粪便等标本的直接涂片检查。粪便等标本的直接涂片检查。 直接镜检：直接镜检：B、胶带粘贴法、胶带粘贴法 用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭下，充分展平后，直接置贴于加有一后揭下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载玻片上此液可以是滴浮液的载玻片上此液可以是10%20%的的KOH，也可以采用乳酸酚棉蓝染液（易

22、于，也可以采用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花斑癣患处的直接检观察）。该法常用于花斑癣患处的直接检查。查。 真菌的培养：真菌的培养：A、念珠菌培养、念珠菌培养沙氏培养法沙氏培养法: 取标本接种于沙氏琼脂培养基上，分别放置于取标本接种于沙氏琼脂培养基上，分别放置于25和和37恒温箱内恒温箱内4872h，即有奶油色酵母样菌落生长。将菌落移种，即有奶油色酵母样菌落生长。将菌落移种到吐温琼脂基（小培养条件下）于到吐温琼脂基（小培养条件下）于2524h可产生顶端厚壁孢可产生顶端厚壁孢子子,即诊断为白念珠菌。未见厚壁孢子只有假菌丝为念珠菌属，即诊断为白念珠菌。未见厚壁孢子只有假菌丝为念珠菌属，进一

23、步作发酵实验和同化实验，可鉴定为哪一种念珠菌。进一步作发酵实验和同化实验，可鉴定为哪一种念珠菌。 科玛嘉显色培养法：科玛嘉显色培养法： 将标本接种于念珠菌显色培养基将标本接种于念珠菌显色培养基(科玛嘉显色培养基）的科玛嘉显色培养基）的表面，表面，372448h，可有酵母样菌落生长，根据菌落产生，可有酵母样菌落生长，根据菌落产生的不同颜色来鉴定念珠菌。的不同颜色来鉴定念珠菌。 真菌的培养：真菌的培养：B、系统性曲霉菌培养、系统性曲霉菌培养 ? 如果镜检见到曲霉菌的特点，培养可以如果镜检见到曲霉菌的特点，培养可以直接选用察氏培基，分别放在直接选用察氏培基，分别放在25和和37恒恒温培养箱内，温培养

24、箱内，3-5天即可生长出完整的菌落。天即可生长出完整的菌落。根据菌落的颜色和分生孢子头的结构特征，根据菌落的颜色和分生孢子头的结构特征，鉴定曲霉菌种。鉴定曲霉菌种。 ? 结构特征：分生孢子梗、顶囊、产孢结结构特征：分生孢子梗、顶囊、产孢结构（瓶梗或小梗）、分生孢子、有性期（壳构（瓶梗或小梗）、分生孢子、有性期（壳细胞、闭囊壳、子囊孢子）细胞、闭囊壳、子囊孢子） 白色念珠菌白色念珠菌热带念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌光滑念珠菌克柔念珠菌克柔念珠菌黄曲霉黄曲霉烟曲霉烟曲霉黑曲霉黑曲霉新型隐球菌新型隐球菌墨汁涂片墨汁涂片组织相组织相毛霉属毛霉属根毛霉根毛霉毛毛霉霉犁头霉犁头霉镰刀菌镰刀菌 真菌感染，不论

25、浅部真菌或深部真菌感真菌感染，不论浅部真菌或深部真菌感染，几乎全部依赖于临床标本的真菌学检查，染，几乎全部依赖于临床标本的真菌学检查，病原真菌的鉴定主要依靠其形态学。病原真菌的鉴定主要依靠其形态学。 方法：显微镜直接检查（镜检）、真菌方法：显微镜直接检查（镜检）、真菌培养及鉴定、组织学检查。其他特殊方法，培养及鉴定、组织学检查。其他特殊方法，有血清免疫学及分子生物学基因检测法等。有血清免疫学及分子生物学基因检测法等。 归纳小结归纳小结真菌药敏试验及真菌药真菌药敏试验及真菌药抗真菌药敏抗真菌药敏 近年来，深部真菌感染的发病率明显增高，新研制的抗近年来，深部真菌感染的发病率明显增高，新研制的抗真菌

26、药物也不断涌现，而耐药菌株在临床上也不断发生。真菌药物也不断涌现，而耐药菌株在临床上也不断发生。因此，开展抗真菌药物敏感实验，选择敏感的抗真菌药物因此，开展抗真菌药物敏感实验，选择敏感的抗真菌药物是实验室中一个重要的工作环节。是实验室中一个重要的工作环节。 抗真菌药物敏感实验主要是测定抗真菌药物对致病真抗真菌药物敏感实验主要是测定抗真菌药物对致病真菌的抑菌或杀菌作用。在最低药物浓度下可抑制全部病原菌的抑菌或杀菌作用。在最低药物浓度下可抑制全部病原真菌者称为最低抑菌浓度（真菌者称为最低抑菌浓度（MICMIC），有时还判定），有时还判定MIC50MIC50（5050真菌的真菌的MICMIC）及）及

27、MIC90MIC90（9090真菌的真菌的MICMIC）。在最低浓度下）。在最低浓度下可杀死全部真菌者为最低杀菌浓度（可杀死全部真菌者为最低杀菌浓度（F F）。）。 真菌药敏试验及真菌药真菌药敏试验及真菌药抗真菌药敏抗真菌药敏液基稀释法：液基稀释法：液基稀释法是美国国家临床试验标液基稀释法是美国国家临床试验标准委员会（准委员会（NCCLSNCCLS）分别于）分别于19971997年和年和20032003年推出了年推出了致病酵母菌抗真菌药物敏感试验方案致病酵母菌抗真菌药物敏感试验方案M27-AM27-A和产孢和产孢丝状真菌抗真菌药物敏感试验方案丝状真菌抗真菌药物敏感试验方案M38-AM38-A。

28、 这两个方案对于致病性真菌的培养基这两个方案对于致病性真菌的培养基pHpH值，培值，培养基的成分，接种浓度，孵育温度，时间，终点养基的成分，接种浓度，孵育温度，时间，终点判断等因素作了明确的规定，使得不同实验室之判断等因素作了明确的规定，使得不同实验室之间的结果客观，具有可比性，因此被称为标准试间的结果客观，具有可比性，因此被称为标准试验方案。验方案。抗真菌药敏抗真菌药敏 1.酵母样真菌药物敏感试验：酵母样真菌药物敏感试验： (1)微量液体稀释法：微量液体稀释法： 美国国家临床试验标准委员会推荐方法（美国国家临床试验标准委员会推荐方法（）用）用96孔微孔板孔微孔板(U型型)，每板第一排各孔，每

29、板第一排各孔(12孔孔) 内内分别加入培养基分别加入培养基180ul，第，第11孔为阴性对照，第孔为阴性对照，第12孔为孔为阳性对照；加入系列稀释浓度的待测药液阳性对照；加入系列稀释浓度的待测药液10ul依次加入依次加入相应药液于各孔内，阴性对照中加入相应药液于各孔内，阴性对照中加入20ul；加入菌悬液；加入菌悬液10ul，（阴性对照孔不加）；置于振荡板上振荡，（阴性对照孔不加）；置于振荡板上振荡5分钟分钟，使各液混匀，放入湿合内，于，使各液混匀，放入湿合内，于3524h。观察结果。观察结果。 本方法也可加入指示剂于培养基内，菌生长后由本方法也可加入指示剂于培养基内，菌生长后由兰色转为紫红色，

30、以无色泽变化为。兰色转为紫红色，以无色泽变化为。 (2)琼脂扩散法：琼脂扩散法： 将待测的真菌掺入琼脂基内，将药敏片置于培将待测的真菌掺入琼脂基内，将药敏片置于培养基表面，孵育养基表面，孵育48h48h后，根据纸片周围真菌生长后，根据纸片周围真菌生长被抑制的范围来确定该抗菌剂对此真菌的抑制作被抑制的范围来确定该抗菌剂对此真菌的抑制作用。如同时应用系列浓度药敏片可测出。用。如同时应用系列浓度药敏片可测出。(3)纸片扩散法：（试剂盒）纸片扩散法：（试剂盒） 似细菌药敏的方法。将菌株划线接种于培养似细菌药敏的方法。将菌株划线接种于培养基表面，放入不同的药物纸片，培养基表面，放入不同的药物纸片，培养4

31、8h48h，观察抑，观察抑菌环的大小。同时用不同浓度的纸片，可观察菌环的大小。同时用不同浓度的纸片，可观察。此种方法简单易行，不需要复杂设备，可。此种方法简单易行，不需要复杂设备，可作为抗真菌药物的初筛方法作为抗真菌药物的初筛方法。 抗真菌药敏抗真菌药敏(4)鉴定药敏法：（改良法）鉴定药敏法：（改良法） 采用科玛嘉念珠菌培养基，将临床标本用采用科玛嘉念珠菌培养基，将临床标本用生理盐水稀释，用棉拭子将标本稀释液划线于生理盐水稀释，用棉拭子将标本稀释液划线于培养基表面，再放入药敏片，培养基表面，再放入药敏片，48h48h后，产生不后，产生不同颜色的菌株，同时出现抑菌环，根据抑菌环同颜色的菌株，同时

32、出现抑菌环，根据抑菌环的大小，确定药物敏感程度，也可进行的大小，确定药物敏感程度，也可进行的测定。的测定。抗真菌药敏抗真菌药敏2.霉菌（丝状真菌）药敏试验：霉菌（丝状真菌）药敏试验： (1)试管药基法试管药基法： 将药物倍比稀释的方法加入培养基内，将药物倍比稀释的方法加入培养基内，然后接种菌种，观察。然后接种菌种，观察。 (2)纸片法：纸片法： 将培养出的丝状菌（曲霉菌）制成菌悬将培养出的丝状菌（曲霉菌）制成菌悬液，划线接种于培养基表面，放入药敏片，观液，划线接种于培养基表面，放入药敏片，观察药物敏感情况。察药物敏感情况。 抗真菌药敏抗真菌药敏药敏药敏(微量法微量法)药敏药敏(琼脂扩散法琼脂扩

33、散法)抗真菌药物抗真菌药物（1 1）氟康唑：）氟康唑： 是三唑类抗真菌药物，有口服剂，静脉注是三唑类抗真菌药物，有口服剂，静脉注射剂。目前治疗系统性真菌感染应用最广的一射剂。目前治疗系统性真菌感染应用最广的一种药物，其优势有静脉注射剂。抗菌作用对酵种药物，其优势有静脉注射剂。抗菌作用对酵母菌（新型隐球菌）、酵母样菌（念珠菌属）母菌（新型隐球菌）、酵母样菌（念珠菌属）有抗菌作用，对霉菌组、双相菌组作用较低。有抗菌作用，对霉菌组、双相菌组作用较低。对克柔氏念珠菌、光滑念珠菌无明显的抗菌作对克柔氏念珠菌、光滑念珠菌无明显的抗菌作用，虽然对白念珠菌有很好的抗菌作用，但近用，虽然对白念珠菌有很好的抗菌作

34、用，但近年来对白念珠菌产生耐药的菌株也逐渐增多。年来对白念珠菌产生耐药的菌株也逐渐增多。抗真菌药物抗真菌药物（2）伊曲康唑（斯皮仁诺）伊曲康唑（斯皮仁诺） 是一种具有广谱活性的三唑类抗真菌药是一种具有广谱活性的三唑类抗真菌药物，有口服剂，静脉注射剂。对酵母菌（新物，有口服剂，静脉注射剂。对酵母菌（新型隐球菌）、酵母样菌（念珠菌属）、霉菌型隐球菌）、酵母样菌（念珠菌属）、霉菌（曲霉属）、双相菌（组织胞浆菌），有广（曲霉属）、双相菌（组织胞浆菌），有广谱的抗菌作用，广泛用于治疗系统性念珠菌谱的抗菌作用，广泛用于治疗系统性念珠菌和系统性曲霉菌的感染。和系统性曲霉菌的感染。 抗真菌药物抗真菌药物（3）

35、伏力康唑）伏力康唑 是新型的广谱三唑抗真菌药，对念珠菌的活是新型的广谱三唑抗真菌药，对念珠菌的活性比氟康唑高性比氟康唑高8-13倍，并且对氟康唑耐药的菌株倍，并且对氟康唑耐药的菌株克柔氏念珠菌和光滑念珠菌有效。在与伏力康唑，克柔氏念珠菌和光滑念珠菌有效。在与伏力康唑，氟康唑，伊曲康唑和两性霉素氟康唑，伊曲康唑和两性霉素B对比研究中发现，对比研究中发现，伏力康唑具有更广的抗菌谱，它对新型隐球菌的伏力康唑具有更广的抗菌谱，它对新型隐球菌的抗菌活性优于氟康唑和伊曲康唑，并且对临床上抗菌活性优于氟康唑和伊曲康唑，并且对临床上的难以治疗的烟曲霉感染的患者具有较好的疗效。的难以治疗的烟曲霉感染的患者具有较

36、好的疗效。抗真菌药物抗真菌药物（4 4）特比奈芬：）特比奈芬： 丙稀胺类抗真菌药物，仅有口服剂，为丙稀胺类抗真菌药物，仅有口服剂，为新型的杀真菌药物，对霉菌组作用强，新型的杀真菌药物，对霉菌组作用强， 疗效疗效好，但对念珠菌属抗菌作用较低。好，但对念珠菌属抗菌作用较低。（5）棘白菌素类抗真菌药）棘白菌素类抗真菌药 卡泊芬净（商品名：科赛斯）为杀菌剂，卡泊芬净（商品名：科赛斯）为杀菌剂，与两性霉素与两性霉素B B相似，对各种曲霉（烟曲霉，黄相似，对各种曲霉（烟曲霉，黄曲霉，土曲霉，黑曲霉）均有较强的抗菌活曲霉，土曲霉，黑曲霉）均有较强的抗菌活性，对白念珠菌和非白念珠菌及克柔氏念珠性，对白念珠菌和非白念珠菌及克柔氏念珠菌和光滑念珠菌也有较好的抗菌活性。对新菌和光滑念珠菌也有较好