第10章 吸光光度法

1、第第1节节 物质对光的选择性吸收和光吸收的基本定律物质对光的选择性吸收和光吸收的基本定律 射射线线x射射线线紫紫外外光光红红外外光光微微波波无无线线电电波波10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm 0.1 cm 10cm 103 cm 105 cm可可 见见 光光400-750nm光的波粒二象性光的波粒二象性hchEE：光子的能量（：光子的能量（J, 焦耳）焦耳）蓝蓝黄黄紫红紫红绿绿紫紫黄绿黄绿绿蓝绿蓝橙橙红红蓝绿蓝绿物质吸收光的本质物质吸收光的本质hchEEE02h S2S1S0S3E2E0E1E3h h h 透光度（透射透光度（透射比）定义：比）定义：0IITtT 取值为取值

2、为0.0 % 100.0 %全部吸收全部吸收T = 0.0 %全部透射全部透射T = 100.0 %入射光入射光 I0透射光透射光 ItIrIa一束一束平行单色光平行单色光通过任何通过任何均匀、非散射均匀、非散射的固体、液体或气体介质的固体、液体或气体介质 I0 = Ia + It + Ir I0 = Ia + It 三、光吸收的基本定律三、光吸收的基本定律朗伯朗伯比耳定律比耳定律 （Lambert-beers law Lambert-beers law ） Lambert Beer LawI0dbbItII-dIdI N IN ：薄层中的吸光粒子数：薄层中的吸光粒子数N = N0 c dS

3、dbN0 ：阿伏加德罗常数：阿伏加德罗常数 dS ：捕获面积，薄层中被光照射的面积。：捕获面积，薄层中被光照射的面积。c：吸光溶液的浓度吸光溶液的浓度N = k c db故故 dI N I = I kc dbdI = - I k c db ,bIIcdbkIdIt00dI / I = - k c dbkcbIIt0ln积分积分得得KcbkcbIIt303. 2lg0或或AKcbTlg得得AKcbTlgT ： 透光率透光率A： 吸光度吸光度1.00.50ACA100500T %TKbcAT1010T = 0.0 %A = T = 100.0 %A = 0.0A = 0.434T = 36.8 %

4、KcbA b ：吸光层的厚度，光程，：吸光层的厚度，光程， cmc：吸光物质的浓度，吸光物质的浓度， g / L, mol / LK：比例常数：比例常数入射光波长入射光波长物质的性质物质的性质温度温度取值与浓度的单位相关取值与浓度的单位相关c：mol / LK 摩尔吸光系数，摩尔吸光系数， L mol 1 cm -1c：g / LK a吸光系数，吸光系数， L g 1 cm -1cbAacbA c：g / 100 mLK 比比吸光系数吸光系数%11cmEcbEAcm%11MaEcm1010%11相互关系相互关系 Molar AbsorptivityAbsorptivity Specific e

5、xtinction coefficient比吸光系数比吸光系数%11 cmE桑德尔（桑德尔（Sandell ）灵敏度）灵敏度 SS 值表示值表示 光程（光程（path lenth ) 为为1 cm 吸收池测得吸光度为吸收池测得吸光度为 0.001 时，每时，每mL 溶液中待测物质的微克数。单位为溶液中待测物质的微克数。单位为 g cm-2。MS Sandell 灵敏度灵敏度与与 的关系的关系摩尔吸光系数摩尔吸光系数 灵敏度灵敏度 多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具有加合性，即度具有加合性，即iiiiiiiicbbcAA第第2 2节节

6、 吸光光度计及吸收光谱吸光光度计及吸收光谱1、目视比色法、目视比色法标准系列（色阶）标准系列（色阶）未知样品未知样品特点特点利用自然光利用自然光比较吸收光的互补色光比较吸收光的互补色光准确度低（半定量）准确度低（半定量）不可分辨多组分不可分辨多组分方法简便，灵敏度高方法简便，灵敏度高3、分光光度法、分光光度法（紫外（紫外-可见分光光度法）可见分光光度法）UV-VISUltraviolet Visual Spectroscopy0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示I0It参比参比样品样品bCTIIAtlglg0入射光入射光 I0透射光透射光 It请注意与定义比较请注意与

7、定义比较未考虑吸收池和溶剂对光子的作用未考虑吸收池和溶剂对光子的作用分光光度计及其基本部件分光光度计及其基本部件紫外紫外-可见分光光度计组件可见分光光度计组件光源光源单色器单色器吸收池吸收池比色皿比色皿检测器检测器信号输出信号输出氢灯，氘灯，氢灯，氘灯，185 350 nm； 卤钨灯，卤钨灯，250 2000 nm.基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定作用：将复合光色散成单色光作用：将复合光色散成单色光棱镜棱镜光栅光栅玻璃，玻璃， 350 2500 nm, 石英，石英，185 4500 nm平面透射光栅，平面透射光栅， 反射光栅反射光栅玻璃，光学玻璃，石英玻

8、璃，光学玻璃，石英作用：将光信号转换为电信号，并放大作用：将光信号转换为电信号，并放大光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄像管（多道分析器）像管（多道分析器）表头、记录仪、屏幕、数字显示表头、记录仪、屏幕、数字显示0.5cm0.5cm、1cm1cm、2cm2cm、3cm 3cm 0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示差值差值光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示切光器切光器721721型分光光度计仪器结构示意图型分光光度计仪器结构示意图1722722型分光光度计型分光光度计 测量某物质对不同波长单色测量某物质对不同波

9、长单色光的吸收程度，以波长（光的吸收程度，以波长（ ）为为横坐标，吸光度（横坐标，吸光度（A）为纵坐标，）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得一绘制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为吸收光谱。曲线，此曲线即为吸收光谱。(a)(b)(c)(d) 220 240 260 280 nm A0000(a) 联苯（己烷溶剂）；联苯（己烷溶剂）；一些典型的紫外光谱一些典型的紫外光谱(b) 苯（己烷溶剂）；苯（己烷溶剂）；(c) 苯蒸汽；苯蒸汽；(d) Na蒸汽。蒸汽。 （1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长度最大处对

10、应的波长称为最大吸收波长max （2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似max不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和max则不同。则不同。ABA )(maxA)(maxBA C增增大大 （3）吸收曲线可以提供物质）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。析的依据之一。 （5）在在max处吸光度随浓度处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。入射光波

11、长的重要依据。 （4）不同浓度的同一种物质，不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度在某一定波长下吸光度 A 有差异，有差异，在在max处吸光度处吸光度A 的差异最大。的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依此特性可作为物质定量分析的依据。据。AC吸收定律吸收定律A或或 吸收光谱吸收光谱A C max显色反应显色反应：在光度分析中，将试样中被测组分转变成在光度分析中，将试样中被测组分转变成有色化合物的化学反应有色化合物的化学反应有机物质有机物质官能团强吸收官能团强吸收直接测定直接测定UV-VIS官能团弱吸收官能团弱吸收衍生化反应衍生化反应UV-VIS显色反应无机物质无机物质通常通过显色反应生

12、成吸光系数大的有色通常通过显色反应生成吸光系数大的有色物质进行测定，以提高灵敏度物质进行测定，以提高灵敏度3Fe2+3NN+NNFe2+桔红色 max邻二氮菲显色剂：显色剂：与被测组分生成有色化合物的试剂与被测组分生成有色化合物的试剂 1、对显色反应的要求、对显色反应的要求1、显色反应的灵敏度要高，其摩尔吸收系数应比较大。、显色反应的灵敏度要高，其摩尔吸收系数应比较大。2、显色反应的选择性要高、显色反应的选择性要高3、有色化合物的组成要恒定，化学性质要稳定、有色化合物的组成要恒定，化学性质要稳定4、对比度要大，即有色化合物与显色剂之间的颜色差别、对比度要大，即有色化合物与显色剂之间的颜色差别

13、应尽可能大。一般要求有色化合物与显色剂的最大吸应尽可能大。一般要求有色化合物与显色剂的最大吸 收波长之差应大于收波长之差应大于60nm。5、显色过程要易于控制。、显色过程要易于控制。 重现性重现性2、显色剂、显色剂无机显色剂无机显色剂有机显色剂有机显色剂a. 磺基水杨酸磺基水杨酸 属于属于OO型螯合剂，主要用于测定型螯合剂，主要用于测定Fe3+ 酸度不同，络合物配比不同，颜色也不同酸度不同，络合物配比不同，颜色也不同b. 丁二酮肟丁二酮肟 属于属于NN型螯合剂，主要用于测定型螯合剂，主要用于测定Ni2+ 形成红色络合物形成红色络合物c. 1,10-邻二氮菲邻二氮菲 属于属于NN型螯合剂，主要用

14、于测定型螯合剂，主要用于测定Fe2+ 形成橘红色络合物形成橘红色络合物e. 偶氮胂偶氮胂（铀试剂（铀试剂） 属于偶氮类螯合剂，主要用于测定属于偶氮类螯合剂，主要用于测定Th()、Zr()、U()等等d. 二苯硫腙二苯硫腙 属于含属于含S显色剂，主要是萃取光度法测定显色剂，主要是萃取光度法测定Cu2+、Pb2+、Zn2+、Cd2+、Hg2+等的试剂等的试剂f. 铬天青铬天青S 属于三苯甲烷类螯合显色剂，主要用于测定属于三苯甲烷类螯合显色剂，主要用于测定Al3+g. 结晶紫结晶紫 属于三苯甲烷类碱性染料，主要用于测定属于三苯甲烷类碱性染料，主要用于测定Tl3+a. 混配化合物混配化合物b. 离子缔

15、合物离子缔合物c. 金属离子金属离子-配体配体-表面活性剂体系表面活性剂体系3、多元络合物、多元络合物二、影响显色反应的因素二、影响显色反应的因素1、反应体系的酸度、反应体系的酸度2、显色剂的用量、显色剂的用量3、显色反应时间、显色反应时间 4、显色反应温度、显色反应温度 5、溶剂、溶剂6、溶液中共存离子的影响、溶液中共存离子的影响 1、酸度的选择、酸度的选择酸度的影响酸度的影响影响显色剂的平衡浓影响显色剂的平衡浓度和颜色度和颜色 M + nR = MRnOH-H+影响被测组分的存在状影响被测组分的存在状态态 RH = R- + H+ 1 2影响络合物的组成影响络合物的组成 例，磺基水杨酸例，

16、磺基水杨酸 Fe 3+pH = 1.8 2.5FeR紫红色紫红色pH = 4 8FeR2棕褐色棕褐色pH = 8 11.5FeR3黄色酸度的选择酸度的选择理论计算理论计算nnnMRRMlglglgnnMRnRMlglglglgR(H)M(OH)RnnnpHR(H)M(OH)，pHlgMMRn以以作图作图可得适宜可得适宜pH范围范围实际工作中，作实际工作中，作 A pH 曲线，寻找适宜曲线，寻找适宜 pH 范围。范围。ApHM + nR = MRnOH-H+2、显色剂的用量、显色剂的用量M + nR = MRnnnRMMRnlglglgRnMMRnn定量反应定量反应%9.99MMRn3lglgR

17、nnnRnlg3lg实际工作中，作实际工作中，作 A CR 曲曲线，寻找适宜线，寻找适宜 CR 范围。范围。ACR3、温度的选择、温度的选择实际工作中，作实际工作中，作 A T 曲线，寻找适宜曲线，寻找适宜 反应温度。反应温度。ATATATATAT4、反应时间的选择、反应时间的选择实际工作中，作实际工作中，作 A t 曲线，曲线，寻找适宜寻找适宜 反应时间。反应时间。5溶剂溶剂6溶液中共存离子的影响溶液中共存离子的影响 第第4节节 吸光光度分析及误差控制吸光光度分析及误差控制测量波长的选择测量波长的选择无干扰，选择无干扰，选择 max有干有干“吸收最大，干扰吸收最大，干扰最小最小”的原则的原则

18、扰，扰，AA待测溶液吸光度的选择待测溶液吸光度的选择控制控制A = 0.2 0.8 方法方法选择选择 c选择选择 b1、非单色光非单色光影响小影响小2、灵敏度高灵敏度高一、测量条件的选择一、测量条件的选择参比液的选择参比液的选择原则：原则：扣除非待测组分的吸收扣除非待测组分的吸收以显色反应为例进行讨论以显色反应为例进行讨论M + R = M-R max试液试液 显色剂显色剂 溶剂溶剂 吸光物质吸光物质 参比液名称及组成参比液名称及组成无吸收无吸收无吸收无吸收光学透明溶剂参比溶剂参比 溶剂溶剂基质吸收基质吸收无吸收无吸收 吸收吸收试液参比试液参比 不不加显色剂的试液加显色剂的试液无吸收无吸收吸收

19、吸收 吸收吸收 试剂参比试剂参比 不加试液的溶液不加试液的溶液基质吸收基质吸收吸收吸收吸收吸收吸收吸收退色参比退色参比 显色剂显色剂 + 试液试液 + 待待 测组分的掩蔽剂测组分的掩蔽剂若欲测若欲测 M-R 的吸收的吸收 maxA （样）（样） = A （待测吸光物质）（待测吸光物质） + A （干扰）（干扰）+ A （池）（池）A （参比）（参比） = A （干扰）（干扰）+ A （池）（池）目的：消除由于吸收池壁目的：消除由于吸收池壁及溶剂、试剂对入射光的及溶剂、试剂对入射光的反射和吸收带来的误差，反射和吸收带来的误差，并可扣除干扰的影响并可扣除干扰的影响 微量组分的分析微量组分的分析单组

20、分的测定单组分的测定纯物质或共存物质不干扰纯物质或共存物质不干扰1 1、标准比较法、标准比较法A=b csA=b cxxxssAccA2 2、标准曲线法（工作曲线法）、标准曲线法（工作曲线法） 横坐标：横坐标： 标准溶液的浓度（加入体积）标准溶液的浓度（加入体积）ACs纵坐标：相应的吸光度纵坐标：相应的吸光度cs与与cx相近相近多组分的测定多组分的测定解联立方程法解联立方程法AXY 1 2根据加合性原则根据加合性原则yxAAA111yyxxbcbc11yxAAA222yyxxbcbc22解联立方程，可求得解联立方程，可求得Cx, Cy 为物质的特征参数，可通过配制标为物质的特征参数，可通过配制

21、标准溶液测得。准溶液测得。ACs(x)x1x2三、三、对朗伯对朗伯-比耳定律的偏离比耳定律的偏离主要原因主要原因非单色光非单色光吸光质点的相互作用吸光质点的相互作用负误差负误差正误差正误差介质不均匀引起的偏离介质不均匀引起的偏离 对吸收光谱而言，对吸收光谱而言，b 和和 c 固定，固定，iKA反映了反映了 随波长变化的情况，单随波长变化的情况，单一波长，一波长， 固定；不同波长，固定；不同波长， 不同。因此，非单色光将导致不同。因此，非单色光将导致对吸光定律的偏离。对吸光定律的偏离。A或或 1 2在实际工作中，入射光通常具有一定的带通。为了避免非单色在实际工作中，入射光通常具有一定的带通。为了

22、避免非单色光带来的影响，一般选用峰值波长进行测定。光带来的影响，一般选用峰值波长进行测定。 1 对应的对应的 1较小较小 2 对应的对应的 2较大较大选用峰值波长，也可以得到较高的灵敏度。选用峰值波长，也可以得到较高的灵敏度。质点间的静电作用质点间的静电作用质点间的缔合作用质点间的缔合作用质点间的化学反应质点间的化学反应例，聚合引起的对吸光定律的偏离例，聚合引起的对吸光定律的偏离单体：SNH+(CH3)2NN(CH3)22SNH+(CH3)2NN(CH3)2 2 max = 660 nm二聚体： max = 610 nmAC max = 660 nmA660 nm610 nm化学反应的影响化学

23、反应的影响M + L = ML maxbCAML吸光定律吸光定律 光度法测定通常在一个较大的浓度范围内作工作光度法测定通常在一个较大的浓度范围内作工作曲线，当曲线，当 或随着浓度的变化而变化，或随着副反应或随着浓度的变化而变化，或随着副反应的变化而变化时，就表现出对吸光定律的偏离。的变化而变化时，就表现出对吸光定律的偏离。bCAM实际计算实际计算四、消除干扰的方法四、消除干扰的方法 1、控制溶液酸度、控制溶液酸度 2、加入掩蔽剂、加入掩蔽剂 3、改变干扰离子的价态、改变干扰离子的价态 4、利用参比溶液消除显色剂和某些共存有色离子的干扰、利用参比溶液消除显色剂和某些共存有色离子的干扰 6、选择适

24、当的波长、选择适当的波长 7、分离干扰离子、分离干扰离子5、增加显色剂用量、增加显色剂用量五、吸光度测量的误差五、吸光度测量的误差吸光度标尺刻度是不均匀的吸光度标尺刻度是不均匀的 光度计中光度计中透光度的标尺刻度是均匀的透光度的标尺刻度是均匀的透光度读数误差透光度读数误差T T约为约为0 001 01 A=bcdA=bdcdc dc 为测量结果为测量结果c c 的测量误差的测量误差 d dA A 为测量吸光度为测量吸光度A A 时的测量误差时的测量误差dcdAcAA=lgT=0.434lnT0.434dTdAT TTTAAlndd100%100%100%lnrdcdAdTEcATT0.4341

25、00%100%100%lnlgrcTTEcTTTT T 在在15%-6515%-65（吸光度吸光度A A 在在0.2-0.80.2-0.8之间），之间），测量的相对误差较小。测量的相对误差较小。T=36.836.8或或 A A=0.434=0.434时，测量结果的相对误差最小。时，测量结果的相对误差最小。第第5节节 其他吸光光度法其他吸光光度法示差吸光光度法示差吸光光度法1、基本原理、基本原理常规法常规法以空白溶剂为参比以空白溶剂为参比xxIIA0lgxbc示差法示差法以浓度为以浓度为 Cs 的标准溶的标准溶液为参比液为参比)(sxccbxsxIIAlg00IIsxIIII00lglgsxAA

26、 xcbsxxcccACCxA（Cx Cs）适宜适宜 高高 浓度的测定浓度的测定思考：（思考：（Cx Cs）时情况怎样）时情况怎样？2、示差法的误差、示差法的误差方法方法定量原理相对误差常规法常规法xxxTbcAlgsxrIIT 示差法示差法rxcTcbAlgxxTxcTTdcdxlnxrTxcTTdcdxln Tr Tx0IITxx I0 Isxcxccdcdxx有结论：示差法提高了准确度结论：示差法提高了准确度例题已知已知 dT = 0.01, 样品样品Tx = 2.00 %, 标准标准 Ts = 10.0 %示差法示差法sxrIIT %0 .200 .1000. 2xxTxcTTdcdx

27、ln02. 0lg02. 0434. 001. 0%8 .12xrTxcTTdcdxln常规法误差常规法误差示差法误差示差法误差02. 0lg20. 0434. 001. 0%28. 1sxTT示差法提高准确度的实质示差法提高准确度的实质常规法常规法TxT0 5 1050100 落在测量落在测量误差误差较较 大大 的范围的范围高浓度高浓度示差法示差法T0 5 1050100TrTsTs 落在测量落在测量误差误差较较 小小 的范围的范围示差法通过改变仪器的定位使透射率的刻度标尺读数扩展示差法通过改变仪器的定位使透射率的刻度标尺读数扩展示差法通过提高测量的准确度提高了方法的准确度示差法通过提高测量

28、的准确度提高了方法的准确度结论：结论：双波长分光光度法双波长分光光度法光光源源单色器单色器单色器单色器检测器检测器切切光光器器狭狭缝缝吸吸收收池池 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光光( (1 1和和2 2) )；以参比波长；以参比波长2 2处的吸光度处的吸光度A A22作为参比，来作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。波长法有所提高。

29、 双波长分光光度法双波长分光光度法21AXY21AAA）（yxyxAAAA2211)(yyAA21xxAAA21xxxbCA）（21Y 的存在不干扰的存在不干扰 X 的测定的测定 因只用一个吸收池，而且以试液本身对某一波长的光的因只用一个吸收池，而且以试液本身对某一波长的光的吸光度为参比，因此，消除了因试液与参比液及两个吸收吸光度为参比，因此，消除了因试液与参比液及两个吸收池之间的差异所引起的测量误差，提高了测量的准确度。池之间的差异所引起的测量误差，提高了测量的准确度。 1、选定的波长选定的波长1 1和和2 2处干扰组分应具有相同吸光度，处干扰组分应具有相同吸光度，即：即： Ay = y =

30、 A y y22 A y y11 = 0 = 0故：故： Ax+y = x+y = A x=(x=(x x22x x11) )bcbcx x此时：测得的吸光度差此时：测得的吸光度差A只与待测组分只与待测组分x x的浓度呈线性关系的浓度呈线性关系，而与干扰组分，而与干扰组分y y无关。若无关。若x x为干扰组分，则也可用同样的方为干扰组分，则也可用同样的方法测定法测定y y组分。组分。 可采用作图法选择符合可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合上述两个条件的波长组合。 2 2、在选定的两个波长、在选定的两个波长1 1和和2 2处待测组分的吸光度应具有足处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。够

31、大的差值。导数分光光度法导数分光光度法 在双波长分光光度计上，如果在双波长分光光度计上，如果使用的两个波长很接近，进行同时扫使用的两个波长很接近，进行同时扫描，并保持两波长差不变，便可获得描，并保持两波长差不变，便可获得一阶导数光谱。一阶导数光谱。导数光谱导数光谱：吸光度随波长变化率对波长的曲线：吸光度随波长变化率对波长的曲线nnd Adn 阶导数阶导数 1、能够分辨两个或两个以上严重重叠的吸收峰、能够分辨两个或两个以上严重重叠的吸收峰 2、能够分辨吸光度随波长急剧上升处所掩盖的弱、能够分辨吸光度随波长急剧上升处所掩盖的弱吸收峰吸收峰 3、能够确认宽阔吸收带的最大吸收波长、能够确认宽阔吸收带的

32、最大吸收波长 导数光谱谱带比原吸收光谱窄，减少了与干扰谱带导数光谱谱带比原吸收光谱窄，减少了与干扰谱带交迭的可能性，提高了抗干扰能力。交迭的可能性，提高了抗干扰能力。导数光谱可去除背景干扰，提高分别率。导数光谱可去除背景干扰，提高分别率。 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。等方面，显示了很大的优越性。导数分光光度法导数分光光度法定量分析的理论基础：定量分析的理论基础： nnnnd Adbcdd1、峰、峰-谷法谷

33、法2、基线法、基线法3、峰、峰-零法零法测量导数光谱峰值的方法：测量导数光谱峰值的方法：第六节第六节 吸光光度法的应用吸光光度法的应用一、痕量金属分析一、痕量金属分析二、临床分析二、临床分析三、食品分析三、食品分析四、其他应用四、其他应用弱酸和弱碱解离常数的测定弱酸和弱碱解离常数的测定 aHBHBHBKHBlgaHBpKpHBHBcHBBHBHBBBHBHBaHBBaaAAAHBBcHcKKHKH 设某波长下，设某波长下，HB和和B-都有吸收，都有吸收，b=1cm，根据，根据吸光度的加和性：吸光度的加和性： 在高酸度时，弱酸几乎以在高酸度时，弱酸几乎以HB形式存在：形式存在：HBHBHBAc在

34、强碱性时，弱酸几乎以在强碱性时，弱酸几乎以B-形式存在：形式存在：HBBBAc HBaBaAHA KAKHaHBBKAAAAHlgHBaBAApKpHAA 络合物的组成的测定络合物的组成的测定摩尔比法测络合比（饱和法）摩尔比法测络合比（饱和法）M + nR = MRnCM, 固定；固定；CR, 从从 0 开始增大开始增大在特定波长测定在特定波长测定 R = 0, M = 0, MRn 0ACR/CMn R 0, M 0, MRn =0ACR/CMn等摩尔连续变化法（等摩尔连续变化法（Job）测络合比）测络合比M + nR = MRnCM+ CR = 常数常数CM / C 从从 0 1在特定波长测定在特定波长测定 R = 0, M = 0, MRn 000.51.0ACM / C0.33n = 1, CM / C =0.5n = 2, CM / C =0.3300.51.0ACM / C R 0, M 0, MRn =0填空填空 1、苯酚在水溶液中摩尔吸收系数、苯酚在水溶液中摩尔吸收系数为为6.17103moL/L，若，若要求使用要求使用1cm吸收池时的透光度为吸收池时的透光度为0.150.65，则苯酚的浓，则苯酚的浓度应控制在度应控制在 2、多组分分光光度法可用解联立方程的方法求得各组、多组分分光光度法可用解联立方程的方法求得各组分的含量，这是基于分的含量，这是