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文档简介

1、第九章第九章 基因突变基因突变第一节第一节 寡核苷酸介导的基因突变寡核苷酸介导的基因突变第二节第二节 盒式突变法盒式突变法第三节第三节 利用利用PCR进行进行DNA序列的突变序列的突变第四节第四节 随机突变随机突变基因突变是研究基因表达调控和蛋白质的结构功能基因突变是研究基因表达调控和蛋白质的结构功能的重要方法的重要方法 位点特异性突变位点特异性突变 寡核苷酸介导的基因突变；盒式突变；寡核苷酸介导的基因突变；盒式突变；PCR 随机突变随机突变第一节第一节 寡核苷酸介导的基因突变寡核苷酸介导的基因突变步骤：步骤：（1）正链）正链DNA的合成的合成（2）突变引物的合成）突变引物的合成 17-19个

2、个特异性特异性避免自身的二级结构避免自身的二级结构位置尽量在中间位置尽量在中间（3）异源双链）异源双链DNA分子的制备分子的制备（4）转染）转染（5）突变体的筛选）突变体的筛选（6）突变体的鉴定（测序）突变体的鉴定（测序）1、Kunkel突变法突变法 dUTP dUMP dUTP酶酶 dut- dUTP库库 尿嘧啶尿嘧啶N糖基化酶糖基化酶 ung- 胸腺嘧啶残基被尿嘧啶所取代胸腺嘧啶残基被尿嘧啶所取代利用利用Kunkel法，以法，以M13噬菌体噬菌体DNA为载体进行为载体进行寡核苷酸介导的位点特异性突变寡核苷酸介导的位点特异性突变2、硫代磷酸硫代磷酸寡核苷酸介导的突变寡核苷酸介导的突变 某些限

3、制性内切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷某些限制性内切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷酸间连键酸间连键硫代磷酸寡核苷酸介导的突变硫代磷酸寡核苷酸介导的突变第二节第二节 盒式突变法盒式突变法第三节第三节 利用利用PCR进行进行DNA序列的突变序列的突变1、在基因的、在基因的5或或3末端产生突变末端产生突变2、重叠延伸重叠延伸和基因突变和基因突变（1）取代突变）取代突变（2）插入突变）插入突变（3）缺失突变）缺失突变3、产生分子嵌合体、产生分子嵌合体重叠延伸重叠延伸PCR对对DNA片段进行剪接的原理图片段进行剪接的原理图利用双侧重叠延伸利用双侧重叠延伸PCR，产生取代突变，产生取代突变利用双侧重叠延伸利用双侧重叠延伸PCR，产生插入突变，产生插入突变利用双侧重叠延伸利用双侧重叠延伸PCR，产生缺失突变，产生缺失突变双侧重叠延伸及双侧重叠延伸及DNA分子嵌合体形成分子嵌合体形成单侧重叠延伸及单侧重叠延伸及DNA分子嵌合体形成分子嵌合体形成第四节第四节 随机突变随机突变1、化学、物理方法、化学、物理方法亚硝酸、亚硫酸盐、羟胺、肼及弱酸水解亚硝酸、亚硫酸盐、羟胺、肼及弱酸水解2、酶法、酶法3、PCR法法改变

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