食用菌栽培01菌种生产

1、会计学1食用菌栽培食用菌栽培01菌种生产菌种生产菌种一级菌种二级菌种三级菌种从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。菌种类型菌种类型制种容制种容器器培养培养基基菌株来源菌株来源用途用途要求要求一级菌种一级菌种（ 母种、母种、试管种）试管种）试管PDA、PSA种菇（孢子或菌肉组织） 扩制二级种菌种保藏 纯度高，质量好，绝对无杂菌 二级菌种二级菌种（原种）（原种）菌种瓶固体培养基一级菌种 扩制三级菌种 纯度高，质量好，无杂菌三级菌种三级菌种（栽培种）（栽培种）罐头瓶、菌种袋固体培养基二级菌种 用于栽培 高纯度，高

2、质量，无杂菌 种菇一级菌种二级菌种三级菌种栽培三级种培养基制备高压或常压灭菌接种三级菌种栽培培养斜面一级种培养基制备高压灭菌接种培养筛选提纯原始种中试后确定一级种保存孢子或组织分离一级种转管、扩大菌种瓶二级种培养基制备高压灭菌接种培养二级菌种罐头瓶菌种袋配制培养基灭菌接种培养仓库配料室灭菌室接种室培养室办公室栽培棚门口晒料场缓冲间：23m2接种间：56m2面积79m2高2.22.5m要求 6个面平滑两门错开、平拉式顶装紫外灯清洁物品放缓冲间消毒 移物至接种间 喷消毒液 10min 后接种消毒液清洁 使用观察窗紫外灯操作孔双人单人枪匙钩铲镊耙针环接种要求光线暗；密闭好、通风性强；能升温、降温（空

3、调机）；有培养架手提式高压灭菌锅高压锅外锅：装水内锅：装物锅盖安全阀排气阀压力表类型天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：原料来源状态液体：营养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%2%琼脂表面形状斜面培养基平板培养基粉状条状属天然植物多糖 融点96以上凝点40 以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用琼脂PDA 培养基培养基PSA 培养基培养基马铃薯（去皮）马铃薯（去皮）200g马铃薯（去皮）马铃薯（去皮）200g葡萄糖葡萄糖 20g 蔗糖蔗糖20g琼脂琼脂1820g琼脂琼脂1820g水水1000ml水水1000ml煮沸20min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融

4、后加余料融化琼脂调节pH值勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌包扎成捆1%NaOH或HCl 棉籽壳培养基棉籽壳培养基主料主料棉籽壳棉籽壳87，麦麸，麦麸10辅料辅料白糖白糖1，石灰，石灰1，过磷酸钙，过磷酸钙1棉壳、麦麸干混余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量配制谷粒培养基谷粒培养基主料主料麦粒、玉米粒等麦粒、玉米粒等98.5%辅料辅料石膏粉石膏粉1%,碳酸钙碳酸钙0.5%调pH与分装 pH：一般为8.0左右原种培养基装大口瓶栽培种培养基装菌种袋 颗粒洗净，1%石灰水泡胀文火煮沸1520min晾至无明水后拌入余料配制杀死一切微生物，包括芽孢。灭菌分为杀菌：菌体尚存溶菌：菌体消失消毒：只杀死病原菌

5、，未伤及芽孢防腐：暂时抑制微生物生长除菌：用冲洗、过滤等法，除去微生物（一）原理高温使菌体蛋白质、核酸、酶等凝固或变性失活。（二）方法 湿热灭菌 干热灭菌干热灭菌热源火焰及热空气特点简便、快速、范围有限方法小的金属、玻璃器皿酒精灯烧烘箱烤大的玻璃、金属器皿器皿包装1601702h干燥箱使用注意70以下开箱取物勿超180随用随开包 湿热灭菌热源热蒸气或热水特点范围广、温度低、效果好、时间短方法高压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌巴氏消毒蛋白质凝固点与其含水量的关系蛋白质含水量蛋白质含水量(%)(%)凝固温度凝固温度()()5050252518186 60 05656747480808080909014514

6、5160160170170热蒸气穿透力大蛋白质凝固点随其含水量的增加而降低干热灭菌与湿热灭菌穿透力的比较加热加热方式方式传导传导介质介质温度温度()()加热加热时间时间（h h）透过布层温度（透过布层温度（）结果结果2020层层4040层层100100层层干热干热空气空气130130140140 4 48686 72 727070以下以下灭菌灭菌不完不完全全湿热湿热饱和饱和蒸汽蒸汽 105.3 105.3 3 3101101 10l 10l 10l 10l灭菌灭菌完全完全1.高压蒸气灭菌概念利用高压产生的高蒸汽温度杀灭微生物的方法 原理水沸点随热蒸汽压力的增加而升高密闭锅 蒸气多 压力高 沸点

7、高步骤：装锅加热排气升压保压灭菌降压出锅关键：排净冷空气注意灭菌时间和压力因物而异升降压力要稳灭菌时间从保压时算起压力降至“0”才能开盖使用排气纯蒸气压力与温度的关系1kg/cm2=0.098Mpa(兆帕）=98Kpa（千帕）2.常压蒸气灭菌概念利用常压产生的100蒸汽温度进行灭菌的方法 特点设备简，成本低，灭温低，时间长用法 一次性灭菌（100 ，10余h)尽快达到100 达到100 时开始计时灭菌中勿降温，勿干锅1.常压蒸气灭菌3.巴氏消毒概念利用低于100的温度杀灭有害微生物的方法 培养料堆积发酵料温6070杀死有害微生物方法概念 利用电子射过水银气体 产生的紫外线而杀菌的方法 杀菌机理

8、直接：使蛋白质、酶等变性失活间接：空气中产生臭氧或过氧化氢使用有效距离：1.52.0m理想波长：265nm30w紫外灯照30min避光30min便携式透力很弱定期更换灯管只起辅助作用伤眼睛和皮肤特点利用化学药剂杀灭或抑制微生物的方法概念抑菌剂消毒剂灭菌剂浓度液态：喷雾、浸泡、洗刷等气态：加热、焚烧、氧化等状态划分（一）要求密闭条件下保持一定时间（二）种类甲醛气雾盒机理：结合蛋白质氨基， 使其变性 。喷：5%熏：10ml/m3+1/2KMnO4用法1.甲醛有刺激性和腐蚀性固体或液体药品水药液（多现配现用）概念种类氧化剂熟石灰表面活性剂乙醇酚类新洁尔灭（一）氧化剂氧化菌体蛋白质的活性基团，使其变性

9、。 机理种类高锰酸钾过氧化氢漂白粉过氧乙酸1.高锰酸钾紫色针状结晶 0.1%0.2%浸泡手、器具等。 2.过氧化氢无色液体，属环保型消毒剂3%皮肤、伤口消毒 6浸泡器皿30min3.漂白粉2%5%浓度洗刷、喷雾、浸泡湿处可干撒 作用约30min使用注意原品密封随配随用对衣物有退色和腐蚀性4.过氧乙酸无色至微黄色液体，有刺激性、腐蚀性、挥发性。 1.5%熏蒸7ml/m30.2%洗手0.5%浸泡0.5%喷雾使用（二）表面活性剂脱水剂脂溶剂蛋白质变性剂1.乙醇7075效果最好 皮肤、器皿擦拭或浸泡浓度高浓度效果差无水的无杀菌作用3.新洁尔灭0.25%消毒皮肤、浸泡器具0.5%喷雾2.酚类石炭酸：3%

10、5%浸泡或喷雾来苏尔刺激性小效力比苯酚强4倍3%5%喷雾、擦洗2%消毒手过程接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多过程用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上过程用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上表面老菌丝及老种块勿接入菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等外观好差丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等退化母种好母种栽培出菇快产量高品质好抗逆性强仍正常生长适温培养7天 3035 锻炼4h 再适温培养仍正常生长湿：15g琼脂/1000ml培养基 适宜：16.5g琼脂/1000ml培养基干：18g琼脂/1000ml培养基具有菌丝白（符合该菌种的颜色）均

11、匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快菌种种类品种名称菌种级别代 时生产厂家接种日期用于生产没有无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象产生原基黄水污染孢子分离法概念特点操作过程利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌孢子的采集孢子的分离孢子的萌发孢子分离法多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法多孢分离单孢分离单个孢子萌发获得纯菌种的方法整菇插种法钩悬法孢子印法平板稀释法连续稀释法毛细血管法组织分离法将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法简单易行保持原菌种性状适用于大型肉质子实体重

12、复多易退化种菇选择种菇消毒切取组织块移接组织块至斜面中央培养特点概念操作过程（以伞菌为例）基内菌丝分离法概念特点适用范围从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法易感染杂菌子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难混合菌丝培养类型，如银耳，多采用此法使菌种不死亡不生长不污染，不降低或不丧失其优良性，以尽量延长使用时间。保藏目的保藏原理创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。特点简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类 1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中（36个月）无菌检验 ？注入种管淹没斜面约1cm矿油处理灭菌：152kpa、30min去水：4050烘至无色透明 口堵胶塞用时转管再转管基质的处理麦粒浸透、煮熟麸皮拌湿装管防衰老保藏时间长转接后生长旺易污染，灭菌要彻底特点灭菌接种培养干燥器去水概念 确保或恢复菌种优良性能的措施 （一）菌种的衰退形态改变、生长慢、抗逆性差、产量及质量下降表现根源内因 菌种的遗传物质发生了负变 外因 传代过多，条件不适宜1.定期分离菌种组织分离母种孢子分离再生母种栽培子实体2. 经常改变培养条件 3.转