如何读懂ADVIA 2120散点图

1、如何读懂ADVIA 120 报告中的散点图1. Hgb Reaction Chamber ( not visible)2. Baso Reaction Chamber3. RBC Reaction Chamber4. Retic Reaction Chamber5. Perox Reaction Chamber6. Shear Valve7. Reagent Pump Assembly原理模式图原理模式图HBE1132A HB比色计B BASO反应室C RBC反应室D 网积反应室E PEROX 反应室1 激光器2 ADVIA 120 鞘流/冲冼液3 ADVIA 120 PERO鞘流液4 PER

2、OX 流式细胞池5 RBC/BASO/RETIC 流式细胞池 RBCBASORETICPERO54 Mie 原理是光学法测定的基础 ：对于球体化的物体，如果它的直径（D)满足：2/ D10 /, 一定角度的折射光强度则决定于该物体的体积和密度ADVIA 120 的测量原理7细胞激光计数 ADVIA 120 唯一使用的细胞计数方法 白细胞计数和分类 红细胞计数 血小板计数 网织红细胞计数 CSF计数过氧化物酶染色分析Eosinophil Neutrophil Monocyte Basophil Lymphocyte Heat/SDSFormaldehyde(Dil 1)4-Chloro-Naph

3、thol (Dil 2)H2O2 (Dil 3)RBC 过氧化物酶通道的测量原理细胞化学反应细胞化学反应试剂试剂 1试剂试剂 2,3细胞细胞EoNeutMonoBasoRBCLymphAB.C被固定的胞内PEROX酶酶反应沉积部位A：外周血各种血细胞B：RBC被溶解，WBC胞浆渗出，PEROX酶被固定。C：色源显色并沉积在酶反应部位过氧化物酶通道的测量原理散射光检测细胞大小原理散射光检测细胞大小原理光光(小)细胞外直径(大)细胞外直径散射光散射光散射光检测（散射光检测（体积体积） 当细胞快速通过光检测区时，入射到细胞上的激光首先在细胞表面产生散射，由此获得有关细胞大小的信息。 细胞体积越大检测

4、到的散射光越多。 入射到细胞内部的光通过细胞时，由于各种WBC的酶反应强度不同，透过光的强弱不一。 酶反应越强，吸收的光越多，透过光越弱。透过光检测细胞透过光检测细胞PEROX原理原理透过光检测透过光检测过氧化物酶通道的测量原理光酶反应部位ADVIATM 120 PEROX 鞘液鞘液功能：功能：限制样本流使得在同一时间只有一个细胞通过检测区防止样本流与流通池间的接触，达到预防阻塞和流通池着色的作用。提供一个光的透明介质，在细胞流通过时能被清楚地聚焦。返回过氧化物酶染色散点图参数参数WBCP%NEUT#NEUT%LYMPH#LYMPH%MONO#MONO%EOS#EOS%LUC#LUC解释解释W

5、BC计数中性粒细胞百分比中性粒细胞绝对值淋巴细胞百分比淋巴细胞绝对值单核细胞百分比单核细胞绝对值嗜酸性粒细胞百分比嗜酸性粒细胞绝对值大的不染色细胞百分比大的不染色细胞绝对值过氧化物酶通道的测量原理报告参数报告参数过氧化物酶通道的测量原理供实验室内部或研究使用的参数供实验室内部或研究使用的参数参数%HPXClumps countValley countLymph ModeMPXINEUTXNEUTYNoise/Lymph valleyPEROX% d/DPEROX% Dead TimePEROX%SaturationPEROX FlatnessPEROX Flatness解释高PEROX活性细胞

6、的百分比PEROX细胞图中血小板团区的事件数PEROX细胞图中有核红细胞的事件数淋巴细胞群的模式通道平均过氧化物酶活性指数中性粒细胞群的X通道平均值中性粒细胞群的Y通道平均值噪声与淋巴细胞群间的谷通道分离噪声与淋巴细胞群间谷的相对深度测定时间中由于通道忙而不能对别的事件作出响应的时间所占百分比来自噪声区的事件百分比来自浸透区的事件百分比Sum of the squared differences9XMean cell counting RateEND有核红细胞异性淋巴细胞原始细胞不成熟粒细胞杆状核粒细胞血小板聚集难溶性红细胞嗜碱染色/核分叶性分析Eosinophil Neutrophil Mo

7、nocyte Basophil Lymphocyte HeatPhthalic AcidSurfactantRBC 核通道的测量原理裸核嗜碱性粒细胞低角度散射光检测低角度散射光检测嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞 当细胞通过光检测区，产生散射，散射角度越低，所含有关细胞大小的信息越多。 由于嗜碱性粒细胞保持完整，因此检测到的低角度（2-3）散射光要比细胞裸核大得多，从而轻易地与其他白细胞区别开来。时间强度强度时间返回嗜碱性粒细胞/核通道的测量原理单叶核多叶核高角度散射光检测高角度散射光检测核形结构核形结构 高角度散射光，包含有关细胞核形的信息。 核分叶越多，检测到高角度（5-15）散射光就越多，从而把

8、单叶核（MN）与分叶核 (PMN) 区分开来，并从PMN/MN的比率，可估计“核左移”的程度。强度时间时间强度返回ADVIATM 120 鞘鞘/冲洗液冲洗液功能：功能：作为嗜硷、作为嗜硷、红细胞红细胞/血小板和网织红细胞测定的光鞘血小板和网织红细胞测定的光鞘 限制样本流使得在同一时间只有一个细胞通过检测区 防止样本流与流通池间的接触，达到预防阻塞和流通池着色的作用。 提供一个光的透明介质，在细胞流通过时能被清楚地聚焦。为嗜硷、为嗜硷、红细胞红细胞/血小板和网织红细胞测定冲洗血小板和网织红细胞测定冲洗，清洁每个通道。，清洁每个通道。提供血红蛋白测定的基线。提供血红蛋白测定的基线。嗜碱染色散点图

9、(正常样本)核通道的测量原理报告参数报告参数参数WBCB%BASO%BASO解释来自核通道测量的WBC 计数嗜硷性粒细胞占的百分比嗜硷性粒细胞占的绝对值核通道的测量原理供研究或实验室室内部使用的参数供研究或实验室室内部使用的参数参数参数%BASO Suspect%BLAST%MN%PMN%PMN RatioBASO% Dead TimeBASO% NoiseBASOO% SaturationBASO FlatnessLIMNxMnyPMNx解释解释可疑淋巴细胞占百分比原始细胞占的百分比单个核区占的百分比多叶核占的百分比%PMN/（%NEUTS+%EOS）测定时间中由于通道忙而不能对别的事件作出

10、响应的时间所占百分比噪声区的百分比浸透区占的百分比Sum of the squared Differences9xMean Cell Counting RatePMNx/MNxx轴通道中单个核区的峰值Y轴通道中单个核区的峰值x轴通道中多叶核区的峰值END嗜碱染色散点图 (细胞数极少)原始细胞异性淋巴细胞不成熟粒细胞杆状核细胞增多有核红细胞高脂血症综合病例 Acute Leukemias 综合病例 Chronic Leukemias综合病例 Lymphomas综合病例 Refractory anemia with excess blasts综合病例 Chronic Infection综合病例 A

11、cute Myeloblastics Leukemia (M5)红细胞/血小板方法学RBCPLTSDSGlutaraldehydeRBC/Platelets通道的测量原理RBC/PLT试剂细胞球形固定细胞球形固定RBCPlatelets等体积的球形变化及固定消除细胞形态对体积测定的影响参考文献：Tycko PH，Met MH,Epstein EA, Grinbaum:红细胞体积与血红蛋白的流式细胞光散射测定，应用光学24（9）：）：1355-1365（1985）RBC的分析原理RBCHB外直径散射光散射光激光束激光束时间时间强度强度低角度（低角度（0-50-5）散射光检测体积）散射光检测体积高

12、角度高角度(5-15)散射光检测散射光检测HB散射光检测散射光检测RBC/Platelets与嗜碱细胞/分叶核使用相同的检测通道， 红细胞和血小板先通过检测区，从低角度的散射光检测得到RBC体积的信号，从高角度的散射光检测得到HB浓度的信号。RBC/Platelets通道的测量原理RBC报告参数报告参数参数RBC MCV RDW CHCM HDW CH HCTMCHMCHC解释红细胞计数红细胞平均体积红细胞体积分布宽度红细胞血红蛋白浓度均值血红蛋白浓度分布宽度单个细胞的血红蛋白含量红细胞压积平均红细胞血红蛋白平均红细胞血红蛋白浓度带为直接测定参数,其余为推算参数.RBC/Platelets通道

13、的测量原理供实验室内部或研究使用的供实验室内部或研究使用的RBC参数参数参数CHDWRBC FlatnessRBC%Dead TimeRBC Coin LevelRBC Coin CountRBC R CountRBC P CountRBC Valid Cells#MICRO%MACRO%MICRO%HYPER%HYPO%MICRO/%HYPER RATIO解释红细胞血红蛋白分布宽度Sum of the squared Differences9xMean Cell Counting Rate测定时间中由于通道忙而不能对别的事件作出响应的时间所占百分比红细胞偶然事件的水平RBC散射细胞图上偶然事

14、件的计数RBC散射细胞图中红细胞的量RBC散射细胞图中血小板的量从流通池事件中获得的有效信号数RBC直方图中体积为（30-60fl）的细胞计数大红细胞占的百分比小红细胞占的百分比高色素红细胞占的百分比低色素红细胞占的百分比%MICRO/%HYPERRBC/Platelets通道的测量原理红细胞光散射的Mie Map图On ADVIA 120, laser light scatter from isovolumetrically sphered RBC can be described using Mies theory, i.e., the amount of laser light scat

15、tered over a given angular range is determined by cell volume and cell density (hemoglobin concentration) 红细胞体积红细胞体积 （fl） 每个红细胞内血红蛋白浓度每个红细胞内血红蛋白浓度 (g/dL) HypoHyper120fL60fL28g/dL41g/dLMacroMicro红细胞九分图 红细胞九分图的直观分析 纵座标Hgb ConcentrationCell volume大红细胞增多症大红细胞增多症小红细胞增多症小红细胞增多症红细胞九分图的直观分析 横座标Hgb Concentra

16、tionCell volume低色素性贫血低色素性贫血高色素性贫血高色素性贫血红细胞九分图的临床应用举例缺铁性贫血和轻型地中海贫血的鉴别诊断 两种贫血都是因为血红蛋白合成障碍所致,均属于小细胞低色素性贫血 但发病机理迥然不同 阻抗法血球计数仪测量无法鉴别阻抗法测红细胞计数仪所见 缺铁性贫血 地中海贫血正常样本缺铁性贫血 缺铁性贫血兼有小细胞和低色素正常样本正常样本轻型地中海贫血轻型地中海贫血 地中海贫血主要是小红细胞结论结论MCV = 61.1 fLM/H ratio = 0.63 Diagnosis = Iron DeficiencyMCV = 66 fLM/H ratio = 2.05Di

17、agnosis = -ThalassemiaMCV = NormalG. dOnofrio, et al.Arch Path Lab Med 1998 116:84-89%Micro/%Hypo 0.9: 轻型地中海贫血轻型地中海贫血PLT的分析原理散射光检测散射光检测检测到的低角度散射光被放大30次得到PLT的体积的信号，检测到的高角度的散射光被放大12次得到血小板的折射率信号。通过这些信号血小板被测定。30次放大12次放大转换为体积信号转换为折折射率信号低角度（低角度（2-32-3）散射光检测体积）散射光检测体积高角度（高角度（5-15）散射光检测折射率）散射光检测折射率流式细胞光散射法计

18、数血小板高角度激光散射高角度激光散射 低角度激光散射低角度激光散射 血小板区域血小板区域4 42 23 35 51 1红细胞红细胞红细胞碎片红细胞碎片3大血小板大血小板5 影形红细胞影形红细胞折射指数折射指数鉴别血小板和其它干扰因素鉴别血小板和其它干扰因素PLT报告参数报告参数RBC/Platelets通道的测量原理参数:PLTMPV解释:血小板计数平均血小板体积供实验室内部或研究使用的供实验室内部或研究使用的PLT参数参数RBC/Platelets通道的测量原理参数:Large PLTMPCMPMPCDWP Count-2DPCTPDWPLTNPLTXPLTYPMDWR Count-2DRB

19、C-2D CountRBC FragmentsRBC Ghosts解释:大血小板计数平均血小板成分浓度血小析成分分布宽度在血小板测定中血小板的原始计数血小板压积血小板体积平均分布宽度血小板折射率平均值血小板高角度信号(放大)平均值血小板低角度信号(放大)平均值在血小板测定中红细胞原始计数在血小板测定中红细胞计数红细胞碎片计数红细胞影计数血小板血小板碎片碎片 红细胞碎片红细胞碎片影形红细胞影形红细胞临床实例 大血小板大血小板血小板聚集血小板聚集网织红细胞分析技术将红细胞等量球体化 将网织红细胞内的RNA染色网织红细胞的测定原理细胞化学反应细胞化学反应autoRETIC试剂RBCPlatelets

20、消除细胞形态对体积测定的影响RETIC younger RETICStep 1Step 2等体积的球形变化及固定染色（RNA含量）网织红细胞散点图高角度激光散射低角度激光散射MCVrCHCMrRetic Haemoglobin ContentV*HCCHr网织红细胞成熟度IRF 细胞体积Oxazine 750 吸光度网织红细胞的测定原理报告参数报告参数参数#Retic%ReticCHr解释网织红细胞绝对值网织红细胞百分比网织红细胞平均血红蛋白含量网织红细胞的测定原理供实验室内部或研究使用的供实验室内部或研究使用的RETIC参数参数参数RTC RBCRTC FlatnessRTC% Dead TimeRTC% NoiseMean AbsorptionABS Low Cell countABS ModeRTC Valid Cells解释网织红细胞测定中的红细胞计数Sum of the squared Differences9xMean Cell