微生物实验课葡萄球菌属

1、实验一 葡萄球菌属Staphylococcus 温州医科大学附属第一医院 医学检验中心 微生物室 徐春泉 生物安全1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；2、长发的同学，一定要把头发扎起来，不能散发；3、不必要物品勿带入实验室，不允许带课本到微生物实验室,不得将实验室内任何物品（特别是菌种）带出室外。4、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。5、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。6、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师及时适当处理。7、实验完毕后物归原处，并清洁

2、桌面；肥皂洗手，关闭水、电、和门窗方可离开实验室。回顾复习革兰染色的步骤细菌的分离培养 革兰染色法（Gram染色）染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液、95乙醇、稀释石炭酸复红染色方法：结晶紫 初染卢戈碘液 媒染95乙醇 脱色稀释石炭酸复红 复染1分钟30S1min1分钟30S平板细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 分区划线法 用接种环先将标本涂布在平板第一区并作数次划线，再在二、三、四区依次用接种环划线。每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。每一区域应接触上一区域的接种线3-5次，使菌量逐渐减少

3、，以形成单个菌落。回顾复习1.葡萄球菌属的主要生物学特性2.葡萄球菌属内主要菌种的鉴定和鉴别3.主要鉴定试验的方法和原理 触酶试验 血浆凝固酶试验 DNA酶试验 葡萄糖氧化发酵试验 新生霉素敏感试验 1)触酶试验:2)血浆凝固酶:判断标准(葡萄球菌属)：在短时间内(10s)出现大量、汹涌气泡者为阳性。出现颗粒状凝集为阳性。3)葡萄糖OF试验：4)DNA酶试验：左侧为产碱型中间为发酵型右侧为氧化型1mol/L盐酸覆盖平板，5分钟后观察结果，菌落周围出现透明环者为阳性。5)新生霉素敏感试验:新生霉素敏感试验(S16mm)实验目的 了解葡萄球菌的形态及染色特性.熟悉葡萄球菌的培养及生化特性.掌握葡萄

4、球菌与微球菌的区别要点.学习金黄色葡萄球菌的鉴定及其与表皮,腐生葡萄球菌的区别 实验器材 菌种：每组1套 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 微球菌培养基： 平板：血平板,普通营养琼脂平板,M-H平板,DNA酶琼脂平板 生化反应管：葡萄糖OF管,甘露醇氧化发酵管 试剂：新生霉素纸片(NV5ug/片),新鲜兔血浆,革兰染液,1N HCl 实验内容一、形态与染色特点(显微镜：4B211)二、分离培养 普通营养琼脂平板(四种菌，1只/每人） 血琼脂平板(四种菌，1只/每人） 三、生化反应和其他鉴定试验 葡萄糖氧化发酵试验(四种菌，1份/每人） 甘露醇氧化发酵试验(四种菌，1份/每人） DNA

5、酶试验(四种菌，2只/每组） 新生霉素敏感试验(四种菌，1只/每组） 触酶试验(四种菌） 血浆凝固酶试验 玻片法注：玻片、平板琼脂面、玻璃试管做好标记！ 有菌意识，无菌操作！注意酒精量！ 实验报告书写（两份）1.实验题目 2.实验目的3.实验原理 4.实验材料 （菌种、培养基、试剂）5.实验方法 （步骤） 6.实验结果（现象、结果：表格用三线表描述） 7.结果分析（实验体会，总结，与理论不符分析）8.思考题实验结果记录方法(三线表示例)*实验结果记录注:菌名必须写全称(或中或英)结果观察1、血平板、MH平板： 观察，记录菌落的形态、大小、表面、边缘、色素、透明度、出现单个菌落区域及多少；并用量尺测量新生霉素抑菌圈直径。(S16mm，R16mm.)2、 DNA琼脂平板：取出滴加1层1N的HCl，5分钟后观察记录结果。菌落周围出现透明环为阳性。3、葡萄糖OF,甘露醇OF管： 发酵型：不加石蜡管、加石蜡管均变黄色 氧化型：不加石蜡管变黄色，加石蜡管不变色（紫色） 产碱型：不加石蜡管及加石蜡管均不变色触酶试验取营养琼脂平板上的单个菌落于玻片上，再滴加1d3%过氧化氢酶并记录结果。(注意顺序!)判断标准(葡萄球菌属)：在短时间内(10s)出现大量、汹涌气泡者为阳性。取生理盐水各一滴于玻片的两端，挑取细菌与上述生理盐水中制成菌悬液，在其中一测加入新鲜兔血浆并混匀，若血浆出现颗