第十六章基因诊断GeneDiagnosisppt课件

1、第十六章 基因诊断Gene Diagnosis.基因诊断以DNA或RNA为诊断资料，经过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体形状和疾病作出诊断的方法和过程.第一节 基因诊断的技术方法.一、基因诊断中常用的分子生物学方法 核酸分子杂交 PCR SSCPPCR-SSCP 限制酶酶谱分析 DNA序列测定 DNA芯片技术. 核酸分子杂交制备样品制备探针杂交检测获得称心的高特异性杂交的关键是控制好杂交条件和杂交后冲洗条件.杂交双链的稳定程度主要由Tm值决议，影响Tm值的要素包括：双链的碱基组成、长度、碱基错配程度溶液离子强度变性剂的影响在无变性剂存在的情况下，最适杂交发生在比DNA/DNA Tm低20

2、25，比DNA/RNA Tm低1015. PCR普通与其它技术合用 单链构象多态性SSCP检测PCR- SSCP由于检测点突变. 限制酶酶谱分析基因突变导致酶切位点的丧失或相对位置发生改动 DNA序列测定 DNA芯片技术.二、基因诊断的根本方法基因变异致病的类型：内源基因的变异基因构造的突变点突变、插入、缺失、重排、异位基因表达异常mRNA剪接异常外源基因的插入.基因突变的诊断点突变的诊断诊断知的点突变 PCR/ASO 一对探针突变碱基置探针中央控制杂交条件结果分析：反向杂交技术基因芯片技术：可检测出新的突变类型.诊断未知的突变 PCR/SSCP/测序DNA芯片技术.针对不同的点突变可采用的方

3、法PCR和限制酶酶解PCR/ASOH等位基因特异的PCR变性梯度凝胶电泳PCR/SSCPPCR/双脱氧指纹法DDFPCR/测序.少数核苷酸缺失或插入的诊断大片段丧失或插入的诊断PCR/多重PCR基因重排染色体易位的诊断基因扩增的诊断.多态性连锁分析DNA多态性在同种生物不同个体的基因组中，常存在一些不影响基因功能的DNA顺序变异，称为DNA多态性polymorphism.DNA多态性标志 RFLP短串联反复序列short tandom repeat, STR单核苷酸多态性single nucleotide polymorphism, SNP.限制性片段长度多态性RFLPDNA酶切Souther

4、n杂交分析DNAPCR 酶切电泳分析由串联反复顺序导致的长度多态性STR含有较高的信息量且容易检测STR由26个核苷酸串联反复组成，微卫星DNA.基因表达异常的诊断mRNA的相对定量分析斑点杂交或狭缝杂交RTPCRmRNA的绝对定量分析RTPCR/竞争性PCRmRNA长度分析Northern杂交/ RTPCR产物电泳. 外源DNA检测核酸分子杂交PCR技术.第二节 遗传病的基因诊断.一、遗传性疾病基因诊断的战略直接诊断点突变间接诊断多态性连锁分析.镰刀型红细胞贫血症：第六位密码由GAG突变成GTG.第三节 感染性疾病的基因诊断.一、感染性疾病基因诊断的战略针对病原体特异的核酸序列设计探针进展杂交运用PCR技术扩增病原体基因保守序列核酸杂交技术与PCR技术结合运用.第四节 肿瘤的基因诊断.一、肿瘤基因诊断的战略检测肿瘤相关基因癌基因、抑癌基因、肿瘤转移基因检测肿瘤相关病毒的基因鼻咽癌EB，宫颈癌HPV检测肿瘤标志物基因或mRNA 肝癌甲胎蛋白AFP结肠癌癌胚抗原CEA.二、肿瘤相关基因的检测ras癌基因的检测ras基因中最常见的点突变是第12，13或61密码子突变检测方法：PCR/ASOPCR-SSCP. p53的检测p53基因突变主要为点突变，热点区域位于密码子130290检测方法：PCR