基于液基薄层细胞制片技术阴道镜活检筛查宫颈上皮内瘤变的应用研究(共21页)

1、编号(bin ho)：技术(jsh)领域： 医 疗 河源市科技(kj)计划项目申报（任务）书项目名称：基于液基薄层细胞制片技术阴道镜活检筛查宫颈上皮内瘤变的应用研究计划类别：社会发展承担单位：紫金县妇幼保健院所在县区：河源市紫金县推荐单位：紫金县妇幼保健院申报日期：2013-03-18河 源 市 科 学 技 术 局二一三年制承担单位基本情况项目名称基于液基薄层细胞制片技术阴道镜活检筛查宫颈上皮内瘤变的应用研究项目起止2011年2月1 日 至 2014年2 月 1 日单位名称河源市紫金县妇幼保健院法人代表刘惠兰地址邮编紫金县广场六路25号E-mail单位类型 事业单位单位负责人刘惠兰职务职称院长

2、副主任医师电 目负责人刘端兰职务职称门诊主任主治医师电 担单位人员情况职工总数：130 技术人员数：100其中：高级职称： 3 中级职称：12主要参加单位：单位（1）名称紫金县妇幼保健院（盖章）地 址紫金县广场六路25号联 系 人刘端兰电位（2）名称（盖章）地 址联 系 人电话1知识产权(zh sh chn qun)状况单位拥有知识产权状况及其它需要说明的问题：项目技术及知识产权状况：项目阶段立项研究技术水平市内领先课题活动类别应用研究技术来源学习引进项目已有知识产权状况：专利申请总数发明专利实用新型外观设计专利授权

3、总数申请授权申请授权申请授权软件版权（项数）本项目完成后获取知识产权预测：专利申请总数发明实用新型外观设计软件版权12申请(shnqng)项目基本情况（一）项目组主要成员（项目负责人在分工栏注明）：姓 名年龄职务职称分 工所在单位（简称）签 名刘惠兰50院长 副主任医师紫金县妇幼保健院刘端兰42门诊主任主治医师紫金县妇幼保健院刘子英37住院部主任主治医师紫金县妇幼保健院罗红英36住院部护长主管护师紫金县妇幼保健院冼映红43主治医师紫金县妇幼保健院张敏青36医务科主任主治医师紫金县妇幼保健院严赞华35主治医师紫金县妇幼保健院黄伟红43主治医师紫金县人民医院张绿田43主治医师紫金县紫城镇卫生院陈月

4、娥39主治医师紫金县人民医院钟彩平41主治医师紫金县人民医院项目内容摘要（主要研究内容、关键技术、特色和创新等，200字以内）：宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia,CIN）是宫颈癌演变发展过程中的癌前病变阶段。CIN的早期诊断、治疗可有效遏制其癌变。目前液基细胞学检查（Thin-Prep Cytology Test,TCT）受到取样和判断双重因素的制约，阴道镜检查诊断CIN在取材时常带有盲目性。本课题在前期研究上旨在联合TCT和阴道镜活检筛查宫颈上皮内瘤变，探讨该联检方式对CIN的临床诊断价值。最终基于研究成果可为CIN临床筛查探索出一项方便、

5、经济、创伤较小而又可靠的诊断方法。本项目完成后经济效益预测： （单位：万元）年新增产值年新增利税年出口创汇20万3申请项目基本(jbn)情况（二）经费筹集情况： （单位：万元）总投入经费：46万自有资金贷款政府部门其它合 计市科技局县(区)科技局或其它部门已投入经费35万新增经费11万资金投入情况说明：（项目是否有银行贷款？如有，请予以说明。）新增经费预算： （单位：万元）支出经费总经费市科技局经费经 费用途说明经 费用途说明基建费其 中设备购置费40.15万购置设备其 中专用业务费3.35万对此项目研发产生费用其 中原材料费2.5万病人使用材料其 中其 它合 计4申请项目(xingm)基本情

6、况（三）一、立项(l xin)依据目的意义：宫颈癌是妇科恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，是发展中国家癌症患者死亡的首要原因。而宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia,CIN）是一组与宫颈癌密切相关的癌前病变的统称, 是宫颈癌演变发展过程中的癌前病变阶段。据报道宫颈上皮内瘤变发展为浸润性宫颈癌可能需要1015年。若在此时期内及时诊治能够预防宫颈病变发展成浸润癌，对降低宫颈癌发病率有重要意义1。据国外的医学资料表明，近十年来发达国家妇女宫颈癌的发病率及死亡率大幅下降，有赖于建立了完善的筛查系统及技术。CIN的早期诊断、治疗可有效遏制其癌变。近年来,随着

7、CIN发生率的升高和宫颈癌患者的年轻化,寻找一种既能早期诊断又具备微小创伤的方法是非常有意义的2。由于CIN 患者常缺乏典型的临床表现，仅仅根据临床检查难以诊断CIN，所以临床医生都在极力寻找一组较好的诊断CIN 的方法，减少宫颈癌的漏诊，早发现早治疗，为患者减轻身心痛苦。目前检查宫颈上皮内瘤样病变多采用宫颈涂片，但受取材和阅片医生技术水平的影响，假阴性率高达38.71%3。虽然液基细胞学检查(TCT)应用TBS报告系统较传统方法更全面，但对发现腺上皮病变的敏感度仍受到取样和判断双重因素的制约。阴道镜检查作为CIN重要的辅助诊断方法已广泛地应用于宫颈疾病的诊断中。阴道镜应用放大技术提高分辨率，

8、在CIN的好发区发现异常图像显示时进行活检可提高活检阳性率，对诊断CIN具有较强的敏感性和特异性4。但是阴道镜诊断CIN的正确性主要与阴道镜能否看到整个转化区、病变累及宫颈范围及阴道镜技术水平及临床经验等有关，同时CIN因肉眼难以识别在取材时常带有盲目性。基于以上事实，我们前期研究发现液基细胞学检查（Thin-Prep Cytology Test,TCT）对CIN具有良好的临床筛查价值。鉴于TCT 和阴道镜检查临床筛查CIN均存在的一定的缺陷，本课题在此基础上旨在联合TCT和阴道镜活检筛查宫颈上皮内瘤变，探讨该联检方式对CIN的临床诊断价值。最终基于研究成果可为CIN临床筛查探索出一项方便、经

9、济、创伤较小而又可靠的诊断方法。省内外发展概况、市场预测和发展趋势：省内外发展概况：宫颈癌是妇科恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，是女性第二大肿瘤，发病率仅次于乳腺癌，严重威胁广大妇女的身心健康，是发展中国家癌症患者死亡的首要原因。我国每年宫颈癌的新发病例和死亡数分别约为 13.5万和5万5。宫颈上皮内瘤变是一组与宫颈浸润癌密切相关的癌前病变的统称，包括宫颈不典型增生和宫颈原位癌。目前认为，子宫颈癌（carcinoma of cervix uteri）的发生、发展是由子宫颈上皮不典型增生原位癌早期浸润癌浸润癌的连续发展过程。CIN 病理分级分为 3 级，即 CIN、，级别越高细胞的异型性越大，越

10、易转化为宫颈浸润癌6。Mill等曾报道CIN、级进展到浸润癌的危险性分别为正常妇女的4倍、14.5倍和46.5倍，随CIN 级别的增高，发展到浸润癌的几率增大，大体上CIN有15%可发展为宫颈癌，其中，CIN、级发展到癌的危险性分别为 15%、30%、45%7。宫颈上皮内瘤变发展为宫颈癌是一个较长的过程, 由宫颈癌前病变发展为浸润性宫颈癌可能需要1015年。因此，早期诊断并积极治疗CIN 对提高宫颈癌的生存率及预后有重要意义。近年来随着临床辅助诊断方法的改善，以及妇科微创手术技术的发展和患者对治疗后生活质量要求的提高，宫颈上皮内瘤样病变的发病、诊断及治疗状况明显改变。CIN与早期宫颈癌的临床确

11、诊，需经“三阶梯”诊断步骤,即细胞学阴道镜检组织学检查。细胞学检查最早应用的方法是传统制片法和巴氏诊断法，巴氏涂片(papsmear)用宫颈脱落细胞筛查宫颈癌,长期的临床实验证明此法简便易行,经济有效,可重复性强，这也是我国大多数基层医院仍采用的传统方法，该方法具有一定的敏感性和特异性，但随着细胞学诊断的发展，其局限性也渐渐凸显,巴氏分级范围过宽，没有与组织病理学相对应的术语。据统计其准确率为 67% -92. 6%，异很大，假阴性率 10%-35%。对临床缺乏明确的指导意义8。宫颈细胞学诊断报告方式TBS与液基薄层细胞学制片技术TCT引入和结合提高了细胞学检查的敏感性和特异性，并且有取代传统

12、的细胞学检查方法的趋势。TCT 诊断技术的计算机扫描系统通过计算机规则系统成像器，将可疑的异常细胞经彩色图像处理并数字化形式贮存到数码磁带中备检。其次，对经选择的图像资料再复验，病理专家先复查每张涂片上磁场盘记录的数字化图像，重点观察异常细胞图像。同时照像并将异常细胞精确定位于涂片上，以便在光镜下容易找到，从而实现计算机与人脑智慧的最佳组合9，最后按TBS分类法做出诊断报告。细胞学诊断最关键是涂片质量，传统抹片存在细胞随取材器丢失、非细胞成分干扰和细胞重叠等，严重影响异常细胞的检出率。目前趋于多种辅助诊断方法联合使用，最后的确诊依靠病理组织学检查。以往CIN 的诊断需以冷刀锥切术后的病理结果为

13、标准，阴道镜仅作为检查或筛查的一种方式出现。但是宫颈癌前病变以及早期宫颈癌因肉眼难以识别，取材时带有盲目性常规的宫颈 3，6，9，12 四点活检阳性率并不高，随着现代科学技术的发展进步，阴道镜已广泛地应用于宫颈疾病的诊断中。阴道镜应用放大技术提高分辨率，其观察的重点部位为宫颈鳞、柱状上皮交界处的转化区该区域是宫颈癌前病变的好发区，在发现异常图像显示部位进行活检可提高活检阳性率，对诊断 CIN 和早期宫颈癌具有较强的敏感性和特异性是发现早期宫颈病变的重要手段。近几年一些研究结果表明：满意的阴道镜检查及镜下活检后的病理诊断可以作为一部分的CIN 诊断标准，是诊断宫颈上皮内瘤样病变的一种简单而有效的

14、方法10。CIN 的阴道镜表现随着级别的增高而呈多样化。阴道镜诊断的正确性，主要与阴道镜能否看到整个转化区、病变累及宫颈范围及阴道镜技术水平及临床经验等有关。随着临床实践的积累,近来许多学者对阴道镜直视下活检诊断 CIN 的准确性提出质疑。Fambrini等11报道942例阴道镜直视下宫颈活检诊断CIN的准确性为53.4%,其中诊断不足为23.6%,诊断过度为23.0%。宫颈点式活检的优点是取材较方便，对患者的损伤较小，又有一定的组织供病理组织学检查，但活检取材无法覆盖全宫颈，钳取组织深度受限，而且对于宫颈管内的病变诊断的准确性欠佳，容易造成微小浸润癌的遗漏。因此液基细胞薄层涂片与阴道镜活检技

15、术联合应用于CIN筛查，其敏感性高，是目前国外常用的筛查方法。近年来此项技术在我国多个省、市地区应用于基层妇女的筛查，且中华医学会妇科肿瘤学分会专家们对前期及筛查病例数据进行对比分析后对该项技术应用于基层CIN的检测作出肯定评和推荐。从以上可以看出，将液基细胞薄层涂片与阴道镜活检技术联合应用于CIN的筛查是一项方便、经济、创伤较小而又可靠的诊断方法，可为CIN的诊断提供更准确的依据；有望早发现、早诊断、早治疗CIN、防止其恶变进而提高宫颈癌的治愈率。参考文献1沈铿,郎景和.妇科肿瘤面临的问题和挑战M.北京:人民卫生出版社,2007:37.2李媛媛.电子阴道镜下宫颈活检诊断宫颈病变的临床分析J.

16、中国实用医药,2009,4(2):104-105.3黄勇,李涛,徐晓琴.宫颈上皮内瘤样病变两种筛查方法的比较J.海南医学,2001,12(7):45.4李晓兰,秦彩蓉,田葵珍.阴道镜和宫颈液基细胞学检查在诊断宫颈早期病变中的比较J.中国妇产科临床杂志,2007,8(5):343-345.5魏丽慧.宫颈病变诊断和治疗中的过度与不足J.中国妇产科临床杂志,2009,10(2):83-84.6American College of Obstericians and Gynecologists.ACOG practice bulletin number 109,December 2009:cervic

17、al cytology screeningJ.Obstet Gynecol,2009,114:1409-1420. 7曹泽义.中华妇产科学M.2 版.北京:人民卫生出版社,2004:2012-2028.8李晶,罗祥美,林仲秋.2010NCCN宫颈癌筛查临床实践指南解读J.国际妇产科学杂志, 2010,37(3):224-226. 9申如萌,等.子宫颈癌筛查方法的选择J.中国实用妇科与产科杂志,2010,26(2):157-159.10王静,刘汉萍,罗小平.阴道镜下宫颈多点活检结合颈管搔刮术在宫颈病变诊断中的价值J.中国妇幼保健,2008,1:128-129. 11Fambrini M,Koli

18、opoulos G,Martim-Hirsch P,et al.Obstetric outcomes after conservative treatment for intraepithelial early invasive cervicalLesions:systematic review and meta-analysisJ.Lancet,2006, 367(9505):489-498. 项目应用前景预测及分析：我国每年有宫颈癌新发病例13.15万人，占世界宫颈癌新发病例总数的1/3，我国应对宫颈癌的防治工作任重道远。宫颈癌是一种可防可治的疾病，预防的关键是发现癌前病变并予合理的治疗。

19、要提高治愈率关键就是早诊断早治疗，本方法应用于宫颈癌前病变CIN的筛查有望达到较高的准确率。同时本方法操作简单易行，留取宫颈细胞的妇女无痛苦，可重复操作，收费合理，尤适应于发病率较高且经济欠发达地区妇女普查的有效方法。5申请(shnqng)项目基本情况（四）二、研究开发内容(nirng)、方法、技术路线 1、具体研究开发内容和要重点解决的技术关键问题：具体研发内容：按照纳入、排除标准，收集阴道镜检查异常或TCT检查异常的患者120例，按照随机数字表随机分为两组：对照组行阴道镜检查，观察组采用TCT与阴道镜联合检查。以病理诊断为金标准，比较两组阳性符合率，探讨TCT联合阴道镜检测对宫颈上皮内瘤样

20、病变的诊断价值。重点解决的技术关键问题：1.采用液基薄层细胞制片技术联合阴道镜活检筛查宫颈上皮内瘤变，评价该联检方式对宫颈上皮内瘤变的的筛查效果。2.探讨为CIN临床筛查的方便、经济、创伤较小而又可靠的诊断方法。2、项目的特色和创新之处：1）理论上创新：采用TCT与阴道镜联合检测的模式对宫颈上皮内瘤样病变患者进行筛选，探索该联合检测方法对宫颈上皮内瘤样病变的诊断价值，有别于传统单种方法检测带来的各种缺陷和弊端。2）方法上创新：本研究通过TCT与阴道镜的联合检测筛选宫颈上皮内瘤样病变，最终基于该联检模式可为CIN的诊断提供更准确的依据；有望早发现、早诊断、早治疗CIN、防止其恶变进而提高宫颈癌的

21、治愈率。6申请项目基本(jbn)情况（五）二、研究(ynji)开发内容、方法、技术路线 3、要达到的技术、经济指标及社会、经济效益：本研究项目是癌前病变CIN的筛查方法，TCT与阴道镜的联合检测筛选宫颈上皮内瘤样病变，有别于传统单种方法检测带来的各种缺陷和弊端。本方法的应用能提高CIN筛查的准确率。本研究方法是采用毛刷宫颈取材，取出标本存放于保存液的小瓶内送检，保存待检期可达5-7天，同时本方法取存宫颈细胞操作简单，患者无痛苦，耗材便宜。保存期长，易于保存送检。易被患者接受，尤其适用于大标本量的人群普查。本研究方法应用的检测系统仪器设备由武汉呵尔医疗科技有限公司提供，该产品是获得国家医疗器械注

22、册的合格产品。本检测系统实现仪器自动制片、计算机自动阅片，克服了传统的人工在显微镜下逐一阅片费时费力的缺点，报告结果客观准确。同时能解决基层医院缺少有经验细胞学医师的现状。该项检测技术曾被中华医学肿瘤分会专家组推荐适用于基层医疗机构进行妇女CIN筛查的适宜技术。采用的方法、技术路线以及工艺流程：1、入组病例的选择：按照纳入、排除标准，从2012年08月到2013年08月，选择紫金县妇幼保健院就诊阴道镜检查异常或TCT检查异常的患者120例，根据检查方式不同分为以下2组，每组100例：观察组：首先进行TCT检查，诊断为TCT阳性后再做阴道镜检查并于镜下病变处取活检；对照组：直接进行阴道镜检查并于

23、镜下病变处取活检。两组均以活检病理组织学检查结果为诊断标准。纳入标准：1、阴道镜检查异常或TCT检查异常的患者；2、所有患者均为有性生活的非孕期妇女；、愿意接受该项研究。排除标准：、合并其他躯体性疾病；、有精神疾病或严重智力及认知障碍患者；、未签署知情同意、不同意接受各项检查者。2. 研究技术路线3、实验方案3.1分组方法：符合纳入标准的200例患者根据随机数字表随机分配为对照组及观察组各60例。向研究对象解释本研究的意义方法，征得研究对象同意参加本研究，填写知情同意书。3.2 检查方法：(1) 液基细胞学检查：观察患者子宫颈的情况，如果分泌物太多，使用干棉签擦拭干净后，将特制的宫颈取材刷沿宫

24、颈口平行插入，然后沿着同一个方向转旋3-5圈，采集宫颈外口和宫颈管的脱落细胞，用德立森保存液制成标本薄片。采用TBS诊断系统报告结果:正常范围(WNL)，无明确诊断意义的非典型鳞状细胞(ASCUS)，低度鳞状上皮内病变(LSIL)，高度鳞状上皮内病变( HSIL)，鳞状细胞癌(SCC);无明确诊断意义的非典型腺细胞(AGUS)，腺癌(AC) 根据TBS系统，其中LSIL即CIN，HSIL包括CIN和CIN。(2) 阴道镜检查：阴道镜检查主要根据四个征象来反应病灶是否存在异常，即病灶的颜色、边界形态、血管结构和碘反应。先用干棉签擦拭掉宫颈内过多的分泌物，初步观察后保留图像，再用3%的醋酸溶液做醋

25、酸实验:在宫颈表面涂上3%的醋酸，1min后在镜下观察宫颈上皮的病变范围、色泽、轮廓、血管形态及对醋酸的反应情况，然后做碘溶液试验，着色为碘试验阳性区。阴道镜检查诊断: 图像为醋酸白色上皮，伴模糊镶嵌，拟诊为CIN;醋酸白色上皮，磷柱交界区转化明显，边界较为清楚，拟诊为CIN;醋酸白色上皮，同时出现点状血管镶嵌，边界清楚，碘反应阴性，拟诊为CIN。（3）阴道镜活检：液基细胞学检查结果CIN以上或者阴道镜检查出现异常，进行阴道镜下活检，用10%甲醛溶液固定活检组织送到病理科切片检查，追踪记录诊断结果。3.3诊断标准：宫颈液基细胞学检查阳性诊断包括 ASCUS 以上病变，同时，以阴道镜下活检病理学

26、检查结果作为金标准。比较两组病理学诊断的阳性符合率。3.4 统计学分析 应用SPSS13.0统计软件对实验结果进行统计学分析，组间差异比较用One Way ANOVA 进行检验。P0.05为差异具有统计学意义。7申请项目基本(jbn)情况（六）三、工作基础(jch)和条件1、承担单位概况及本项目现有的研究工作基础和条件（包括现有科研装备条件和技术保障）前期研究基础：前期研究发现TCT对CIN具有良好的临床筛查价值，同时大量查阅宫颈上皮内瘤样病变、液基细胞学检查及阴道镜活检等方面的相关文献资料并进行整理。从立题到实验方法、技术路线和实验方案经过反复论证。保证了立题的新颖性、科学性和可靠性。研究硬

27、件条件：本单位宫颈病变检查设备齐全，在我院有大量病例，可以保证患者的数量和质量。 扎实的工作基础：本科室长期从事宫颈病变的临床筛查研究，对CIN的有关研究和参与诸多科研项目的丰富经验为本课题的研究奠定了坚实的基础。单位领导的支持：医院科研管理规范，单位领导对本课题组的人力、物力给予充分支持。2、对环境的影响及预防治理方案：无8申请项目基本(jbn)情况（七）四、本项目(xingm)参加单位情况及以往承担项目情况1、本项目各参加单位工作分工及经费投入、支出情况：主承担单位：河源市紫金县妇幼保健院工作分工：负责组织该项目的分步实施工作，落实项目应用研究工作。负责标本采集及检测并签发报告，对结果进行

28、分析研究，指导筛查者随诊复诊，阳性结果进行组织活检病理确诊。2、以往承担项目完成情况及主要成果：9申请(shnqng)项目基本情况（八）五、工作进度安排(npi)工 作 进 度主 要 工 作 内 容2011年1月至2012年4月 进一步文献查阅，设计论证，人员培训2012年5月至2012年7月临床预试验，补充修订观察指标2012年8月至2013年8月临床试验阶段，筛选病例，收集资料，观察效果2013年9月至2013年11月数据整理与分析，撰写论文2013年12月至2014年2月结题，申报科研成果年 月至 年 月年 月至 年 月六、其它需要(xyo)说明的事项10申请(shnqng)项目基本情况（八）七、本申报(shnbo)书所附的附件清单附件名称数 量1.企业营业执照 2.资产负债表3.损益表4.高新技术企业证书5.科学技术成果鉴定证书6.专利证书