小菜生产厂实验室设计(共21页)

1、目录(ml)TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc15881 一、总体设计 一、总体设计 1、实验室性质(xngzh)本实验室主要用于感官检验、理化检验和微生物检验。其中，微生物实验室包括(boku)了微生物检验室、无菌操作室、培养基制作室；另外，为了节约实验室的建造成本，理化分析室除了做理化分析之外还可以兼作为感官分析室。建设(jinsh)规模本实验室用于检测小菜的各项微生物及理化指标，为小规模实验室。投资经费预计控制在12万元以内。3、面积实验室总面积为60 m2。其中：微生物检验室：20m2 无菌室面积：13m2理化分析室：20m2办公室：7m24、项目4.1感官评

2、定品种形状；气味、滋味；不完善粒、杂质；畸形粒4.2理化实验4.2.1水分 按GB/T 5497规定执行4.2.2酸价 按GB/T 5009.37规定执行4.2.3过氧化值 按GB/T 5009.37规定执行4.2.4羰基价 按GB/T 5009.37规定执行4.2.5涕灭威、克百威 按GB/T 5009.104规定执行4.2.6 敌敌畏、乐果、对硫磷 按GB/T 5009.20规定执行4.2.7黄曲霉毒素B1 按GB/T 5009.22规定执行4.3微生物实验(shyn)4.3.1菌落总数 按GB/T 4789.2规定(gudng)执行4.3.2大肠菌群 按GB/T 4789.3规定(gud

3、ng)执行4.3.3沙门氏菌按GB/T 4789.4规定执行4.3.4志贺氏菌 按GB/T 4789.5规定执行4.3.5金黄色葡萄球菌 按GB/T 4789.10规定执行5、试验台、橱柜项目名称尺寸（长*宽*高）/mm数量试验台操作台119008007801操作台221508007801台面1400600 7801办公桌19008007801橱柜文件柜9004006001药品橱900400160026、水龙头和清洗池名称尺寸mm数量三联化验水龙头2602206503清洗池40030030037、电器和照明序号名称规格型号数量1照明灯11001005072电话中诺C16813网络插口四通86双

4、孔14插座二三级85开关两开86紫外灯27通风橱120050075018超净工作台220075060018、空调(kn dio)、风扇序号名称型号数量品牌价格1空调KFR-26GW2格力54002风扇FC1054美的3689、电容量根据设计(shj)的实验室所用的所有设备的总功率估计实验室用电总容量为6KW。10、实验室管理制度10.1实验室基本(jbn)要求10.1.1理化实验室工作一般要求实验室每一位检验分析工作者都应该有严肃认真的工作态度，做到工作应有计划，作好必须的准备，有条不紊地进行。要养成精密细致的观察、操作和整齐、清洁的实验习惯。工作前要打扫实验室卫生。工作前、后洗手，以避免造成

5、沾污实验仪器和试剂、样品，引进实验误差，防止有毒有害物质沾染人体，感染或传染疾患。实验仪器应放置整齐，实验台面及地面应经常保持干燥、清洁，不得向地上甩水，实验告一段落应及时进行整理。火柴头、碎滤纸等物应放在专设的废物箱内，不得随地乱扔或倒入下水道，对可造成环境污染的废品、废液(包括有毒、有害、易燃)等物品应专门的收集和处理。实验记录应记在专门的本子上，记录要求：真实、及时、齐全、清楚、整洁、规格化。应该用钢笔或圆珠笔记录，如有记错应将原字划掉，在旁边重写清楚，不得涂改，刀刮、补贴。实验记录及结果报告单应根据本单位规定保留一定时间，以备查考。10.1.1微生物实验室工作一般要求 食品微生物学检验

6、和其他检验不同，检验实验对象大部分为致病性微生物，同时，用于微生物检验的用品很多属于易燃物，所以要求每个检验员、实验室管理员应在保证安全的前提下做好检验工作，以下按照微生物实验室的特殊要求，一般要求如下：(1) 进实验室应穿工作服，离开实验室时脱去放在指定的处所，工作服应经常洗涤，保持洁净。(2) 非检验必要物品不要带入实验室，必要的用品带入后，必须远离试验台。(3) 实验室内应保持肃静，不得高声谈笑，以利集中精力完成实验操作。不得在实验室吸烟、饮酒、饮食等。不要以身体任何部位直接接触试样，或在实验中以手抚摸头面等部位，以免污染。(4) 如有传染性物品污染桌面或地面，应立即用3来苏溶液或5石炭

7、酸溶液倾覆(qngf)其上，半小时后始可抹去：如有传染物污染工作服，应立即将工作服脱去，以高压蒸汽法灭菌。(5) 如有传染物污染手部，应立即将手浸于3来苏溶液(rngy)内。经5 min-10 min；再以肥皂及水刷洗干净。如有传染物被吸入口内，应立即吐出，并以大量清水漱口；根据需要亦可服用有关药物以预防发生传染。10.2仪器(yq)的管理10.2.1精密仪器的管理（1）精密仪器应按其性质、灵敏度要求以及精密程度，固定房间及位置。精密仪器室与化学处理室隔开，以防腐蚀性气体及水汽对仪器的腐蚀；烘箱、高温炉应放置在不燃的水泥台或坚固的铁架上；天平及其它精密仪器应放在防震、防晒、防潮、防腐蚀的房间内

8、，并罩上棉布制的仪器罩。小件仪器用完应收藏在仪器柜中。（2）对精密仪器应建立技术档案。技术资料包括：说明书、装箱单、安装调试验收记录、检修记录等。精密仪器必须由专人操作，并上岗操作，每使用一次要进行登记签名。对某种仪器没有使用过的人员，应进行培训后才能操作。（3） 精密仪器的购置、拆箱、验收、安装、调试都应由专人负责，未经批准不得任意拆卸。10.2.2玻璃仪器的管理玻璃仪器应建立领用、破损登记制度。所用的容量仪器应进行校准。10.3化学药品及危险品管理10.3.1化学药品的储存及管理（1）较大量的化学药品应放在药品储藏室中。储藏室应是朝北的房间，以避免阳光照射，室温过高致使试剂变质。内应干燥通

9、风，严禁明火。试剂应分类存放，并分类造册以便查找。10.4安全管理保护实验人员的安全和健康，防止环境污染，保证实验室工作安全而有效的进行是实验室管理工作的重要内容。根据实验室工作的特点，实验室安全包括：基本安全操作、防火、防爆、防毒，安全用电，保证压力容器和气瓶的安全、防止环境污染等方面。10.4.1灭火一旦发生火灾，要临危不惧，冷静沉着，及时采取灭火措施。若局部起火，应立即切断电，并关闭燃气阀门，用湿抹布或石棉覆盖熄火。若火势较猛，应根据具体情况，选用适当的灭火方法进行灭火，并立即与有关部门联系，请求救援。根据燃烧物的性质，国际上统一将火灾分为A，B，C，D四类。A类火灾是指木材、纸张和棉花

10、等物质的着火，最经济的灭火剂是水，另外可用酸碱式和泡沫式灭火剂。B类火灾(huzi)是指可燃性液体着火，如石油化工产品，食用油脂等。扑灭此类火灾可用泡沫式灭火机，二氧化碳灭火机，干粉灭火机和“1211”灭火机C类火灾是指可燃性气体着火(zho hu)，如城市煤气，石油液化气等。扑灭这类火灾可用“121l”灭火机和干粉(gnfn)灭火机。D类火灾是指可燃性金属着火，如钾、钠、钙、镁等。扑灭D类火灾最经济有效的方法是用于砂覆盖。二、设备清单1、仪器设备清单序号名 称型号台数厂家价格1电热恒温箱CK-7201东莞市宏展仪器有限公司6500.002分析天平(1mg)JF10041济南市中天组培园艺用品

11、有限公司2380.003天平(0.1g)TG-328A1长江科学仪器厂（上海）525.004电动粉粹机J271141杭州良友仪器厂700.005谷物选筛1上海丰行筛网制造有限公司320.006干燥器DGF20022B1重庆银河试验仪器公司5650.007分光光度计UN751-CD1上海分析仪器总厂17000.08电炉GH-121厦门高航电器有限公司800.009数显恒温水浴锅HH-41常州国华800.010冰箱（无氟）BCD-210/HC1广东科龙2382.011恒温振荡机SHA-C1常州国华4980.012气相色谱仪GC112A-21上海恒平2200013手提式高压灭菌器1上海医用仪器厂76

12、0.014电热蒸馏水器上海医疗器械780.015精密pH酸度计PHS-3C1上海精科雷磁2398.016打印机HPPJ630C1中国惠普500.017扫描仪A6001清华紫光499.018宏基笔记本电脑TM-361-E1宏基电脑有限公司14500.019电脑微机云图10001实达电脑4873.020显微镜XTZ-051上海天珠光学仪器厂2500总价格908472、玻璃仪器清单(qngdn)序号名称规格厂家价格个数总价1水银温度计 0-100其他3.0262自动滴定管50ml其他18011803锥形瓶50 ml、100 ml、150 ml、200 ml北玻各3支39.64烧杯50ml、100 m

13、l、150 ml、250 ml、500ml、1000ml蜀玻各5个87.05刻度吸管0.1-0.5 ml、1-2 ml、5 ml、10 ml、15 ml20 ml北玻各2支69.26滴液漏斗60 ml、125 ml北玻各2个63.67容量瓶50ml、100ml、250 ml广玻各10个209.08量筒5 ml-1000ml天玻各3支150.99容量瓶50ml、100ml、250 ml、500ml、1000ml广玻各3个182.510试管10100、15100、15150、18180、20200、25200、30200北玻各8支49.911吸耳球大、中、小北京各5个3912胶头滴管8*100mm

14、、8*150mm、8*200mm、8*250mm、8*300mm其他0.5各5个12.513玻璃棒其他1.610支1614具塞比色管25ml北玻5.25个2615试剂瓶广口50ml-500ml、细口50ml-500ml广口棕色50ml-500ml细口棕色50ml-500ml北玻6.55个182.016培养皿90mm、120mm其他5.3各20个212总价格487.5三、药品(yopn)清单序号名称纯度规格单价数量总价1无水乙醚分析纯500mL122242乙醇（90%） 3分析纯500mL9.6219.23氢氧化钾 30.5 mol/L550mL12.01124碘化钾分析纯50ml18.0118

15、5三氯甲烷分析纯10.01106冰乙酸分析纯500mL10.01107硫代硫酸钠分析纯500mL6.516.58可溶性淀粉分析纯500mL9.0199氢氧化钠分析纯500mL5.021010硫酸 分析纯500mL25.525111硝酸 分析纯1000ml5.021012过硫酸铵分析纯500ml8.01813过氧化氢 30%50mL621214高氯酸分析纯500mL8.01815铅0.1mg/mL50mL35.013516石油醚分析纯500mL10.011017无水硫酸钠分析纯500mL10.011018盐酸分析纯500ml30.013019胰蛋白胨分析纯500g84.018420酵母浸膏分析纯

16、500g45.014521葡萄糖分析纯500g18.023622琼脂粉BR250g50.0210023磷酸二氢钾分析纯500g15.023024氯化钠分析纯1000g4.52925月桂基硫酸钠BR250g90.0218026煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤250g90.019027结晶紫BR250g80.01802810%氯化钠胰酪胨大豆肉汤250g70.0170297.5%氯化钠肉汤250g50.015030血琼脂平板10个/包40.014031Baird-Parker琼脂平板10个/包100.0110032革兰氏染色液试剂盒35.5135.533志贺氏菌增菌肉汤BR250g100.01100总

17、价格1342.2总体(zngt)平面布置图1900mm试验台正面示意图柜橱(guch)、实验台正面、侧面示意图各一份800mm1900mm780mmmmmmmmm试验台侧面示意图900mm400mm橱柜侧面示意图1600mm橱柜正面示意图水管线路、水龙头位置图、照明灯、电话、网络(wnglu)、电插座位置尺寸图风扇开关七、说明(shumng)水分(shufn)测定：105恒重法1.1 定温：使烘箱中温度计的水银球距离烘网2.5cm左右(zuyu)，调节烘箱温度定在1052。1.2 烘干铝盒：取干净的空铝盒，放在烘箱内温度计水银球下方烘网上，烘30min至1 h取出，置于干燥器内冷却至室温，取出

18、称重，再烘30min，烘至前后两次重量差不超过0.005g，即为恒重。1.3 称取试样：用烘至恒重的铝盒(W0)称取试样约3g(W1，准确至0.001g)。1.4 烘干试样：将铝盒盖套在盒底上，放入烘箱内温度计周围的烘网上，在105温度下烘3h（油料烘90rnin）后取出铝盒，加盖，置于干燥器内冷却至室温，取出称重后，再按以上方法进行复烘，每隔30 min取出冷却称重一次，烘至前后两次重量差不超过0.005g为止。如后一次重量高于前一次重量，以前一次重量计算(W2)。酸价称取3.00 g5. 00 g混匀的试样，置于锥形瓶中，加入50 mL中性乙醚-乙醇混合液，振摇使油溶解，必要时可置热水中，

19、温热促其溶解。冷至室温，加入酚酞指示液2滴3滴，以氢氧化钾标准滴定溶液(0.050 mol/L)滴定，至初现微红色，且0.5 min内不褪色为终点。过氧化值：滴定法称取2. 00 g3. 00 g混匀（必要时过滤）的试样，置于250 mL碘瓶中，加30 mL三氯甲烷-冰乙酸混合液，使试样完全溶解。加入1.00mL饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5 min，然后在暗处放置3 min。取出加100 mL加1mL淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失为终点，取相同量三氯甲烷-冰乙酸溶液、碘化钾溶液、水，按同一方法，做试剂空白试验。羰基价精密称取约0. 025 g0.5 g试样，置于25 mL容量

20、瓶中，加苯溶解试样并稀释至刻度。吸取5.0 ml，置于25 mL具塞试管中，加3 mL三氯乙酸溶液及5 mL2,4-二硝基苯肼溶液，仔细振摇混匀，在60水浴中加热30 min，冷却后，沿试管壁慢慢加入10 mL氢氧化钾-乙醇溶液，使成为二液层，塞好，剧烈振摇混匀，放置10 min。以l cm比色杯，用试剂空白凋节零点，于波长440 nm处测吸光度。涕灭威、克百威5.1 提取(tq)称取约40 g试样，精确至0.001 g，置于250 ml.具塞锥形瓶中，加入20 g40 g无水硫酸钠（视试样的水分而定）、100 mL无水甲醇(ji chn)。塞紧，摇匀，于电动振荡器上振荡30 min。然后经快

21、速滤纸过滤于量筒中，收集50 mL滤液，转入250 ml分液漏斗中，用50 mL 50 g/l氯化钠溶液洗涤量筒，并人分液漏斗中。5.2净化(jnghu)于盛有试样提取液的250 mL分渡漏斗中加入50 mL石油醚，振荡1 miri静置分层后将下层（甲醇氯化钠溶液）放人第二个250 mL分液漏斗中，加25 mL甲醇一氯化钠溶液于石油醚层中，振摇30 s，静置分层后，将下层并人甲醇一氯化钠溶液中。5.3浓缩于盛有试样净化液的分液漏斗中，用二氯甲烷(50，25，25 mL)依次提取三次，每次振摇1 min，静置分层后将二氯甲烷层经铺有无水硫酸钠（玻璃棉支撑）的漏斗（用二氯甲烷预洗过）过滤于250

22、ml.蒸馏瓶中，用少量二氯甲烷洗涤漏斗，并人蒸馏瓶中。将蒸馏瓶接上减压浓缩装置，于50水浴上减压浓缩至l mL左右，取下蒸馏瓶，将残余物转入10 mL刻度离心管中，用二氯甲烷反复洗涤蒸馏瓶并人离心管中。然后吹氮气除尽二氯甲烷溶剂，用丙酮溶解残渣并定容至2.0ml，供气相色谱分析用。氯菊酯、氰戊菊酯6.1提取粮食试样：称取10 g粮食试样，置于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL石油醚，于振荡器上振摇0.5 h。6.2净化6.2.1层析柱的制备：玻璃层析柱中先加入1 cm高无水硫酸钠，再加入5g5%水脱活弗罗里硅土，最后加入1 cm高无水硫酸钠，轻轻敲实，用20 mL石油醚淋洗净化柱，弃去淋

23、洗液，柱面要留有少量液体。6.2.2净化与浓缩：准确吸取试样提取液2 mL，加入已淋洗过的净化柱中，用100 mL石油醚-乙酸乙酯(95+5)洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩近干，用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心管中，最终定容至1.0 mL，供气相色谱分析。敌敌畏、乐果、对硫磷提取与净化：脱壳、磨粉、过20目筛、混匀。称取10.00 g，置于具塞锥形瓶中，加入0.5 g中性氧化铝及20 mL二氯甲烷，振摇0.5 h，过滤，滤液直接进样。如农药残留量过低，则加30 mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15 mL滤液浓缩并定容至2.0 mL进样。黄曲霉毒素(d s)B18.1提取(tq)8

24、.1.1 称取20. 00 g粉碎(fn su)过筛试样（面粉、花生酱不需粉碎），置于250 mL具塞锥形瓶中，加30 mL正己烷或石油醚和100 mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。振荡30 min，静置片刻，以叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于分液漏斗中，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。取20.00 mL甲醇水溶液（相当于4g试样）置于另125 mL分液漏斗中，加20 mL三氯甲烷，振摇2 min，静置分层，如出现乳化现象可滴加甲醇促使分层。放出三氯甲烷层，经盛有约10 g预先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于50 mL蒸发皿中，再加5 mL三氯

25、甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并于蒸发皿中。将蒸发皿放在通风柜于65水浴上通风挥干，然后放在冰盒上冷却2 min3 min后，准确加入1 mL苯一乙腈混合液（或将三氯甲烷用浓缩蒸馏器减压吹气蒸干后，准确加入1 mL苯一乙腈混合液）。用带橡皮头的滴管的管尖将残渣充分混合，若有苯的结晶析出，将蒸发皿从冰盒上取出，继续溶解、混合，晶体即消失，再用此滴管吸取上请液转移于2 mL具塞试管中。8.2测定 单向展开法8.2.1 薄层板的制备：称取约3g硅胶G，加相当于硅胶量2倍3倍左右的水，用力研磨1 min2 min至成糊状后立即倒于涂布器内，

26、推成5 cm20 cm厚度约0.25 mm的薄层板三块。在空气中干燥约15 min后，在100活化2h，取出，放干燥器中保存。一般可保存2天3天，若放置时间较长，可再活化后使用。8.2.2点样：将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板下端3 cm的基线上用微量注射器或血色素吸管滴加样液。一块板可滴加4个点，点距边缘和点间距约为1 cm，点直径约3 mm。在同一块板上滴加点的大小应一致，滴加时可用吹风机用冷风边吹边加。滴加样式如下： 第一点：10 uL黄曲霉毒素(d s)B1标准(biozhn)使用液(0.04 ug/mL)。 第二点；20 uL样液。 第三点：20 uL样液+10 uL0.04

27、ug/mL黄曲霉毒素(d s)B1标准使用液。 第四点：20 uL样液+10 uL 0.2ug/mL黄曲霉毒索B1标准使用液。8.2.3展开与观察：在展开槽内加10 mL无水乙醚，预展12 cm取出挥干。再于另一展开槽内加10 mL丙酮-三氯甲烷(8+92)，展开10 cm12 cm，取出。在紫外光下观察结果，方法如下。8.2.3.1 由于样液点上加滴黄曲霉毒素B1标准使用液，可使黄曲霉毒素B1标准点与样液中的黄曲霉毒索B1荧光点重叠。如样液为阴性，薄层板上的第三点中黄曲霉毒索B1为0.0004ug，可用作检查在样液内黄曲霉毒素B1最低检出量是否正常出现；如为阳性，则起定性作用。薄层板上的第四

28、点中黄曲霉毒素B1为0.002ug，主要起定位作用。8.2.3.2若第二点在与黄曲霉毒素B1标准点的相应位置上无蓝紫色荧光点，表示试样中黄曲霉毒素B1含量在5 ug/kg以下；如在相应位置上有蓝紫色荧光点，则需进行确证试验。8.2.4确证试验：为了证实薄层板上样液荧光系由黄曲霉毒素B1产生的，加滴三氟乙酸，产生黄曲霉毒素B1的衍生物，展开后此衍生物的比移值约在0.1左右。于薄层板左边依次滴加两个点。第一点：0. 04 ug/mL黄曲霉毒素B1标准使用液10 uL。 第二点：20 uL样液。于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上，反应5 min后，用吹风机吹热风2 min后，使热风吠到薄层板上的温

29、度不高于40，再于薄层板上滴加以下两个点。 第三点：0. 04 ug/mL黄曲霉毒素B1标准使用液10 uL。 第四点：20 uL样液。 再展开(zhn ki)（同11.1.3），在紫外光灯观察(gunch)样液是否产生与黄曲霉毒素B1，标准点相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四两点，可依次(yc)作为样液与标准的衍生物空白对照。8.2.5稀释定量：样液中的黄曲霉毒素B1荧光点的荧光强度如与黄曲霉毒素B1标准点的最低检出量(0.000 4ug)的荧光强度一致，则试样中黄瞌霉毒素岛含量即为5 ug/kg。如样液中荧光强度比最低检出量强，则根据其强度估计减少滴加微升数或将样液稀释后再滴加不同微升数，

30、直至样液点的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。滴加式样如下： 第一点：10 uL黄曲霉毒素B1标准使用液(0.04 ug/mL)。 第二点：根据情况滴加10 uL样液。 第三点：根据情况滴加15 uL样液。第四点：根据情况滴加20 uL样液。菌落总数9.1 样品的稀释9.1.1 称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min-10000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1：10的样品匀液。9.1.2用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1

31、mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。9.1.3按4.1.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。9.1.4根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。9.1.5及时将15 mL20 mL冷却至46的平板计数琼脂培养基（可放置于46土1。C恒温水

32、浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。9.2培养9.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36土1培养48 h士2 h。水产品30士1培养72 h土3 h。9.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转(fn zhun)平板，按6.2.1条件进行培养。9.3茵落计数(j sh) 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(dnwi)( colony-forming units，CFU)表示。9.3.1 选取菌落数在30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生

33、长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。9.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。9.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。大肠菌群10.1 检样稀释10.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品，放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/minl0000 r/

34、min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1：10的样品匀液。10.1.2样品匀液的pH值应在6.57.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HC1调节。10.1.3用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。10.1.4根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样

35、品匀液。每递增稀释1次，换用1支1 mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。10.2初发酵试验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种ImL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36土1培养24 土2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h土2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h土2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。10.3复发酵(f jio)试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种(y zhn)于煌绿

36、乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中，36土l培养(piyng)48 h土2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。10.4大肠菌群最可能数(MPN)的报告按4.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表，报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。金黄色葡萄球菌11.1 样品的处理 称取25 g样品至盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/minl0000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min。若样品为液态，吸取25

37、 mL样品至盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠中，振荡混匀。11.2增菌和分离培养 11.2.1将上述样品匀液于36士1培养18 h24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。11.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36 0C土l培养18 h24 h。Baird-Parker平板36土1培养18 h24 h或45 h-48 h。11.2.3金黄色葡萄球菌在B aird-Parker平板上，菌落直径为2 mm，-3

38、 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。11.3鉴定4.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 ml m。4.3.2血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌

39、落1个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36土1 0C培养18 h24 h。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI培养物0.2 mL0.3 mL，振荡摇匀，置36土1温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果(ji gu)如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36土1培养(piyng)18 h-48 h，重复(chngf)试验。

40、志贺氏菌12.1增茵 以无菌操作取检样25 g(mL)，加入装有灭菌225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8 000 r/minl0 000 r/min均质；或加入装有225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1 min-2 min，液体样品振荡混匀即可。于41.5土1，厌氧培养16 h20 h。12.2分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于361培养20 h24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再进行观察。12.3初步生化试验12.3.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36+l培养20 h24 h，分别观察结果。12.3.2凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其5.3.1中己培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。12.4生化试验及附加生化试验1