山茱萸总苷分离纯化工艺研究

1、山茱萸总苷分散纯化工艺研究李小娜吕立勋周洁徐海燕陈苹苹【摘要】目的应用大孔吸附树脂对山茱萸中环烯醚萜苷类身分举行分散纯化，观察大孔树脂纯化山茱萸总苷的工艺参数。要领观察上样量、洗脱剂浓度、洗脱体积、上样浓度等因素对HPD-100大孔吸附树脂纯化山茱萸环烯醚萜苷的影响。以洗脱液中莫诺苷和马钱苷含量作为观察指标，用HPL法测定其含量，确定最正确工艺参数。结果洗脱溶剂应为50%乙醇，大孔树脂每利用两次必要再生1次，最正确上样浓度为0.25g/l，洗脱溶剂的用量为8倍的吸附原液体积，吸附容量为10l。结论接纳大孔树脂分散纯化的山茱萸总苷可用于制备环烯醚萜苷制剂。【关键词】山茱萸总苷；大孔吸附树脂；高效

2、液相色谱法；纯化Abstrat：bjetiveTstudythetehnlgialparaetersfpurifiatinfttalglysidefrrnusffiinalisitharprusresin.ethdsThesaplevlue,elutinnentratin,vlueandsaplenentratinerebservedandparediththseelutinslvents.ThepurifiatinfirididglysidesasevaluatedithntentsfrrnisideandlganinbyHPLethdsResultsElutingslventas50%et

3、hanl,thearprusresinusedtienededtbereneed,thebestsaplenentratinas0.25g/l,thevluefelutingslventasEighttiesthefvluefsapleslutin,theabsrptinapaityas10l.nlusinIrididglysideanbepurifiedbyarprusItisafeasibleethdtprduepreparatinKeyrds：Ttalglysidesfrusffiinalis;arprusresin;HPL;Purifiatin山茱萸总苷(Ttalglusidesfrr

4、nusffiinalis，TG)为中药山茱萸的重要药效部位，包罗马钱苷lganin、莫诺苷rrniside、獐牙菜苷、马鞭草苷、山茱萸新苷等十余种环烯醚萜苷，已经证明可以或许落血糖并对糖尿病心脏和肾病病变有必然的庇护作用13，有抗炎、免疫按捺作用46，对阿尔采末病和脑堵塞有治疗作用78。大孔吸附树脂对单味中药提取物中苷类、黄酮、生物碱的分散纯化结果精良9，10。本工艺应用大孔吸附树脂对山茱萸中环烯醚萜苷类身分举行分散纯化，并观察大孔树脂纯化山茱萸总苷的参数。1仪器与试药1.1仪器Agilent1100Series高效液相色谱仪安捷伦科技；KD-16H高速型离心机科大创新股份中佳分公司；BT12

5、5D十万分之一天平塞多利斯细密科学仪器；Heidlph2旋转蒸发仪。1.2药品与试剂山茱萸药材购于唐山市医药药材公司；马钱苷、莫诺苷比较品自提娶精制，经1H-NR和13-NR确定为马钱苷和莫诺苷，归一化法测定含量大于99.3%；HPD-100大孔树脂沧州宝恩化工；甲醇为色谱纯FisherheAlert，别的试剂均为阐发纯，水为重蒸馏水。2要领与结果2.1山茱萸吸附原液的制备称取山茱萸粉40目200g，加8倍量30乙醇浸泡留宿，回流提取2次，1h/次，过滤，归并滤液，滤液接纳乙醇，浓缩制成每毫升相称于0.25g生药的溶液，静置，滤过，即得山茱萸吸附原液，4保存备用。2.2大孔吸附树脂预处置惩罚与

6、再生大孔吸附树脂一样平常含有未聚合的单体及残留溶剂，利用前须先行撤除。树脂用95%乙醇浸泡24h，倾去上浮物后湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混淆不出现白色乳浊征象即可，然后以大量蒸馏水洗净柱中乙醇，水浸泡备用；再生时用90乙醇洗脱至流出液无色，以大量水洗去乙醇即可。假设树脂颜色较深，用0.1l/L氢氧化钠溶液浸泡2h，用水洗至中性，再加0.1l/L盐酸溶液浸泡2h，用水洗至中性，末了用95%乙醇洗至洗脱液与等体积水混淆不污浊，用蒸馏水洗至无醇，备用。2.3山茱萸总苷中莫诺苷和马钱苷的含量测定色谱柱为Diansil18色谱柱2504.6，5；活动相为甲醇-水溶液梯度洗脱，洗脱剂甲醇在08in为3

7、2%，在815in为32%36%，在1520in为36%；柱温为室温；流速1l/in；检测波长237n；进样量20l。配制莫诺苷和马钱苷的系列比较品溶液，20l进样阐发。以莫诺苷和马钱苷的峰面积Y为纵坐标，莫诺苷和马钱苷的浓度为横坐标，经回归处置惩罚得尺度曲线的回归方程。此中莫诺苷为Y=25404+21.01r=0.9995，马钱苷为Y=20518+25.36r=0.9993。莫诺苷和马钱苷在0.01360.533g/l范畴内线性精良。2.4HPD-100大孔树脂纯化山茱萸总苷工艺参数的研究取HPD-100大孔树脂20g，湿法装柱，预处置惩罚后备用。别离取0.25g/l的吸附原液5l，5支大孔

8、树脂柱上样，通过举举措态吸附。用水洗脱树脂柱至洗脱液近无色，再用10%，30%，50%，70%，95%乙醇50l洗脱，网络洗脱液，定容50l，测定莫诺苷和马钱苷的含量。结果见表1。由表1可知山茱萸总苷最正确洗脱剂为50%乙醇。取差异浓度0.25，0.5，1，2g/l的山茱萸吸附原液5l，用50%乙醇50l洗脱，网络洗脱液，定容50l，测定莫诺苷和马钱苷的含量。结果见表2。由表2可知SPF-100大孔树脂的最正确上样浓度为0.25g/l的吸附原液。表2差异上样浓度的含量测定结果略别离取0.25g/l的吸附原液5l，大孔树脂柱上样，用水洗脱树脂柱至洗脱液近无色，再别离用50%乙醇30l(6倍，40

9、l(8倍，50l10倍洗脱，网络洗脱液，定容50l，测定莫诺苷和马钱苷的含量。结果见表3。由表3可知SPF-100大孔树脂的洗脱溶剂的用量10倍的吸附原液体积，但综合思量洗脱溶剂用量及接纳溶剂等因素，可选8倍量的洗脱溶剂。表3差异洗脱溶剂用量的含量测定结果略别离取0.25g/l的吸附原液5，10，15，20l，大孔树脂柱上样，用水洗脱树脂柱至洗脱液近无色，再别离用50%乙醇50l洗脱，网络洗脱液，定容50l，测定莫诺苷和马钱苷的含量。结果见表4。由表4可知SPF-100大孔树脂在吸附原液为5l时吸附最完全，但综合思量，吸附原液为10l时服从最高。表4差异吸附容量的含量测定结果略3讨论大孔树脂精

10、制苷类具有吸附容量大、洗脱服从高等长处，使马钱苷和莫诺苷的含量进步，在预处置惩罚的条件下不失为一种提取苷类的精良吸附剂。中药身分在树脂上的吸附大概为放热历程，低温有利于进步中药身分的比上柱量，因此上样前将吸附原液放冰箱低温处置惩罚可增大吸附量。吸附原液上柱前，必需举行抽滤或离心等预处置惩罚以撤除沉淀和杂质，上样液愈澄清，山茱萸总苷的纯化率愈高，亦能进步树脂的利用寿命。曾接纳紫外法测定山茱萸总苷的含量，但是经大孔树脂富集后得到的总苷在237n摆布并没有最大汲取峰，加上紫外法滋扰多，特殊是在中药身分庞大的环境下很难确定其正确性，莫诺苷和马钱苷是山茱萸总苷中含量最高的两种环烯醚萜苷，约占总苷的85，

11、应选用了HPL法同时测定莫诺苷和马钱苷的要领确定山茱萸总苷的分散纯化工艺。【参考文献】1陈霞,沈爱宝,钱东生.山茱萸差异提取部位对小鼠血糖的影响J.南通医学院学报,2022,24(4):365.2时艳,许惠琴.山茱萸环烯醚萜总苷对实行性糖尿病心脏病变的庇护作用J.南京中医药大学学报,2022,22(1):35.3XuHQ,HaHP,ZhangX,etal.rrnisideprtetsulturedhuanubilialvEinendthelialellsfrdaagebyhighabientgluseJ.AtaPharalgiaSinia,2022,25(4):412.4赵世萍,陈玉武,郭景珍.山茱萸总甙的抗炎免疫按捺作用J.中日友爱病院学报,1996,10(4):295.5李建民,周勇,张丽,等.山茱萸总甙对HUVE表达IA-1、D44的影响J.中国免疫学杂志,2000,16(11):604.6孟晶，唐仕波，李辰，等.山茱萸总甙对大鼠角膜移植排挤反响免疫按捺作用机制研究J.中国病理生理杂志，2022，21(5):927.7褚燕琦，李玮，张兰，等.山茱萸环烯醚萜苷对卵白磷酸酶按捺剂冈田酸拟阿尔采末病细胞模子的作用J.中国药理学转达，2022，22(8):96