无菌灌装过程验证剖析

1、文件名称无菌灌装过程验证文件编号MX04K- YZ-F-G -01起草人起草日期年 月日审核人审核日期年 月日批准人批准日期年 月日执行日期年 月日版本号1验证方案会签单有关部门人员已冋意本验证方案会签部门签名日期生产部质量管理部设备动力部制剂九车间验证委员会审批审批意见:批准人:年 月 日 录目1引言1.1验证项目小组成员及责任1.2验证工作中部门责任2概述3验证的目的4依据4.1生产相关文件4.2主要设备5验证项目6污染率计算7验证周期8附件1引言1.1验证项目小组成员及责任1.1.1验证项目小组成员小组职务姓名所在部门职务组长部长组员p- I-R 口 工乙员组员部长组员部长1.1.2责任

2、验证项目小组组长：组织进行验证方案的设计、起草；验证过程的组 织、协调、保证验证按预期的计划完成，提出验证报告。验证项目小组成员：分别负责落实方案实施中各部分验证的具体工作。1.2验证工作中部门责任：验证小组：组织编写验证方案，领导协调验证项目的实施，协调验证 委员会 及专家组的工作，对验证过程的技术、质量负责，参加验证方案的会签、终审和批准，参加验证报告的批准。生产部：负责组织协调并保证每批产品的生产全过程，严格按照本方 案实施。质量管理部：负责验证计划的组织落实、验证过程监控、结果评价及设备、设施的微生物限度、培养基取样及药液准备、成品取样；负责验证过程的检验、测试及结果报告。设备动力部：

3、负责在公用系统、生产设备、设备维修及校正等各项工作中提供及时可靠的支持和服务。物料管理部：负责为验证过程提供物资支持 制剂九车间：负责全面协调各项验证试验，并负责报告试验结果。概述厂房、设施、设备均已经过全面验证。在生产线投入生产前，用胰酶 酪胨大 豆肉汤培养基无菌溶液代替无菌药液模拟生产并于冻干箱内模拟冻 干，然后进行 微生物培养，污染率 v 0.1% 为合格。验证目的无菌灌装过程验证目的是通过无菌培养基溶液模拟灌装、 冻干的试验 的方法， 证明无菌灌装过程的可靠性。依据相关文件KZCX 超声波洗瓶机标准操作规程SH-1 远红外式隧道灭菌烘箱标准操作规程KJCS-1 型全自动湿法超声波胶塞清

4、洗机标准操作规程HGS 型液体灌装加塞机标准操作规程DZG-130 刀式自动轧盖机标准操作规程HGS 型液体灌装加塞机清洁标准操作程HGS 型液体灌装加塞机验证方案DZG-130 刀式自动轧盖机验证方案HW2166-06C 滑动门卫生级真空灭菌柜验证方案JRSH- H 型双门净化热风循环烘箱验证方案Lyo-10 型冻干机标准操作规程Lyo-10 冻干机清洁标准操作规程Lyo-10 冻干机验证方案主要设备KZCX 超声波洗瓶机SH-1 远红外式隧道灭菌烘箱KJCS- 型全自动湿法超声波胶塞清洗机HGS 液体灌装加塞机DZG-130 型刀式自动轧盖机Lyo-10 型真空冷冻干燥机验证项目胰酶胳胨大

5、豆肉汤培养基无菌干粉的性能试验胰酶胳胨大豆肉汤培养基无菌干粉的溶解性试验：取胰酶胳胨 大豆肉 汤无菌干粉 0.3g 加入 15ml 试管中，注入 10ml 无菌注射用水（室温）， 盖好胶 塞，振摇，应能完全溶解。胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉微生物生长性能试验：胰酶胳胨大 豆肉汤 无菌干粉按处方溶解后，灌装于大试管中，经115C 热压灭菌 30 分钟（严格按无菌操作也可不灭菌） 。取 10 支接种 1.0ml 枯草杆菌菌液 50100cfu ; 另取 10 支接种 1.0ml 白色念球菌菌液 50100cfu ; 分别在 30? 35C 和 23? 28C 培养 14 天，14 天内各管均应出现明显

6、的所接种微生物的 生长。胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉无菌性试验：胰酶胳胨大豆肉汤无 菌干粉 在层流罩下用无菌注射用水（室温）溶解，灌装于无菌大试管中， 不需灭菌。取 10支于30 35 C,另10支于23? 28C培养14天，各试管 均应无任何微生物生 长。按清洁标准操作规程对洁净区设备和空间进行清洁卫生，按洁净 区臭氧 消毒标准操作规程对洁净区消毒（若属于正常生产过程则可不消 毒）。清洁消毒 后，检查洁净区沉降菌数和空气洁净度。验证过程无菌环境的控制与监测（每批灌装同时进行）微生物的控制与监测在模拟灌装过程，分别对灌装室操作人员的胸前、手臂下和 手套三 点进行取样，手套全部检出菌数 V 2 个，

7、一个操作者的三个取样点检 出菌数之和 V 10 个。灌装前、后对接触药液的各容器具做无菌程度检查。应均不 得有细 菌和霉菌生长。模拟灌装过程，分别对墙壁、门、设备表面进行无菌程度检 验。a 取样面积： 25cm 2/ 点b 取样点：无菌理瓶转盘 2 个 灌装门 2 个 灌装墙 2 个 灌装机 4 个 冻干机（1） 2 个 冻干机（ 2） 2 个 储液罐表面 2 个c 其中无菌理瓶转盘和灌装机、冻干机按无菌检查法操作，其它按菌 落检查 操作。做细菌、霉菌检查分别在两个邻近取样点取样。d 合格标准：无菌理瓶转盘、灌装机及其零部件、冻干机均不得有细 菌和霉 菌生长。墙壁、门、储液罐表面细菌数 V 3

8、 个，霉菌数 V 1 个。空气中微生物数量监测（模拟灌装过程同时进行） 按洁净区菌落检查操作规程对各房间空气中的沉降菌进行监测，另外，在灌装机上放 4 个培养基平皿，其中两个作细菌数检查，另两个作霉菌数检查；在每台冻干机上分别放 4 个培养基平皿，其中两个作细菌数检查， 另两个作霉菌 数检查。灌装机、冻干机及百级区域上细菌数、霉菌数均应 V 1; 10000 级区域 菌落数应 V 3 个。胶塞、西林瓶的无菌性检验： 每 30 分钟分别取胶塞、 西林瓶共 取三次， 做细菌和霉菌检查，均应不长菌。模拟灌装操作人员经过 GMP 、无菌操作、无菌更衣技术培训。室内操作人数与正常生产相同。灌装速度与正常

9、灌装速度相同或略高。西林瓶、胶塞、铝盖、无菌衣按正常生产洗涤灭菌。533.5 生产完毕按清场标准操作规程和清洁标准操作规程清场和清 洁卫生。5.3.3.6 每天生产 3000 支以上，连续生产 3 天。5.3.3.7 灌装过程：按 HGS 液体灌装加塞机标准操作规程操作，每瓶灌装 10ml 培养基无菌溶液。装量稳定后，即连续灌装3000 支以上，盖好胶塞，每支标记顺序号。编号后送至冻干箱内，冷冻至5 度，保温 24小时，压塞，轧盖。结果检验5.3.4.1 阴性对照模拟灌装过程：模拟灌装过程，取 20 个无菌西林瓶， 按无 菌操作法，每瓶加入10ml培养基溶液，其中10支在3035 C培养14天

10、，另10 支在 2328C 培养 14 天，作为阴性对照。5.342 阳性对照：模拟灌装过程，随机取出 20 瓶已灌装培养基的西 林瓶， 其中 10 支各接种 1.0ml 的枯草芽胞杆菌菌液 50100 cfu, 另 10 支各 接种 1.0ml 的白色念珠菌菌液 50100 cfu 。分别在 3035C 和 2328C 下培 养 14 天，至少 50%的接种西林瓶的培养基中有明显的接种微生物生长，并 以此作为阳性对照。试验样品培养：将样品在 23? 28C 下培养 7天，再于 30? 35C 下培 养至 14 天。第 14 天时检查培养的全部样品的微生物生长情况。若发 现有微生物 生长，明确

11、记录瓶号、瓶数，同时检查铝盖、胶塞的密封情况。 若有破损应记录 破损数，并检查其破损原因，对于有微生物生长的样品， 应鉴别其菌落、细胞学 形态学及革兰氏染色特性等。污染率计算X 100%微生物生长的瓶数微生物污染水平邙日性生长率） % =总灌装瓶数一破损瓶数7验证同期：每年进行一次验证，工艺条件改变时需重新验证8附件附件模拟分装用培养基确认培养基名称确认内容检查结果备注胰酶酪胨大豆肉汤无菌干粉溶解情况可溶口不可溶口胰酶酪胨大豆肉汤无菌干粉微生物生长性能试验确认合格口不合格口胰酶酪胨大豆肉汤无菌干粉无菌性试验确认合格口不合格口确认人复核人确认日期胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉微生物生长性能试验记录编号

12、菌种接种微生物生长情况备注1有口无口2有口无口3有口无口4有口无口5有口无口6有口无口7有口无口8有口无口9有口无口10有口无口1有口无口2有口无口3有口无口4有口无口5有口无口6有口无口7有口无口8有口无口9有口无口10有口无口检验人复核人胰酶胳胨大豆肉汤无菌干粉无菌性试验记录编号培养温度微生物生长情况备注1有口无口2有口无口3有口无口4有口无口5有口无口6有口无口7有口无口8有口无口9有口无口10有口无口11有口无口12有口无口13有口无口14有口无口15有口无口16有口无口17有口无口18有口无口19有口无口20有口无口检验人复核人操作间清场确认操作间名称清场人确认内容检查结果备注检查前

13、一批次清场记录是否完备是口否口检查操作间是否有物料残留是口否口检查操作间是否有文件残留是口否口检查操作间是否残留上批遗留的污染物是口否口确认人复核人确认日期设备清洁确认记录与工艺有关的主要设备确认内容确认结果备注检杳以上主要设备的设备验证证书是否合格，并在合格期限内合格口不合格口检查设备清洁记录是否完整，确认各设备内部无前一批遗留污染物合格口不合格口确认人复核人确认日期洁净室洁净度确认表洁净室名称房间号洁净室级别检杳项目监测标准检查结果结论尘埃粒子监测报告合格并在有效期内符合口不符合口沉降菌符合相应级别标准cfu符合口不符合口温度符合相应级别标准符合口不符合口湿度符合相应级别标准RH符合口不符

14、合口压差符合相应级别标准Pa符合口不符合口确认人复核人确认日期洗瓶工序确认记录确认内容确认结果备注检查洗瓶记录是否规范，是否符合西林瓶清洁程序中要求合彳格口不合格口可见异物检查是否无杂质取样瓶数： 瓶 有异物瓶数 瓶 有白点瓶数 瓶有黑点瓶数瓶有其他杂质瓶数瓶合彳格口不合格口检查隧道火菌烘箱验证报告，确认其在有效期内合彳格口不合格口隧道式火菌干燥机运转正常，挂有正确状态标志。合彳格口不合格口确认人复核人确认日期胶塞处理工序确认表确认内容确认结果备注检查胶塞清洁记录是否规范，是否符合胶塞清洁程序中要求合彳格口不合格口检查胶塞清洗后水样可见异物是否合格合彳格口不合格口检查胶塞清洗机验证报告，确认其

15、在有效期内合彳格口不合格口检查胶塞清洗机运转正常，挂有正确状态标志。合彳格口不合格口确认人复核人确认日期物品火菌确认表灭菌器型号火菌日期确认内容确认结果备注检查压力烝汽消毒器验证报告，确认其在有效期内合格口不合格口检查物品灭菌程序及摆放是否与验 证时状态致。并检查指示剂变色情 况是否符合灭菌程序（121 C, 20分钟以上）。合格口不合格口检查净化灭菌烘箱验证报告，确认其在有效期内合格口不合格口检查物品灭菌程序及摆放，检查指示剂变色情况是否符合灭菌程序（200 C, 150分钟以上）合格口不合格口确认人复核人确认日期检查清洁消毒情况记录内容检查结果备注洁净区设备清洁情况已清洁口未清洁口洁净区清

16、洁情况已清洁口未清洁口沉降菌检查情况已检口未检口尘埃粒子检查情况已检口未检口温湿度检查情况已检口未检口压差检查情况已检口未检口确认人复核人确认日期无菌环境的控制与监测确认确认内容检查结果备注操作人员检出菌落确认合格口不合格口手套检出菌落确认合格口不合格口容器具检出菌落确认合格口不合格口墙壁、门设备表面的无菌程度确认合格口不合格口胶塞无菌性确认合格口不合格口西林瓶无菌性确认合格口不合格口确认人复核人确认日期操作者菌落检查记录被检验操作者检出菌落数备注胸前手臂下手套检验人复核人接触药液各部位菌落检测记录测点洁净级别细菌数霉菌数备注容具1容具2容具3容具4检测人复核人生产环境无菌程度检查记录检验部位

17、取样点细菌数霉菌数备注无菌理瓶转盘12灌装机（1）1234灌装门12灌装墙12冻干机（1）12冻干机（2）12检验人复核人空气中菌落检测记录测点洁净级别细菌数霉菌数备注检测人复核人胶塞、西林瓶的无菌性检验记录时间被检物硫乙醇酸盐液体培养基霉菌培养基备注胶塞西林瓶胶塞西林瓶胶塞西林瓶胶塞西林瓶检验人复核人培养基无菌灌装确认批号灌装机编号操作人灌装量灌装支数确认内容检查结果备注检查灌装机运行是否正常是口否口冻干机运行是否正常是口否口轧盖机运行是否正常是口否口灌装完毕后抽样检查装量是口否口检查生产过程中有无异常现象发生有口无口培养基培养条件培养基灌装污染率灌装支数：合格支数：灌装污染率：确认人复核人确认日期阴性对照实验记录编号长菌情况备注1长菌口未长菌口2长菌口未长菌口3长菌口未长菌口4长菌口未长菌口5长菌口未长菌口6长菌口未长菌口7长菌口未长菌口8长菌口未长菌口9长菌口未长菌口10长菌口未长菌口11长菌口未长菌口12长菌口未长菌口13长菌口未长菌口14长菌口未长菌口15长菌口未长菌口16长菌口未长菌口17长菌口未长菌口18长菌口未长菌口19长菌口未长菌口20长菌口未长菌口检验人复核人阳性对照实验记录编号接种量微生物生长情况备注1有口无口2有口无口3有口无口4有口无口5有口无口6有口无口7有口无口8有口无口9有口无口10有