微生物的实验室培养学案(有答案

1、欢迎阅读专题二微生物的培养和应用课题1微生物的实验室培养目标定位】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作自主预习】一、培养基：概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其培养基。可分为培养基和培养基。营养构成：各种培养基一般都含有、_微生物生长对、以及的要求。培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。思考1从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：（一）获得纯净培养物的关键是1.234.（二）消毒和灭菌1消毒是指方法有灭菌是指。常用的方法有：

2、、灭菌。分别适用于那些用具？思考2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？思考3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？思考4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是;随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为并维持min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。三、实验操作-一大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是，本实验可分成两个阶段进行。的营养基质叫，此外还要满足以及，具体操作如下:对实验操作的、操作者的和进行将用于微生物培养的、和等器具进行为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行

3、。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。常用的消毒法。一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是、o思考5在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？思考6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？欢迎阅读倒平板：待培养基冷却至C左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：TOC o 1-5 h z在火焰旁右手拿，左手；使锥形瓶的瓶口；左手将培养皿，右手，立亥寸盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板。思考7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？思考8平板倒置的目的是什么？思考9若皿盖和皿底之间粘有

4、培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？（二）纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：将在酒精灯火焰上灼烧直至。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到的目的。将冷却的接种环伸入到。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。将平板培养。思考10取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种

5、环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？在作第二次以及其后的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开始划线？稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度，然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的。系列稀释操作：取盛有mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。从101倍液中吸取mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。思考11系列稀释操作的注意事项是什么？涂布平板操作：将浸在盛有的烧杯中。取少量（不超过），滴加到培养

6、基表面。将的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却。用涂布器将菌液地涂布在培养基的表面。涂布时可，使菌液分布均匀。四、结果分析与评价培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？欢迎阅读培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？思考12在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？思考13频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？【随堂检测设计】下列关于微生物营养的说法，正确的是A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量c.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也能提供能量细菌培养过程中分别采用了

7、高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌接种针、手、培养基B.高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针D.接种针、手、高压锅以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯待培养基冷却至50C左右时进行倒平板待平板冷却凝固约510min后将平板倒过来放置【拓展训练设计】1.下列有关培养基的叙述正确的是培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基只有两类：液体培养基和固体培养基固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌2不同培养基的

8、具体配方不同，但一般都含碳源、磷酸盐和维生素B.氮源和维生素C.水、碳源、氮源和无机盐D.碳元素、氧元素、氢元素、氮元素获得纯净培养物的关键是将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌接种纯种细菌适宜环境条件下培养防止外来杂菌的入侵4下列常用的无菌操作中错误的是A.用酒精擦拭双手B.用氯气消毒水源C.实验操作应在酒精灯火焰附近进行D.玻璃器皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭有关倒平板的操作错误的是A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D.等待平板冷却凝固后需要倒过来放置有关平板划线操作正确的是使用已灭菌的接种环、培养皿

9、，操作过程中不再灭菌打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可最后将平板倒置，放人培养箱中培养有关稀释涂布平板法，叙述错误的是首先将菌液进行一系列的梯度稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面欢迎阅读再放在适宜条件下培养结果都可在培养基表面形成单个的菌洛8涂布平板操作需要用到A接种环、滴管、酒精灯B接种环、移液管、酒精灯涂布器、移液管、酒精灯D.涂布器、接种环、酒精灯9将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37C恒温箱的目的是A.对比观察培养基有没有被微生物利用B.对比分析培养基是否被杂菌污染C.没必要放

10、人未接种的培养基D.为了下次接种时再使用10菌种保藏应控制的条件是(1)湿度(2)低温(3)干燥(4)有光(5)隔绝空气(6)适当有氧A.(1)(4)(6)B.(2)(3)(6)C.(1)(5)(6)D.(2)(3)(5)平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是A利于大肠杆菌的接种B防止杂菌污染C利于培养的冷却D防止皿盖冷却水倒流入培养基鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在中保温1-2天看有无，如果没有说明制作合格，反之则不合格。参考答案基础知识一、1.营养物质生长繁殖液体固体2水.碳源氮源无机盐PH特殊营养物质氧气3维生素，酸性，中性或微碱性，无氧思考1：C、H、0、N、P、S是

11、构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97%以上。二(一)杂菌1空间衣着手，清洁和消毒2器皿接种用具，培养基，灭菌3酒精灯火焰4周围的物品(二)1略巴氏消酒精2略灼烧干热高压蒸气思考2:防止感染实验操作者。思考3避免妨碍热空气流通。思考4有利于锅内温度升高，100kPa,121C,1530，零，容器中的液体暴沸，实验操作、一1计算f称量f溶化f灭菌f倒平板思考5：防止牛肉膏吸收空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。思考6糖维生素和有机氮2：50，锥形瓶，拔出棉塞，迅速通过火焰，打开一条缝隙，将培养基倒入培养皿，倒过来放置思考7消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。思考8防止培养基冷去卩过程

12、中形成的水滴落至U培养基表面。思考9不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。思考10增大接种面积，保持通气并防止杂菌感染。答案。二、平板划线稀释涂布平板1通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线，接种环，烧红。，消灭试管口杂菌。欢迎阅读菌液中取出一环菌种。，伸入平板内划35条平行线，第一区划线末端开始向第二区域内，第五区的划线与第一区划线，倒置放在培养箱中思考11消灭接种环上的微生物，的目的是消灭接种环上残留菌种，防止高温杀死菌种;防止细菌污染环境和操作者。获得由单个细菌形成的标准菌落。2不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，9mL，灭菌。，1。，1思考12操作中试

13、管口和移液管应在离火焰12cm处。整个操作过程中使用了1支移液管结果分析与评价1对照，培养基灭菌不彻底。2呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。思考14有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。思考15临时保藏法和甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4C冰箱中，每36个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在一20C冷冻箱中。【例1】解析：此题考查学生对微生物的营养和能源的理解。对异养微生物来说，含C、H、0、N的化合物既是碳源，又

14、是氮源。C0是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO和N。是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D启示：含C、H、。、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；无机物也可提供碳源、氮源和能源。【例2】解析：此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸气灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。答案：C启示：微生物培养过程中的无菌操作包括消毒和灭菌两大类，分别又有各种不同的方法

15、。对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。【例3】解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50C，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态。平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A启示：固体培养基的制作步骤是：“计算-称量-溶化-灭菌-倒平板”顺序不能颠倒。并且在制作过程特别是倒平板时彻底做到“无菌”。【例4】解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌)，所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B基础自测一、1A2C3D4D5C6C7D8D9C10B。11