红平菇菌丝体多糖的提取、结构分析和抗糖尿病作用研究

1、红平菇菌丝体多糖的提取、结构分析和抗糖尿病作用研究糖尿病(Diabetesmellitus,DM)是一种全球性的内分泌代谢疾病,表现在因胰岛素分泌不足而引起的糖、脂肪、蛋白质等代谢紊乱及体内酸碱失衡,以血糖水平升高为主要特征。另外,糖尿病还经常伴随着诸如糖尿病肾病(Diabeticnephropathy,DN)、糖尿病肝病(Diabetichepatopathy,DH)和糖尿病胰腺疾病(Diabetic-pancreaticdisease,DPD)等并发症的发生,致残、致死率高。目前,临床中糖尿病的治疗方法包括注射胰岛素和口服降血糖药物,但这些方法在长期使用中会产生毒副作用,因此,寻找天然的、

2、无毒的降血糖药物是非常必要的。红平菇(Pleurotusdjamor),又名桃红侧耳、红侧耳等,是一种食用、药用兼有观赏价值的珍稀蕈菌。但是目前关于红平菇的研究较少,未见菌丝体多糖(Myceliapolysaccharides,MPS)的提取及抗糖尿病药理活性的报道。本课题以红平菇为出发菌株,进行红平菇深层液体发酵获得菌丝体。通过单因素实验(Single-factortest,SFT)和响应面分析(Responsesurfacemethodology,RSM)等方法确定了红平菇酸提MPS(Acidic-extractableMPS,Ac-MPS9碱提MPS(Alkalic-extractabl

3、eMPS,Al-MPS)和酶提MPS(Enzymatic-extractableMPS,En-MPS)J最佳提取条件，并对三种红平菇MPS的结构和抗糖尿病及其并发症的生理活性进行研究,以期为从天然资源中开发和研究新物质提供参考,为临床糖尿病的药物治疗提供新的线索。目前主要获得以下研究成果。(1)红平菇MPS勺提取优化：参考现有的提取技术，优化红平菇MPS勺提取工艺。结果表明Ac-MPS勺最佳提取条件是加水倍数37.25,提取时间42.95min,HCl浓度0.20M,提取温度83.98oC,此条件下得率为1.97%;Al-MPS的最佳提取条件是加水倍数41.56,提取时间88.91min,Na

4、OHft度0.36M,提取温度74.90OC,此条件下得率为2.36%;En-MPS勺最佳提取条件是pH值7.36，加水倍数56.78,提取时间44.77min,提取温度35.36oC,此条件下得率为3.61%。上述提取过程中方差分析、满意度分析、准确度分析及异常值分析均表面模型可适用于Ac-、Al-和En-MPST艺条件的参数优化。(2)红平菇MPS勺结构测定：气相色谱图表明，Ac-MPS和Al-MPS均含有阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖，但单糖含量存在差异；En-MPS含有鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖；液相色谱分析显示，Ac-、Al-和En-MPS勺重均分子量(Weight-averag

5、emolecularweights,Mw)分别为2.33乂104Da5.26乂104Da和1.97乂104Da,其它分子量参数大小顺序为Al-MPSAc-MPSEn-MPS多分散系数d大小顺序为Al-MPSAc-MPSEn-MPS,表明En-MP解糖较均一；红外光谱结果显示,Ac-MPS是a-型糖昔键连接的味喃糖,Al-MPS是B-型糖昔键连接的味喃糖,En-MPS是B-型糖昔键连接的叱喃糖。(3)红平菇MPS寸糖尿病小鼠氧化应激的影响：Ac-、Al-和En-MPS匀能显著抑制链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病小鼠肝脏、肾脏和胰腺中的超氧化物歧化酶(Superoxi

6、dedismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和总抗氧化能力(Totalantioxidantcapability,T-AOC)活性的降低及脂质过氧化物(Lipidperoxide,LPO)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量的升高,表明Ac-、Al-和En-MPSM有较强抵制氧化应激的活性。并且结果表明，与Ac-MPSffiAl-MPS相比,En-MPS表现出更强的活性。红平菇MPS寸糖尿病小鼠脂代谢的影响：Ac-、Al-和En-MPQfg显著抑制糖尿病小鼠血清中甘油三

7、酯(Triacylglycerols,TG)、总胆固醇(Totalcholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-densitylipoproteincholesterol,LDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(Verylow-densitylipoproteincholesterol,VLDL-C)和动脉粥样硬化指数(Atherogenicindex,AI)水平的升高和高密度脂蛋白胆固醇(High-densitylipoproteincholesterol,HDL-C)水平的降低，表明红平菇MPQfg够改善小鼠的脂代谢紊乱情况。(5)红平菇MPS寸糖尿病小鼠器官的修复作用：Ac-、Al-和En-MPST显著降低小鼠血清中的谷丙转氨酶(Alaninetransaminase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartatetransaminase,AST)、尿素氮(Bloodureanitrogen,BUN)、肌酐(Creatinine,CRE)的水平,可显著抑制STZ诱导的器官指数的升高；小鼠肝脏、肾脏和胰腺的外观及组织病理学切片也随着红平菇MPS勺干预而逐渐趋于正常。并且En-MPS勺作用效果要强于Ac-MPSF口Al-MPS,说明En-MPSt保护肝脏、肾脏和