用GOD法测定血清中葡萄糖浓度

1、葡萄糖氧化酶法测定(cdng)血清葡萄糖实验(shyn)九共十八页一、实验(shyn)目的 (1)了解血糖(xutng)的概念。(2) 掌握血糖的测定方法葡萄糖氧化酶法。共十八页What？ 血糖及正常(zhngchng)血糖水平:血糖(xutng)：指血液中的葡萄糖.正常血糖浓度： 空腹波动在3.896.7mmol/L（70110mg/dl） 餐后2h内应7.8mmol/L（140mg/dl）。 共十八页血糖的来源(liyun)、去路 共十八页共十八页血糖(xutng)水平恒定的生理意义 保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡萄糖

2、供能；红细胞没有(mi yu)线粒体，完全通过糖酵解获能；骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。共十八页测定方法无机化学(wjhuxu)法： Folin-Wu法有机化学(yu j hu xu)法：邻甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法血糖测定的常用方法HOW？共十八页 方法 类型(lixng) 原 理 用途及备注磷钼酸法 定量 G+Cu2+Cu2O 稳定、准确、但对（Folin-Wu） 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 蓝色钼化合物 葡萄糖无特异性，（430nm） 受血中非糖还 原物 质的影响。 邻甲苯胺法 定量 G+邻甲苯胺蓝绿色的席弗(Schiff)碱 较Folin-Wu法特异（630nm） 但

3、不及酶法。 D-甘露糖能与邻甲 苯胺反应，生成类 似吸收光谱，造成 正误差。（一）化学法共十八页酶法分析是指用酶作为工具(gngj)定量测定某种物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。（二）酶 法共十八页酶法分析的主要(zhyo)方法： 单酶反应定量法和偶联酶反应定量法单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测定某种物质的方法。偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反应底物或产物的物理化学手段无法区分时，还可以借助另一种酶作为指示酶，通过偶联反应进行(jnxng)定量分析。共十八页方法 类型 原 理 用途及备注己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+AD

4、P 血清尿液脑脊液、（HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 公认参考方法 动态 GA-6-P + NADPH 操作简便，特异 终点 （340nm） 性和灵敏性均高 推荐常规(chnggu)方法葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2化酶（POD） H2O2 + 染料有色染料 偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量（Trinder） （4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 红色琨类化合物505nm）共十八页葡萄糖氧化酶-过氧化物(u yn hu w)酶法原理（1）葡萄糖O2H2O（2）H2O24-氨基(nj)安替吡啉苯酚葡萄糖酸H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O 红色醌式物质过氧

5、化物酶（POD）Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度共十八页（1）取3支试管(shgun)，按下表加入试剂:试剂标准管(ml)测定管 (ml)空白管(ml)血清样品0.03葡萄糖标准液0.03蒸馏水0.03酶酚混合试剂3.003.003.00实验(shyn)步骤：充分混匀，37 水浴中保温20min；冷却至室温后，505nm处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度值。共十八页 （2）计算 依据朗伯-比尔定律： A=KLC 血清(xuqng)葡萄糖= （mmol/L）参考值：空腹血清葡萄糖浓度:3.896.11mmolL测定管吸光度标准管吸光度标准(biozhn)液

6、浓度共十八页注意事项：本法用血量甚微，操作中应直接加标本(biobn)至试剂中，再吸试剂反复冲洗试管。此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可感染过氧化物酶发硬，造成结果假性偏低。严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。共十八页临床意义：生理性高血糖：摄入高糖食物(shw)，情绪紧张病理性高血糖： 糖尿病 内分泌腺功能障碍 颅内压增高 脱水引起高血糖生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。调节血糖(xutng)水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质

7、激素和肾上腺素。共十八页思考题：本实验原理为酶促化学反应(fnyng)，为何未加终止剂终止酶的反应(fnyng)？本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸酶活力测定中的显色反应有何异同？为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？ 葡萄糖氧化酶法： 3.896.11mmol/L Folin-Wu法： 4.46.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.896.11mmol/L共十八页内容摘要葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖。血糖及正常血糖水平:。空腹波动在3.896.7mmol/L（70110mg/dl）。餐后2h内应7.8mmol/L（140mg/dl）。保证重要组织器官的能量(nngling)供应，特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。无机化学法： Folin-Wu法。有机化学法：邻甲苯胺法。（1）葡萄糖O2H2O。（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚。调节血糖水平