药物分析-第09章-维生素类药物的分析课件

1、第九章 维生素类药物的分析维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。主要用于机体的能量转移和代谢调节人体不能合成维生素，需从食物中摄取。维生素并非同属一类化合物，有些是醇、酯，有些是酸、胺，还有些是酚和醛类。VitMVitPP脂溶性： VitA、D2、D3、E、K1等 水溶性： VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺第一节 维生素A基本结构与主要性质基本结构：具有共轭多烯侧链的环己烯 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :123456789 维生素A 全反式 325.5

2、100% 新维生素Aa 2-顺 328 75%新维生素Ab 4-顺 320.5 24%新维生素Ac 2, 4-顺 310.5 15%异维生素Aa 6-顺 323 21%异维生素Ab 2,6-顺 324 24% 相对生物效价 名称 顺反异构生物效价一种营养素的生物学效价是指动物食入营养素中能被小肠吸收并参与代谢过程或贮存在动物组织中的部分占食入总量的比值。 相对生物效价指对某一标准物质的生物学效价的比值。 主要化学性质：易发生脱氢、脱水、聚合反应：VitA2VitA3鲸醇溶解性：不溶于水，微溶于乙醇，易溶于有机溶剂（三氯甲烷、乙醚、环己烷）和植物油等。共轭多烯侧链易被氧化： 或有金属离子存在时更

3、易氧化变质环氧化物VitA醛VitA酸CHCl3紫外吸收特性：维生素A分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，在325328nm有最大吸收。与三氯化锑呈色维生素在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。鉴别实验三氯化锑反应维生素在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷中即显蓝色，渐变成紫红色。原理：维生素A和氯化锑（）中存在的氯化高锑（V）作用形成不稳定的蓝色碳正离子。蓝色蓝色紫红注意事项：反应需在无水、无醇的条件下进行。水可使三氯化锑水解成氯化氧锑（SbOCl）。乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消失。紫外分光光度法维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶液在326nm处有最大吸收。在盐酸催化下

4、加热，发生脱水生成去水维生素A（多一个双键），最大吸收红移，出现3个吸收峰。max为326nm一个吸收峰max为350390nm三个吸收峰去水VitA（VitA3）VitA薄层色谱法方法吸附剂：硅胶G；展开剂：环己烷-乙醚（80:20）显色剂：三氯化锑溶液判断：比较供试品和对照溶液所显蓝色斑点位置含量测定紫外分光光度法（三点校正法）维生素A的最大吸收波长：325328nm杂质干扰（310340nm）：去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）光照产物（无活性聚合物：鲸醇）立体异构体（新维生素Aa、新维生素Ab等）氧化产物（环氧化物、维生素A醛、维生素A酸）三点法测定原理：在三个波长处

5、测得吸光度，然后计算含量。条件：杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小。物质对光的吸收具有加和性。波长的选择1：VitA的max（328nm）；2、3：分别在1的两侧各选一点第一法（等波长差法）：加和性：加和性：（式1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线（式2）将X2、X3代入式1：（式4）（式3）式3式4：A1(校正)为消除杂质干扰后的吸光度值：1、2、3为预先选定波长K1、K2是维生素A纯品测得的吸光度比值用直接法测定维生素A醋酸酯： 1=328nm、2=316nm、3=340nm第二法（等吸收比法）：FEM与FDL为相似三角形：供试品在1

6、、2、3处的吸光度分别为：A1、A2、A3：即： 又：即： 将X、Y代入式 1 ：（式 1）用皂化法测定维生素A醇： 1=325nm、2=310nm、3=334nm所求的值较实际应得之值要高2.6%2.7%，根据实验证明，乘以97.35%后较准确:吸光度校正小结校正都是通过最大吸收波长及其两侧二个波长的三点法进行；选择三点的共同要求是：在此波长范围内杂质的额吸收再一条直线上。校正公式有两种类型：等波长差法和等吸收比法。使用公式时要注意溶液种类以及供试品是维生素A酯或维生素A醇。测定方法第一法：直接测定法方法：如供试品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂（环己烷）溶解供试品，制成每1ml含915IU的

7、溶液后直接测定。在300、316、328、340、360nm处的吸光度，确定最大吸收波长（328nm）。适合于纯度高的维生素A醋酸酯。计算：求E1cm1%A：实测吸光度A238或校正吸光度A238（校正）C：为混合样品的浓度A值的选择判断max是否在326329nm之间max在326329nm之间改用第二法是否 求算Ai /A328并与规定值比较 规定值 差值判断差值是否超过规定值的0.02有一个以上超过0.02无超过0.02 计算 A328（校正） 用A328计算03%15%3%第二法第二法A328(校正)A328(校正)f求效价（IU/g）：每g供试品中所含维生素A的国际单位数。1900：

8、维生素A醋酸酯在环己烷溶液中 的换算因子维生素A的国际单位（IU/g）国际规定：1IU=0.344g维生素A醋酸酯；1IU=0.300g维生素A醇；所以：每1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数：每1g维生素A醇相当的国际单位数：换算因子维生素A的E1cm1%维生素A醋酸酯：维生素A醇：求维生素A醋酸酯占标识量的百分含量：A：实测吸光度A238或校正吸光度A238(校正)D：供试品的稀释倍数L：比色池厚度W：供试品取用量W：胶丸的平均内容物重量 1900：维生素A醋酸酯在环己烷溶液中的换算因子第二法:皂化法方法：如供试品中干扰测定的杂质较多，且用第一法无法消除杂质干扰时，可加KOH乙醇溶液煮沸回流

9、皂化。皂化液经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥处理，用异丙醇溶解残渣并稀释。测定300、310、325、334nm处的吸光度，并确定最大吸收波长（325nm）。适合于维生素A醇。计算：求E1cm1%A：实测吸光度A235或校正吸光度A235（校正）C：为混合样品的浓度A值的选择判断max是否在323327nm之间max在323327nm之间取未皂化样品用色谱法纯化后再测定是否 求算A300 /A325并与规定值比较判断A300/A325是否大于0.73取未皂化样品用色谱法纯化后再测定是否计算A325(校正)03%3%f求效价（IU/g）：1830：维生素A醇在异丙醇溶液中 的换算因子求维生素A

10、醋酸酯占标识量的百分含量： VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000 VitA IU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并测得下列波长处吸收度。例A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328

11、：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素A的含量？A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =优点：简便、快速max：618nm620nm，符合Beer定律，可采用标准曲线法定量。缺点：呈色不稳定（510s内）水分干扰温度对呈色影响大，与标准曲线温差1专属性差，某些有关物质均与SbCl3显蓝色三氯化锑有强腐蚀性三氯化锑比色法第二节 维生素B1

12、维生素B1广泛存在于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。用于治疗维生素B1缺乏病、多发性神经炎和胃肠道疾病。基本结构与主要性质基本结构由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季胺类化合物。氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)HClCl-主要性质溶解性易溶于水（显酸性）、微溶于乙醇、不溶于乙醚硫色素反应噻唑环在碱性介质中可开环，与嘧啶环上的氨基环合，再经铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。紫外吸收特性具紫外吸收，最大吸收波长为246nm。与生物碱沉淀试剂反应分子中含有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），可与某些生物碱沉淀试剂（碘化汞钾、三硝基苯酚、碘溶液和硅钨酸）反应生成

13、组成恒定的沉淀。氯化物的特性维生素B1为盐酸盐，其水溶液显氯化物的鉴别反应。鉴别试验硫色素反应原理:在碱性介质中可被铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHOCH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNCH3NNaSC2H4OHNNH3CNCH3NNaSC2H4OHNNH3CNCH3NSC2H4OHH（硫色素）（O）NNH3CNCH3NSC2H4OHHNNH3CNCH3NSC2H4OH硫色素反应为维生素B1所特有的专属反应方法：取供试品约5mg加NaOH试液2.5ml溶解加铁氰化钾0.5ml与正丁醇5ml，振摇上层溶液显蓝

14、色荧光加酸使呈酸性荧光消失加碱使呈碱性荧光又重现沉淀反应与碘化汞钾生成淡黄色沉淀与碘生成红色沉淀与硅钨酸生成白色沉淀与苦酮酸形成扇形白色结晶氯化物反应：本品水溶液显氯化物的鉴别反应。硝酸铅反应与NaOH共热，分解产生NaS，可与硝酸铅生成黑色沉淀。含量测定非水滴定法原理：维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中（在醋酸汞存在下），均可与高氯酸（0.1mol/L）作用。喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）注意事项：醋酸汞可与氢卤酸作用生成非解离的卤化汞溶液，已消除氢卤酸盐对非水滴定法的干扰。维生素B1具有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为1:2。紫外分光光度法（每片）相当于标示

15、量的%= 421A = ECLg/100ml规格g/片g片剂、注射剂ChP:（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlml硫色素荧光法NaOH原理：方法与计算：激发波长365nm；发射波长435nm+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇SdAb对照液供试液注意事项：铁氰化钾与维生素B1的反应虽非定量完成，但在一定的条件下形成的硫色素与维生素B1的浓度成正比。硫色素反应为维生素B1的专属性反应，不受氧化产物的干扰，测定结果较为准确，但操作繁琐。使用的氧化剂，除铁氰化钾外，可用氯化汞或溴化氰。溴化氰能将维生素B1完

16、全定量氧化为硫色素，适用于临床体液分析。第三节 维生素C维生素C（L-抗坏血酸）具有4中光学异构，以L-构型右旋体的生物活性最强。基本结构与主要性质基本结构具有烯二醇结构和内酯环，且有2个手性碳原子（C4、C5），使维生素C性质极为活泼，且具旋光性。主要性质溶解性：易溶于水（呈酸性）、微溶乙醇、不溶于三氯甲烷和乙醚。酸性：烯二醇基中C3-OH收共轭效应影响，酸性较强（pK1=4.17）；C2-OH酸性较弱（pK2=11.57）旋光性：有2个手性碳原子,具旋光性。还原性：分子中的烯二醇基具有极强的还原性，已被氧化为二酮基成为去氢抗坏血酸，在碱性或强酸性溶液中能进一步水解为二酮洛糖酸而失去活性。二

17、烯醇结构二酮基结构有活性有活性无活性水解性：维生素C和碳酸钠作用可生成钠盐，内酯环并得稳定，不致发生水解；在强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。糖类的性质：化学结构与糖类相似，具有糖类的性质和显色反应。50糖类紫外吸收特性：具共轭双键，其稀盐酸溶液max=243，碱性溶液max=265。鉴别试验与硝酸银反应烯二醇基具有强还原性，可被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色银沉淀。OHOO COHHCH2OHNaOOOO COHHCH2OHO+ AgNO3+ 2HNO3 + 2Ag与2,6-二氯靛酚反应2,6-二氯靛酚的氧化型在酸性介质中位玫瑰红色，在碱性介质中位蓝色，与维生素C作用后生成还原型无色

18、的酚亚胺。氧化型玫瑰红色还原型蓝色OH（玫瑰色）（无色）与其他氧化剂反应可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸。CH2OHOOOO COHHOHOO COHHCH2OHHO糖类的反应在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热、溶液呈蓝色。或盐酸50吡咯（蓝色）(糠醛)（戊糖）50(吡咯)含量测定维生素C具有很强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。碘量法 原理：指示剂：淀粉指示液H+注意事项：供试液用新沸冷H2O溶解配制，减少水中溶解的氧对测定的影响。滴定在酸性环境下进行，在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢。供试品溶液

19、配制好后应立即滴定，减少O2的干扰。附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 注射剂 抗氧剂 丙酮甲醛CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a2,6-二氯靛酚滴定法 原理：自身指示终点法 方法：注意事项：酸性环境（HPO3-HAc）稳定VitC维生素C的氧化速度远比干扰物质快，快速滴定（2min内）可防止其他还原性物质干扰。亦可采用剩余比色测定（醋酸乙酯提取）缺点需经常标定贮存一周2,6-二氯靛酚滴定液不稳定2,6-二氯靛酚氧化力较强，干扰多第四节 维生素E 维生素E为-生育酚及其各种酯类，有天然品和合成品之分。天然品为

20、右旋体，合成品为消旋体。右旋体与消旋体生物效价比为1.4 ：10。基本结构与主要性质基本结构为苯并二氢吡喃衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基。（苯并二氢吡喃醇）名 称R1R2相对活性-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*（三甲基十三烷基）主要性质溶解性：易溶于无水乙醇、丙酮、乙醚，不溶于水。水解性：苯环上的乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶液中加热可水解成游离生育酚。氧化性：在无氧条件下对热稳定，对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化为-生育醌和-生育酚二聚体。鉴别试验硝酸反应75，15橙红色（橙红色）生育红生育酚HNO3强氧化剂三氯化铁-联吡啶反应O

21、生育酚对-生育醌O弱氧化剂血红色紫外分光光度法 = 41.045.5max = 284nmmin = 254nm0.01%无水乙醇中，薄层色谱法薄层板：硅胶G展开剂：环己烷-乙醚(4 1)显色剂：硫酸（105，5min） 维生素E：Rf = 0.7杂质检查酸度检查维生素E的制备过程中引入的游离醋酸。乙醇和乙醚各15ml置于锥形瓶中酚酞指示液0.5ml滴加NaOH滴定液（0.1mol/L）至微显粉红色加本品1.0g,溶解后，用NaOH(0.1mol/L)滴定VNaOH0.5ml生育酚检查维生素E制备过程中未酯化的生育酚。原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈定量还原成硫酸亚铈。在一定条件下以0.

22、1g本品消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）的体积赖控制游离生育酚的限度。指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）（M生育酚 = 430.8）计算（滴定液消耗体积）：中国药典（2005）规定：游离生育酚2.15%硫酸铈滴定液消耗体积药典规定消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml设：应消耗硫酸铈液 V ml0.011.0实际浓度V若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量含量测定气相色谱法中国药典（2005）采用气相色谱法测定维生素E的含量。选择性好灵敏度高速度快分离效能好GC 特点载气：N2固定相：硅酮（OV-17）；涂布浓度：2%担体：硅藻土或高分子多孔小球柱温：265检

23、测器：氢火焰离子化检测器(FID)内标：正三十二烷计算：内标法系统适应性试验：n500，R2VitE测定的色谱条件维生素E气相色谱分析供试液（样品+内标）对照液（对照+内标）内标物是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近测定方法计算方法例内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释 成1.0mg/ml溶液对照液：精密称取VitE对照品0.2011g置棕色 具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取1 3ul注入GC仪，测定，计算。供试液：精密称取供试品0.1998g置棕色具塞 锥形瓶中，精密加入内标液10ml， 密塞，振摇使溶解，取13ul注入 GC

24、仪，测定，计算对照液：供试液：0.3730.368本品含C31H52O3应为96.0 102.0%合格铈量法原理利用生育酚的易氧化性二苯胺（亮黄灰紫）指示剂还原型氧化型讨论防止Ce(SO4)2的水解减慢生育酚被O2氧化速度C、酸性条件Ce(SO4)2易溶于水生育酚易溶于醇B、溶剂分子量较大，反应慢 易被O2氧化A、反应速度H2SO4含量计算（MVitE = 472）在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是（）氯氮卓 维生素A 普鲁卡因 盐酸吗啡 维生素C自测题中国药典（2005年版）采用以下何法测定维生素E含量（）酸碱滴定法 氧化还原法紫外分光光度法 气相

25、色谱法 非水滴定法中国药典（2005年版）采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为（）正二十二烷 正二十六烷 正三十烷 正三十二烷 正三十六烷下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是（）维生素A 维生素B1 维生素C 维生素D 维生素E既具有酸性又具有还原性的药物是（）维生素A 咖啡因 苯巴比妥氯丙嗪 维生素C维生素C的鉴别反应，常采用的试剂（）碱性酒石酸铜 硝酸银 碘化铋钾 乙酰丙酮 三氯醋酸和吡咯测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了（）保持维生素C的稳定 增加维生素C的溶解度使反应完全 加快反应速度消除注射液中抗氧剂的干扰能发生硫色素特征反应的药物是（）维生素A 维生素B1 维生素C 维生素E烟酸使用碘量法测定维生素C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.1mol/L) 相当于维生素C的量为（）17.61mg 8.806mg 176.1mg 88.06mg 1.761mg维生素E的鉴别试验有（）硫色素反应 硝酸氧化呈色反应 硫酸-乙醇呈色反应碱性水解后加三氯化铁乙醇液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反