轮虫的培养PPT演示课件(PPT 64页)

1、轮虫的培养1第1页，共64页。必需小型：作为鱼类的开口饵料；形状简单，容易被破碎；富有营养，容易消化；不使水质恶化；容易制备（培养）；能适应养殖幼体的摄食生态条件。一、动物性生物饵料必须具备的条件轮虫的培养第一节 生物饵料的应用概述2第2页，共64页。常见种类 牡蛎担轮幼虫：受精卵 担轮幼虫:大约饵用13-14小时；藤壶无节幼虫、期：大约饵用3-4小时；轮虫：S、L、M型，有鳍鱼类开口饵料；卤虫：幼体和成体，商品化；枝角类：大部分淡水种；桡足类：海水种；糠虾、颤蚓、黄粉虫、沙蚕。个体大小： 颤蚓、沙蚕、糠虾黄粉虫卤虫成体桡足类 枝角类卤虫幼体轮虫牡蛎担轮幼虫和 藤壶无节幼虫、期。3第3页，共6

2、4页。四、轮虫的概况（一）轮虫特点 生命力强，繁殖快，营养丰富，大小适宜， 易培养。（二）简史 1960年日本伊藤发现褶皱臂尾轮虫作为仔鱼饵料的价值，并进行大量培养技术的探索；1964年日本开始大量培养褶皱臂尾轮虫； 1965年Hirata and Mori发现面包酵母是轮虫的合适饵料；70年代广泛使用面包酵母；随后发现酵母轮虫缺乏鱼类必需的高度不饱和脂肪酸，造成仔鱼大量死亡。因此研究轮虫的营养强化技术；4第4页，共64页。我国60年代初，傅素宝等（1962）研究壶状臂 尾轮虫；70-80年代，解承林、郑严、王育、何 进金、何连金、张道南、陈世杰等研究褶皱臂 尾轮虫； 90年代，研究轮虫品系的

3、选育，如大轮虫品系、 小轮虫品系（中国科学院海洋研究所）和低温 轮虫品系（15，张学武）；至今，褶皱臂尾轮虫已经成为一种极为重要的 生物饵料，在世界范围内广泛培养和应用。 5第5页，共64页。（三）应用情况 在60种海洋有鳍鱼类和18种甲壳动物幼体的培育 中应用。（四）存在问题 探明轮虫两性繁殖的机制； 开发轮虫高密度培养系统； 选育、引进优良的轮虫品系； 如：100um小轮虫和500-1000um大轮虫； 探讨室外土池稳定生产轮虫的技术措施； 进一步探讨轮虫培养过程中增殖率突然 下降的原因和机制。6第6页，共64页。第二节 轮虫生物学一、分类 欧美国家：袋形动物门，轮虫纲、真轮毛虫 亚纲、

4、单生殖巢上目、臂尾 轮虫 目、臂尾轮虫科，臂尾轮虫属。 我国分为：轮虫门，单生殖巢纲，游泳目，臂 尾 轮虫科，臂尾轮虫属。7第7页，共64页。培养种类：褶皱臂尾轮虫（Brachionus plicatilis)L型圆型臂尾轮虫（Brachionus rotundiformis）-S型壶状臂尾轮虫（B. bennini） 萼花臂尾轮虫（B. calyciflorus）钩状狭甲轮虫（ Colurella uncinata）：小型。8第8页，共64页。二、形态特点轮虫的三大特征 轮 盘：摄食、运动；咀嚼器：磨碎食物；原肾管：肾的雏形，内有焰细胞。雌雄异体、异形 雌性：常见，大小196-250150-

5、202um，结构完整； 雄性：少见，个体小：80-130um，结构简单，只 有轮盘、精巢和阴茎，不摄食；只在不良 环境下看见出现，游泳快，只为了交配。9第9页，共64页。10第10页，共64页。1、外部结构被甲：透明、前缘有片状棘（背面6个、腹面4个）；轮盘部：由棒状突、纤毛环（打动水流）和触毛（感觉 作用）组成；足部：足趾、足腺；与头部均能缩进。2、内部结构消化系统：口（漏斗状） 口腔 咀嚼器 食道（短） 胃（大，消化腺1对） 肠 泄殖腔 肛门排泄系统：原肾管（焰细胞） 膀胱 泄殖腔11第11页，共64页。呼吸：靠纤毛打动的水流通过体壁进行气体交换。神经：脑（咽上N节）和咽下N节 各器官。

6、另外：眼点（红色）、背触手和侧触手（刺毛为 应激反应）。 生殖系统：雌体：卵巢（卵黄腺） 输卵管 泄殖腔 肛门。雄体：发达的精巢和阴茎，遇到雌性就交配。12第12页，共64页。三种臂尾轮虫的区别 被甲前端 被甲后端 被甲后 被甲形状 被甲长（ ） 棘刺 （对） 棘刺 （对） 端开口 萼花臂 2 1 园钝形 椭圆形 300-350尾轮虫壶状臂 3 0 园钝形 宽钝形 190-240尾轮虫褶皱臂 3 0 腹面三角形 椭圆形 S： 80-180尾轮虫 背面正方形 L：196-25013第13页，共64页。褶皱臂尾轮虫 Brachionus plicatilis14第14页，共64页。萼花臂尾轮虫 B

7、. calyciflorus15第15页，共64页。壶状臂尾轮虫 Brachionus urceus16第16页，共64页。龟甲轮虫 Keratella矩形龟甲轮虫 螺形龟甲轮虫 17第17页，共64页。水轮虫Epiphanes18第18页，共64页。疣毛轮虫 Synchaeta19第19页，共64页。旋轮虫 Philodina20第20页，共64页。晶囊轮虫 Asplanchna21第21页，共64页。三、轮虫的变异 水温变化、饵料质量和培养密度等是引起 轮虫形态和大小变化的主要原因。S型轮虫（ B. rotundiformis ）：100-190um，适合较高水温下培养；有两个亚种，SS型

8、（高盐）、 SM型（低盐）。L型轮虫（ B. plicatilis ）：140-290um，适合较低水温下培养的，广盐性种类。22第22页，共64页。四、生殖习性单性生殖即孤雌生殖，某些水生动物在适宜的环境条件下，雌性个体产生的卵无需受精直接发育成雌性小个体，如轮虫、枝角类，卤虫等。在良好环境下：冬卵 （非混交）雌性夏卵（无需受精，挂在足 基部）雌性小个体。褶皱臂尾轮虫大约4h产卵1次，21个卵/雌，持续时间6.7d。23第23页，共64页。有性生殖即混交生殖，不混交雌体产生混交雌体，混交雌体经过减数分裂产生单倍体混交卵（需精卵）。若混交雌体在年轻时不与雄体交配，不论以后有无交配混交卵均不受精

9、，发育为单倍体的雄体；若混交雌体交配了，混交卵受精，精和卵结合为双倍体的受精卵，再形成壳厚的休眠卵。 在不良环境下，如饥饿、缺氧、密度过高、种群本身产生化学物质累积和生态环境（水温、盐度、PH等)突变等，非需精卵混交雌体混交卵 休眠卵（冬卵）。24第24页，共64页。夏卵非需精卵，壳薄而 光滑，卵形，个体小；长56-130，宽48-96 ，挂在母体上，2-14个。冬卵（休眠卵）需精卵 受精 冬卵。壳厚，个体大，弓形，卵一端有较大空隙，卵黄呈橘红色长约130，宽88，不挂卵。25第25页，共64页。生活史（夏卵）26第26页，共64页。诱发两性生殖的因子（1）外源性因素生育酚：维生素E直接作用于

10、胚胎发育后期而诱 发混交雌 体的形成；种群密度：种群密度的控制；食物：食物的组成、丰度和成分对混交雌体的形 成具有诱发作用；27第27页，共64页。温度：温度高（30）或低（25）混交 雌体的比例增大；盐度：在褶皱臂尾轮虫培养中，盐度35，无 产生混交生殖，盐度为2和30，有低水 平的混交生殖，盐度4-20，有高的混交 生殖；pH：较高的pH（8.5）产生的混交生殖越多。28第28页，共64页。（2）外源性因素 遗传因子：与不同的品系有关； 母体的年龄：年龄与混交雌体的比例成负相关； 孤雌生殖的累积时代数：时代数的积累对混交雌 体的产生具有诱导作用。影响休眠卵形成效率的因素 遗传因素、温度、食

11、物种类和浓度、培养液的盐度、 pH值等。29第29页，共64页。五、培养环境 温度：适宜2535，低于5不能存活，高于40死亡， 繁殖临界点10和40。 S型：高温下（ 30）繁殖快，个体小； L型：低温下（20-25 ）繁殖快，个体大。 盐度：广盐性，250，适宜1030，最适15-25（海水稀 释培养）； S型：在盐度15-25下，含n-3HUFA最高； L型：在盐度30下，含n-3HUFA最高。轮虫对盐度突变适应能力差。低盐培养的轮虫投喂时要进行24小时驯化（20 40）30第30页，共64页。光照：间接影响。对藻类和光合细菌有利，且抑制原生 动物生长。研究认为：适宜440010000l

12、x。pH： 6-9范围内无不良影响，适宜7.58.1。溶解氧：保持1.5mg/l以上，耐低氧能力强。L型轮虫缺氧状态下，经6h有半数存活。0.9mg/L时，生殖率开始下降。直接影响：轮虫增殖、活力。间接影响：共存微生物的生物相；投喂酵母时，溶氧保 2mg/l时，细菌生长良好，产生足够VB12供轮虫 增殖用；高溶氧则影响细菌生长。31第31页，共64页。非离子氨（游离氨）：不超过1mg/L，（一般鱼类的安全值为0.025mg/L）可容纳6-10mg/LNH3+ NH4+ 。 氨氮NH3+H2O NH4+ + OH- 蛋白质分解 尸体、残铒、粪便 种群密度：（1）密度大：怀卵量少，繁殖慢； （2）

13、密度小：怀卵量多，繁殖快。间疏采收：轮虫达到一定密度时（200个/ml），繁 殖力下降，必需稀疏密度，才能正常生长。32第32页，共64页。悬浊物：主要由细菌、粪便、残饵构成；量多时影响收获作业，并可能把病源性细菌带入饲育池；可用过滤网垂放于培养槽去除悬浊物。细菌细菌相：弧菌属（ Vibrio ）、不动杆菌属（ Acinetobacter）、假单胞菌属（Pseudomonas） 占优势时，增殖快。色素生产菌，如黄杆菌属（Flavobacterium）和解藻朊酸弧菌（Vibrio alginolyticus ）占优势时，增殖受阻碍。可添加有益菌保持轮虫培养的稳定性。维生素V12生产菌：对轮虫增殖

14、有明显的促进作用。33第33页，共64页。原生动物及其他大型生物原生动物鞭毛虫（滴虫 Monas和波豆虫Bodo） 纤毛虫（游仆虫Euplotes 和尾丝虫Uronema）原生动物的增加，一方面消耗有益轮虫增殖的细菌，另方面又与轮虫竞争生存空间，对轮虫的增殖非常不利。 太阳虫（Oxnerella maritima）：分泌毒物刺杀轮虫。其他大型生物桡足类、卤虫：捕食轮虫，粪便堵塞收获网目并带入培育池粘附在仔鱼身上。34第34页，共64页。轮虫培养槽中食物链关系图35第35页，共64页。六、轮虫培养的饵料食性：滤食性，靠轮盘部的纤毛打动水流。饵料大小：5-25 m，15 m以下较适合。上限由食道直

15、径决定，下限由咀嚼器 大小决定。饵料种类：细菌、酵母、微藻、小型原生动物、有机碎屑、微生物团絮、微颗粒饲料等。36第36页，共64页。七、生长与繁殖 生长 重1-3 ug/只。 夏卵（挂在雌性足基部） 小轮虫 成虫（生物学最小型）产卵期 死亡。个体发育（席贻龙、黄祥飞）胚胎发育期：卵产出-幼体孵出。生殖前期：幼体孵出-产出第一个卵。生殖期：产卵期间（第一个-最后一个）。生殖后期：最后一个卵产出-死亡。0.52d3d4-5d37第37页，共64页。生殖量 几-10多个/次，一般为2-4个/次，周期4-5天， 雌性一生平均产卵21个。寿命 7-10天。与水温成反比；环境好时，寿 命长。38第38页

16、，共64页。 第三节 轮虫的分离和培养 一、种源分离：水温15时出现，用250-300目的浮游生物网捞取，用眼或在解剖镜下吸出。休眠卵孵化产品：600美元/克；原培养轮虫池排掉旧水（留10-20cm），纳入新水和微藻，池底休眠卵即可孵化。 索取或购买 科研、教学、生产单位的轮虫种。39第39页，共64页。二、培养方式一次性培养（batch culture）：水体在10m3以内，先培养藻类接种投喂达到一定密度 一次性收集，需4-7天。S型轮虫（高水温、高密度、高给饵率）半连续培养（semi- continuous culture ） 间收培养，水体10-40m3，藻类培养接种投喂间疏采收（虹吸法

17、）注入藻液。每天采收， 15-30天移池。L型轮虫（低水温、低密度、低给饵率）40第40页，共64页。连续培养（continuous culture）：室内封闭性高密度培养系统；主要进行残饵、粪便、尸体等有机物的处理。41第41页，共64页。连续培养装置的特点持续注水、持续收获、持续给饵。 注水量=收获量防止有害生物的侵入，防止水质恶化。生产量（日本） S型轮虫：30-40亿/m3/日。42第42页，共64页。轮虫一级培养43第43页，共64页。轮虫二级培养44第44页，共64页。轮虫三级培养45第45页，共64页。三、大量培养1、培养容器一次性培养：10m3，玻璃钢槽、小型水泥池等。半连续培

18、养：40-50m3，大型水泥池。2、培养用水砂滤加300目网过滤水，刚接种用水一定要消毒（漂白粉浓度要低：20-30ppm，曝气时间要长：2天）。 46第46页，共64页。3、接种一次性培养：先培养微藻，接种密度为0.1-0.5 个/ml；7-10天采收；如投喂酵母， 接种密度为14-70个/ml；半连续培养：接种密度为30-50个/ml。如种不 足， 接种水位可低些，要保证 接种密度。接种密度过低（数个/ml），残饵过多，易引起原生动物大量增殖，轮虫培养失败。47第47页，共64页。4、投饵微藻类： 优点：营养好，水质好；以绿藻为最优，金藻次之；缺点：需要培养池，培养密度低（40-60个/m

19、l）。 培养设施不足时，国外采用补充浓缩小球藻 （自浓缩或商品）。投喂量：小球藻100-500万细胞/ ml；扁藻2.5-5细胞/ ml酵母类：主要是面包酵母优点：供应稳定，投喂简便，生长快，培养密度可达 400-600个/ml；缺点：水质易污染，单独投喂，刚接种时培养较难； 酵母轮虫缺少高度不饱和脂肪酸。48第48页，共64页。 投喂量： 5-8次/日为好 A、水温在20以下，投喂量是50g/亿.日； B、水温在25以上，投喂量是100g/亿.日。投喂方法 称重后放150-200目筛绢袋中，浸泡几分钟后利用 手搓滤，或采用搅拌机匀浆后，均匀泼洒池中， 由于面包酵母不耐盐，应采取多次投喂。可用

20、定 时水泵进行投喂。49第49页，共64页。混合投喂 用微藻（30%-50%）和面包酵母（50%-70%）混 合投喂是一种规范化的投喂技术。 A、微藻类：在轮虫收集后，以加水形式加入 一部分微藻,作为一次投喂；B、面包酵母：50-70g/亿.日，分4-7次投喂。50第50页，共64页。5、轮虫计数吸管法：校正一支1毫升吸管(利用移液管移1毫升水于一小烧杯中,用吸管全吸取,利用玻璃刀或胶布作液面记号)；先数1毫升有几滴；利用小烧杯在充气周围取样，在单凹玻片上利用肉眼数5-10滴或全数。 几滴/毫升n个/滴（平均）；浮游生物计数框法：利用0.1ml、0.5ml、1ml浮游生物计数框，在解剖镜或显微

21、镜下观察。51第51页，共64页。6、日常管理 观察轮虫的摄食状况、活力，维持准确 的投喂量； 观察轮虫生长情况：数量变化、肥壮、 怀卵量； 注意水质变化：吸底检查，尸体、残饵、 有机物厚度和原生动物数量，判断水质 好坏，是否换水或移池。 培养小球藻中加VB12 （0.5mg/L）等，使轮虫增殖稳定。52第52页，共64页。7、收获 一次性培养：100-200个/ml，高时达400-600 个/ml； 半连续培养：200-300个/ml, 每次采收10-20%。收集方法： 虹吸：自吸或水泵抽，250-300目网收集 ； 光诱； 网捞。53第53页，共64页。轮虫的人工收集54第54页，共64页

22、。55第55页，共64页。56第56页，共64页。8、轮虫的营养强化技术用海水微绿藻（小球藻、微绿球藻、球等鞭金 藻）进行二次强化培养2-6小时以上；用生鸡蛋黄和水乳化鱼肝油，强化6-12小时上； 投喂含n-3HUFA的油脂酵母；使用各种商品强化剂进行营养强化。 57第57页，共64页。四、土池大面积培养 1、建池：面积1-2亩（池太大不好管理），水深1-1.2米， 泥或泥沙底；靠近淡水源，可调节比重。2、清池：彻底消除淤泥：抽掉污泥或晒干后利用推土机推掉。消毒 A、漂白粉：60ppm，氯0.15-0.2ppm，药效3-5天；B、石灰：200ppm，药效7-10天； C、氨水：15-17%，250ppm，杀死动物，培养藻类。 药效2-3天； D、茶饼：50kg/亩。泡1天后用，杀死动物，培养藻类。 药效1个月。58第58页，共64页。3、纳水：30-50cm轮虫养殖：滤网250-300目；鱼虾养殖：滤网60-80目，使动物及卵进不来。4、施肥：培养水色。选择好天气，上午8-10点施肥。有机肥：鸡粪（100-150kg/亩）或猪粪（200-300kg /亩）； 发酵：100kg（湿）+