HPLC实验高效液相色谱分析实验

1、实验名称：高效液相色谱分析实验序号42仪器分析实验报告一、实验目的了解HPLC的结构，了解仪器的开、关程序。了解流动相的制备和样品溶液的制备。知道仪器的运行程序和进行样品分析。二、仪器和试剂仪器：美国安捷伦1200型HPLC、10吐的微量注射器试剂：磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸所用仪器HP-1100液相色谱仪配置;|四元梯度高压泵!CQDS色谱柱t手动进样器1可变波长紫外检测器i色谱工作站三、实验步骤流动相的准备流动相只有一组：PH=3的磷酸乙腈溶液，进过脱气，用蠕动泵输送。开机，色谱柱平衡当1完成后，开机，待色谱柱平衡。样品溶液的准备配置好邻氯苯甲酸溶液，按要求选好滤纸的孔径

2、大小。用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。基线的查看由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定后，基线平稳才能进行进样。样品进样分析用10pL的微量注射器取5yL的邻氯苯甲酸，微量注射器中不能有气泡,将微量注射器的针头插入到注射的孔时，打开微量注射阀，将邻氯苯甲酸注射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。色谱柱的清洗分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用适当的液体来清洗色谱柱。关机实验完毕后，关闭仪器和电脑。四、实验数据及处理1.LC参数温度：T=25.0T流速：1.000mL/m

3、in停止时间：0.00minVWD信号：236nm后运行时间：0.00minA：0.0%B：0.0%C：0.0%D：0.0%最大压力：400bar最小压力：0bar色谱柱参数色谱柱柱子：C18ODS柱长：15cm柱子内径：3.2mm运行压力：156bar四元泵状态A：0.0%流速：1.000ml/minB：0.0%压力：91barC：0.0%D：0.0%4.柱温箱温控状态左右实测值25.0C24.9C设定值25.0C25.0C阀n/a5.色谱分析谱图见附页，经过注射5吐的邻氯苯甲酸，得到三组实验色谱图,根据谱图列表数据如下：峰#保留时间/min类型峰宽/min峰面积/mAU*s峰高/mAU峰面

4、积/%11.188BV0.222483.110685.297380.334221.420VV0.065619.078443.865040.076331.531BB0210571.214214.240180.284941.816VV0.084934.415135.646960.137752.437VV0.13752.45775e42646.1442998.336463.196VBA0.1641207.9746618.074410.8321色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为：n=L/H理论塔板数和色谱参数之间的关系为：n=16(tR/Wb)2=5.54(tR/Y1/2)2则取第五组数据计算得：tR=2.437min=146.22sY1/2=2.354(0.1375min/4)=4.855125sR1/2n=5.54(tR/Y1/2)2=5025(块)五、实验分析与讨论见图分析：（色谱图见附页）图中第一个峰是出现在1.188min的一个小峰，第二个峰是出现在1.420min的一个小峰，第三个峰是出现在1.531min的一个小峰，第四个峰是出现在1.816min的一个小峰,第五个峰是出现在2.437min的一个大峰，第六个峰是出现在3.196min的一个小峰。注意事项：1