hpv 主要竞争产品分析

1、HPV 竞品分析市场部 王飞雁编辑课件HPV 检测HPV DNA 检测HPV E6，E7 mRNA 检测分型不分型部分分型方法代表厂家PCR-反向点杂交法亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇流式荧光杂交法上海透景杂交捕获（HC2）QIAGEN(凯杰)PCR-荧光探针法港龙、凯普、达安、科华PCR-荧光探针法罗氏bDNA 技术科蒂亚酶切信号放大法（Cervista）HOLOGIC(英硕力) 不分型 PCR-反向点杂交法原理 PCR-反向点杂交法技术特点高灵敏度-PCR高特异性-核酸分子杂交高通量-膜上固定多种探针能实现HPV分型检测 亚 能 凯 普技术原理PCR+反向点杂交PCR+膜杂交法（实质为

2、PCR+反向点杂交）标本类型宫颈脱落细胞，疣体组织，病理石蜡切片，液基细胞学标本宫颈脱落细胞检测HPV 种类23型无HPV 44，低危型21型无HPV73，83，MM4（82）而73、82型为IARC认定的15种常见高危型之一DNA提取提取试剂只含裂解液一种成分提取试剂分溶液,提取步骤复杂PCRPCR反应液已分装PCR反应液未分装，需人工配制反应液杂交全自动核酸分子杂交手工杂交结果判读显色斑点大，边界清晰判读结果方便快捷膜条小，显色斑点小判读结果时需与对照卡进行比对内部质控有真正意义的内部质控无真正意义的内部质控亚能和凯普HPV基因分型产品对比亚能和凯普膜条显色对比亚能凯普膜条尺寸：12mm7

3、8mm膜条尺寸：22mm22mm亚能产品与凯普HPV分型产品的比较优势有配套的全自动核酸分子杂交仪检测HPV 型别多：23型有真正意义的内部质控可检测更多类型的标本，有文献支持灵敏度、特异性、重复性好PCR扩增体系预分装显色斑点大而清晰，易于进行结果判读HPV 检测HPV DNA 检测HPV E6，E7 mRNA 检测分型不分型部分分型方法代表厂家PCR-反向点杂交法亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇流式荧光杂交法上海透景杂交捕获（HC2）QIAGEN(凯杰)PCR-荧光探针法港龙、凯普、达安、科华PCR-荧光探针法罗氏bDNA 技术科蒂亚酶切信号放大法（Cervista）HOLOGIC(英硕

4、力) 不分型代表厂家：上海透景高危型人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒检测的基因型：19种高危型（ 16,18,31,33,35,39,45, 51,52, 56,58, 59, 68,73,83，26, 55, 61,66 ）， 种低危型（ 6,11,40,42,44,53,54 ）(无注册证)进口专用仪器(美国Luminex多功能流式点阵分析仪）流式荧光杂交法流式荧光杂交法流式荧光杂交法是将PCR产物和微球杂交液进行混合，并经过杂交，荧光素标记，Luminex流式分析仪阅读得到相应的检测结果。微球杂交液中包含多种荧光编码微球，每种编码微球的表面都共价交联有与HPV 型别对应的探针，在杂交过程中

5、，探针特异性识别并结合相应的靶序列，经过荧光素反应后形成微球-探针-PCR产物-荧光素的复合物，经Luminex流式分析仪阅读，可以获得每种复合物的微球编码及对应的荧光信号强弱，得出检测结果流式荧光杂交法操作流程PCR 扩增DNA提取向微孔杂交板中加入微球杂交液，加入PCR产物PCR产物变性杂交，48，30 min加入荧光素SA-PE(链霉亲和素标记的藻红蛋白)，15 minLuminex 流式分析仪检测Luminex 100TM多功能流式点阵仪流式荧光杂交法-HPV 不定量流式荧光杂交法技术总结原理：普通PCR技术，核酸分子杂交技术和荧光标记技术尚不成熟，灵敏度和特异性有待提高只分型，不定量

6、需价格昂贵的流式荧光检测仪项目亚能透景技术原理基因芯片法流式荧光杂交法操作步骤DNA提取PCR杂交化学显色判读结果 DNA提取-PCR杂交荧光标记激光判读 检测通量检测23种HPV基因型（18种高危型和5种低危型) 检测26种HPV基因型（ 19种高危型和7种低危型，注册证只批检19高危）基本设备离心机、PCR仪、普通杂交仪离心机、PCR仪、Luminex多功能流式点阵分析仪标本类型宫颈脱落细胞、疣体组织、石蜡切片、液基细胞学标本宫颈脱落细胞灵敏度高较低特异性高较低理论耗时6小时5小时标本保存时间室温下放置时间长（12小时） 室温下放置时间短（1小时） PCR反应液已配制并预分装分成引物混合液

7、，PCR预混液，聚合酶三部分，需人工配制亚能与流式荧光杂交法对比亚能产品与上海透景产品的比较优势灵敏度，特异度更高通用仪器设备可检测更多来源的标本标本保存时间更长PCR 反应液预分装亚能生物港龙技术原理基因芯片技术基因芯片技术检测HPV型别18种高危，5种低危16种高危，10种低危主要仪器设备离心机、普通PCR仪、普通杂交仪离心机、普通PCR仪、HPV分型基因芯片检测阅读系统标本类型宫颈脱落细胞、液基细胞学标本、疣体组织、石蜡切片标本宫颈脱落细胞灵敏度高（1103拷贝/毫升）低（1105拷贝/毫升）PCR 扩增PCR反应液已分装，减少操作人员工作量，避免污染PCR反应液未分装，增加操作人员工作

8、量，带来污染风险杂交方式单管密封杂交，避免污染在96微孔板中杂交，敞开环境，易污染。结果判读可直接用肉眼判读结果，无需专用设备必须用配套的基因芯片检测阅读系统来判读结果亚能生物与港龙HPV 基因分型对比HPV 检测HPV DNA 检测HPV E6，E7 mRNA 检测分型不分型部分分型方法代表厂家PCR-反向点杂交法亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇流式荧光杂交法上海透景杂交捕获（HC2）QIAGEN(凯杰)PCR-荧光探针法港龙、凯普、达安、科华PCR-荧光探针法罗氏bDNA 技术科蒂亚酶切信号放大法（Cervista）HOLOGIC(英硕力) 不分型杂交捕获二代（Hybrid Captur

9、e 2, HC2）HC2基本原理：利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测13种高危HPV基因型,不能提示具体的基因型计算机判读15 min杂交60 min抗体捕获60 min第二抗体结合，化学发光30 minDNA变性45 minHC2 实验步骤图示吸取变性剂于对照和样本管中旋涡振荡10秒65孵育45分钟，采用Microplate heater I HC2操作步骤-DNA 变性将已变性的样本混匀，吸取75 ul 于“杂交微孔板”中20-25孵育10分钟加入25 ul 高危HPV探针于微孔板中65孵育60分钟置于Rotary Shaker I中，1100 rpm，32分钟准备HPV 探针混

10、合物HC2操作步骤-杂交将杂交产物转移至“捕获微孔板”相应的小孔中20-25孵育30-45分钟20-25孵育60分钟， 1100 rpm加入75 ul Detection Reagent 1（碱性磷酸酶偶联的抗体）于“捕获”微孔板相应的小孔中HC2操作步骤-抗体捕获及酶标洗涤微孔板：采用Automated Plate Washer I或进行手动洗板，重复洗6次加入75 ul Detection Reagent 2 （化学显色底物）于“捕获”微孔板相应的小孔中20-25孵育15-30分钟采用Digene microplate luminometer (DML2000)读数HC2操作步骤-洗板及化

11、学显色HC2如何进行结果判读?1.阴性对照 每次实验必须同时做3份阴性对照。阴性对照的结果必须为10-250 RLU（相对光单位）。变异系数（%CV）应该25%，如果25%，那么去掉偏离平均值最远的一个阴性对照，用剩下的两个阴性对照计算平均值以及变异系数。 %CV必须25%，否则，本次实验结果无效，必须重做，无法给病人出报告2.标准品 每次实验必须同时做3份高危HPV标准品。 %CV应该15%，如果15%，那么去掉偏离平均值最远的一个标准品，用剩下的两个标准品计算平均值以及变异系数。 %CV必须15%，否则，本次实验结果无效，必须重做，无法给病人出报告3. 用标准品平均值（MHRC）以及阴性对

12、照平均值MNC计算MHRC/ MNC比值.2.0MHRC/ MNC 15。如果2.0 或15，本次实验结果无效，必须重做。4. 如果符合以上的标准，检测结果是可靠的。此时的Cutoff值（阳性标本评判的标准）就是MHRC阴性对照 （NC）高危HPV标准品(HRC)9731210133591307平均值96318%CV4.94.7HRC/ NC3.31Cutoff 值=318，所有标本的相对光单位（RLU）应该转换为与Cutoff值的比值，比值大于1为阳性，比值小于1则为阴性结果的判定质控对照HPV 基因型预期的结果（RLU/Cutoff值）最小值最大值QC1-LRHPV 60.0010.999

13、QC2-HRHPV 16283份阴性对照，3份高危HPV标准品，2份质控，共需额外消耗8人份试剂！HC2-定性检测以上为FDA 批准的说明书中内容截图HC2技术总结原理：采用核酸分子杂交，抗体捕获（吸附杂交体），化学显色不分型不能检测HPV多重感染不定量有交叉杂交反应手动操作很多，步骤繁琐每次实验要额外消耗8人份试剂，试剂成本高需基因杂交信号放大系统，设备成本高项目基因芯片（亚能）HC2技术原理PCR+反向点杂交+化学显色分子杂交抗体捕获+化学显色是否分型分型，确定具体的基因型不能分型，仅提示是否有HPV感染检测HPV种类检测23种HPV基因型，18种高危，5种低危检测13种高危型标本类型宫颈

14、脱落细胞、疣体组织、病理石蜡切片，液基细胞学标本宫颈脱落细胞，液基细胞学标本灵敏度高（1000 copies/mL）低（100000 copies /mL）交叉杂交无有基 本 设 备离心机、普通PCR仪、普通杂交仪（价格低廉）基因杂交信号放大系统（价格昂贵）检测成本可单人份使用，一次可检测标本量96个或更多每次实验需额外消耗8人份试剂，试剂成本高亚能HPV产品与HC2的比较优势能分型检测23种HPV 基因型可检测更多来源的标本无交叉杂交反应，特异性高通用仪器设备，如PCR仪和杂交仪检测成本低 careHPV Test定性检测14种高危型 HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,

15、52,56,58,59,66,68产品名称：高危型人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测试剂盒方法：杂交捕获-化学发光法商品名： careHPV Test该检测技术专为缺少水、电或现代化实验室等基础设施落后的临床环境设计，便于携带、易于使用，当日可出检查结果careHPV识别宫颈癌与高度病变的敏感度和特异度，都大大优于醋酸染色后观察法HPV 检测HPV DNA 检测HPV E6，E7 mRNA 检测分型不分型部分分型方法代表厂家PCR-反向点杂交法亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇流式荧光杂交法上海透景杂交捕获（HC2）QIAGEN(凯杰)PCR-荧光探针法港龙、凯普、达安、科华PCR-荧光探针法罗氏

16、bDNA 技术科蒂亚酶切信号放大法（Cervista）HOLOGIC(英硕力) 不分型PCR-荧光探针法化 学 原 理原理： 在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累,实时监控整个PCR过程。基于Taqman探针PCR-荧光探针法总结灵敏度高不分型，或部分分型不能检测HPV多重感染检测HPV 种类有限，目前最多检测14种高危型自动化程度高需价格昂贵的荧光定量PCR仪 项 目亚能生物基因分型PCR-荧光探针法技术原理PCR+反向点杂交+化学显色PCR+荧光标记+发光、读数理 论 耗 时6小时3小时标本类型宫颈脱落细胞、疣体组织、病理石蜡切片，液基细胞学标本宫颈脱落细胞，液基细胞学标本基

17、 本 设 备普通PCR仪、普通杂交仪（价格低廉） 荧光定量PCR仪（价格昂贵）检测通量23型2/8/10/13型等是否分型分型，确定具体的基因型不分型，仅提示是否有HPV感染多重感染能检测多重感染检测不能检测多重感染检测亚能与PCR-荧光探针法对比亚能产品与PCR-荧光探针法的比较优势能分型检测23种HPV 基因型能检测HPV多重感染可检测更多来源的标本使用普通PCR仪特异性更高亚能生物HPV基因分型与罗氏对比亚能生物罗氏原理PCR-反向点杂交法PCR-荧光探针法仪器设备离心机、PCR仪、杂交仪。价格低廉，适合各级实验室使用Combas 4800。价格昂贵检测HPV型别数量23种14种能否分型

18、能仅能区分HPV 16,18型标本类型宫颈脱落细胞、疣体组织、石蜡切片宫颈脱落细胞HPV 检测HPV DNA 检测HPV E6，E7 mRNA 检测分型不分型部分分型方法代表厂家PCR-反向点杂交法亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇流式荧光杂交法上海透景杂交捕获（HC2）QIAGEN(凯杰)PCR-荧光探针法港龙、凯普、达安、科华PCR-荧光探针法罗氏bDNA 技术科蒂亚酶切信号放大法（Cervista）HOLOGIC(英硕力) 不分型酶切信号放大法代表厂家：美国Hologic，中国子公司-英硕力产品名称（中文）：高危型人乳头瘤状病毒DNA 检测试剂盒（酶切信号放大法）产品名称（英文）：Cervista HPV HR亚能生物 HPV 基因分型英硕力 Cervista 技术原理PCR-反向点杂交法酶切信号放大法检测HPV种类18种高危（HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83），5种低危（HPV6，11，42，43，81）14种高危型（HP