《动物传染病学（实验）》课件8 血凝和血凝抑制试验_第1页
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文档简介

1、实验八 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）2013.12.11能凝集红细胞的病原禽流感病毒新城疫病毒传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C）EDS76副鸡嗜血杆菌鸡毒支原体血凝和血凝抑制试验的原理。实验操作步骤和结果判定。 一、实验目的二、实验原理（一）血凝试验（HA）一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。HA试验的原理图+ + + + -血凝试验结果判定1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1

2、:211 1:212血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 VaVbVcVd（二）血凝抑制试验（HI）当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验。HI试验的原理图三、实验材料鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤35次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。0.85%生理盐水。被检血清，采自被检鸡的健康血清。四、实验步骤（一）血凝试验（HA）112孔加入50l生理盐水;第1孔加50l病毒悬液，倍比稀释到第10孔；112孔

3、中加入1%的红细胞50l；震荡后置372530min观察结果。病毒液的血凝价是1:2？。（二）血凝抑制试验（HI）111孔加入25l生理盐水;第1孔加待检血清25l，倍比稀释至第10孔;111孔加25l 4个血凝单位的病毒悬液;112孔中每孔加入1%的红细胞50l;震荡后置372530min观察结果;红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点。如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病毒液进行1:26倍稀释10/640= 1/26, 所以病毒原液取10l，生理盐水取630l；4个血凝单位病毒悬液体积：25l /孔12孔=400l。血清血凝抑制试验结果判定测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+) 凝集 （-）血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝病毒对照孔：凝集RBC对照孔：无自凝血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高血清稀释度。 五、结果判定血凝价是1:2？；血凝抑制价是1:2？；被检血清为阴还是阳性?1:24

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