麦康凯液体培养基配制灭菌程序验证方案

1、麦康凯液体培养基配制灭菌程序验证方案一、目的验证微生物检测室购买的由广东环凯微生物科技有限公司生产的麦康凯液体培养基 的配制和灭菌方法，验证该配制灭菌程序适合于检测室麦康凯液体培养基的配制和灭菌， 为培养基配制和灭菌提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。二、适用范围麦康凯液体培养基的配制和灭菌三、职责.技术负责人为验证组长，负责组织编写并审核验证方案及报告。负责组织方案及报告的执行。.检测室负责人负责验证方案的起草和方案的具体实施；负责验证过程的记录。.检测员负责验证方案的具体实施；负责验证过程的记录。.经理负责批准方案及报告。四、作业标准.概 述培养基是微生物试验的基础，直接

2、影响微生物试验结果。一般采用商品脱水培养基， 临用时按使用说明或相关规定进行称量、配制、调节 pH分装、灭菌等。应按照生产商提 供参数进行培养基的灭菌。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝 固力或pH的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应 通过无菌性试验和促生长能力、抑制能力试验进行验证。灭菌器中培养基的容积和装载方 式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。本 公司现在检验用培养基的灭菌方法均为湿热灭菌方法。.验证实施计划年 月至 年 月.培训报告审批后，由验证小组组长对报告实施过程中涉及

3、人员进行培训，以保证报告顺利 实施，并做好培训记录，培训记录见附件 1:培训情况确认表。.仪器确认确认内容：确认过程所用仪器是否经校验，并有校验合格证且在校验有效期内。 确认所用试剂及菌液是否在有效期内。标准要求：仪器应已校验，有校验合格证并在校验有效期内。仪器及试剂的确认记录见附件 2:仪器确认记录及附件3:试剂确认记录.验证内容取同一批干粉培养基配制三批进行以下验证。配制灭菌过程称量配制分装：称取麦康凯液体培养基干粉 280g,加入纯化水8L搅拌加热煮 沸至完全溶解，分装1000ml蓝盖瓶中，每瓶1000ml,配制完成后于1小时内于121c高 压灭菌15min。灭菌器中装载方式（满载）：将

4、分装好的培养基置于灭菌器内均匀分布，使灭菌 器处于满载分布状态。若培养基不能满足满载分布，则用纯化水替代。均匀分布（如与试验管生物指示剂的放置：将生物指示剂 9支分别放置于各培养基中， 右图），开始灭菌。灭菌完成后按说明书要求进行培养。对照管不做灭菌处理， 同时培养。结果见附件4生物指示剂试验结果可接受标准：根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格 黄色为不合格。对照管由紫色变为黄色为该指示剂有效。灭菌前后的pH值的测定：灭菌前分装100ml冷却至 25c测定pH,取已灭菌的培养基100ml,放冷至25c测定pH值可接受标准：应在7.3 0.2范围内。外观性状可接受标准：灭菌后培养基应

5、对其外观性状仔细检查，如发现住 养基沾染、倾泄等、均应挑出弃去。贮存中培养基发生颜色变化、浑浊，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制 和灭菌程序验证麦康凯液体培养基质量控制试验本检查可与培养基的无菌检查同时进行。菌液制备：取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的浓菌液，用 pH7.0无菌氯化钠- 蛋白冻缓冲液制成50-100cfu/ml的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在 2小时内使用，若保存在28C,可在24小时内 使用。促生长能力：接种不大于100cfu的大肠埃希菌菌液于100ml麦康凯液体培养基和对 照培养基中，于43.0 C培养不大于24小时。抑制能力：接种不小于100cfu的金黄色葡

6、萄球菌菌液于100ml麦康凯液体培养基和 对照培养基中，于43.0 C培养不小于48小时。无菌性检查：将已灭菌的液体培养基进行分装，取2个分装单位，每瓶100ml,置43.0 C 培养箱培养不小于48h。阴性对照：取1mlpH7.0氯化钠蛋白冻缓冲液加入100ml麦康凯液体培养基中，置置 43.0 C培养箱培养不大于24h。可接受标准：与对照培养基比较，促生长能力试验被检培养基试验菌生长良好，液体 浑浊。抑制能力试验被检培养基和对照培养基均无菌落生长，液体澄清。阴性对照无菌落 生长，液体澄清。无菌性检查培养基无菌落生长，液体澄清。结果见附件5:麦康凯液体培养基质量控制试验结果五、偏差与变更确认

7、过程中出现的任何变更和偏差均应如实记录：.偏差确认过程中若出现偏差，执行偏差处理管理标准及偏差处理标准操作规程。.变更确认过程中若出现变更，执行变更控制管理标准和变更控制标准操作规程。.确认过程中出现的偏差和变更记录在附件6方案偏差处理表。六、再验证周期根据验证运行情况，拟监测程序及验证周期。下列情况应再验证：培养基的处方更换； 厂家变更；在使用过程中出现严重问题时应立即进行再验证七、验证依据及参考文件：.中华人民共和国药典（2015年版）.药品生产质量管理规范（2010年版）八、附件.附件1培训情况确认表.附件2仪器确认记录.附件3试剂.附件4生物指示剂试验结果.附件5麦康凯液体培养基质量控

8、制试验结果.附件6:方案偏差处理表附件1:培训情况确认表培训内容：培训日期培训人序号培训对象部门考核情况1口合格口不合格2口合格口不合格3口合格口不合格备注验证小组组长确认签名/日期：附件2:仪器确认记录仪器名称仪器编号功效期至电子天平年月日立式压力烝汽火菌命年月日pH计年月日培养箱年月日培养箱年月日培养箱年月日确认人/日期：年月日复核人/日期：年月日附件3:试剂名称批号后效期生物指示剂年 月 日生物指示剂年 月 日确认人/日期：年 月 日复核人/日期:年 月 日附件4.生物指示剂试验记录培养箱编号/温度：使用日期：年 月日编P123456789对照火菌前颜色灭菌后颜色培养后颜色结果观察人/日

9、期年月日可接受标准：指示剂灭菌后与灭菌前颜一致用“一”表示，否则用“+”表示，培养后颜色与火菌前颜一致用“一”表示，否则用“ +”表示，灭菌彻底，结果处打，否则打X。结论合格口不合格复核人/日期：年 月 日培养箱编号/温度：使用日期：年 月日编R123456789对照火菌前颜色灭菌后颜色培养后颜色结果观察人/日期年月日可接受标准：指示剂灭菌后与灭菌前颜一致用“一”表示，否则用“+”表示，培养后颜色与火菌前颜一致用“一”表示，否则用“+”表示，灭菌彻底，结果处打，否则打X。结论合格 口不合格复核人/日期：年 月 日培养箱编号/温度：使用日期：年 月日编R123456789对照火菌前颜色灭菌后颜色

10、培养后颜色结果观察人/日期年月日可接受标准：指示剂灭菌后与灭菌前颜色致用“一”表示，否则用“+”表示，培养后颜色与火菌前颜一致用“一”表示，否则用“+”表示，灭菌彻底，结果处打，否则打X。结论合格 口不合格复核人/日期：年 月 日附件5麦康凯液体培养基适用性试验结果干粉培养基名称：麦康凯液体培养基批号： 配制培养基名称：麦康凯液体培养基批号：pH值： 配制对照培养基名称：麦康凯液体对照培养基批号： pH7.0氯化钠蛋白月东缓冲液批号：大肠埃希菌浓菌液S- -CMCC-EC- 二有效期至 年_月_日金黄色葡萄球菌浓菌液S- -CMCC-SA- - _-有效期至年_月_ 日培养时间菌培养基名称培养

11、箱/温度：操作人/日期：年 月 日48h（抑制能力）1212大肠埃希 菌（）浑浊口澄清口其他浑浊口澄清口其他浑浊 口澄清浑浊 口澄清金黄色葡 萄球菌 （）浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清阴性对照 组浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清浑浊 口澄清观察人/日期年 月 日年 月 日尢菌性检查48h12观察人/日期年 月日注：代表配制麦康凯液体培养基代表配制麦康凯液体对照培养基可接受标准：促生长能力：与对照培养基比较，被检培养基试验菌应生长良好，液体浑浊；抑制能力：在规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得生长，液体澄清；阴性对照组

12、：无菌落生长，液体澄清；无菌性检查：无菌落生长，液体澄清。结论：麦康凯液体培养基质量控制结果促生长能力：口符合规定口不符合规定抑制能力：口符合规定口不符合规定无菌性检查：口符合规定口不符合规定复核人/日期：年 月 日麦康凯液体培养基适用性试验结果干粉培养基名称：麦康凯液体培养基批号： 配制培养基名称：麦康凯液体培养基批号：pH值： 配制对照培养基名称：麦康凯液体对照培养基批号： pH7.0氯化钠蛋白月东缓冲液批号：大肠埃希菌浓菌液S- -CMCC-EC- 二有效期至 年_月_日金黄色葡萄球菌浓菌液S- -CMCC-SA- - _-有效期至年_月_ 日培养时间菌培养基名称培养箱/温度：培养箱/温

13、度:操作人/日期：年 月 日48h（抑制能力）1212大肠埃希 菌（）口浑浊口澄清口其他口浑浊口澄清口其他口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清金黄色葡 萄球菌 （）口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清阴性对照 组口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清观察人/日期年 月 日年 月 日尢菌性检查48h12观察人/日期年 月曰注：代表配制麦康凯液体培养基代表配制麦康凯液体对照培养基可接受标准：促生长能力：与对照培养基比较，被检培养基试验菌应生长良好，液体浑浊；抑制能力：在规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得

14、生长，液体澄清；阴性对照组：无菌落生长，液体澄清；无菌性检查：无菌落生长，液体澄清。结论：麦康凯液体培养基质量控制结果促生长能力：口符合规定口不符合规定抑制能力：口符合规定口不符合规定无菌性检查：口符合规定口不符合规定复核人/日期：年 月 日麦康凯液体培养基适用性试验结果干粉培养基名称：麦康凯液体培养基批号:配制对照培养基名称：麦康凯液体对照培养基批号： PH7.0氯化钠蛋白月东缓冲液批号：大肠埃希菌浓菌液S- -CMCC-EC- 二启效期至_年.月_日金黄色葡萄球菌浓菌液S- -CMCC-SA- - _- 启效期至_年.月_日配制培养基名称：麦康凯液体培养基值:批号:PH培养时间菌培养基名称培养箱/温度：培养箱/温度:操作人/日期：年 月 日48h（抑制能力）1212大肠埃希 菌（）口浑浊口澄清口 其他口浑浊口澄清口 其他口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清金黄色葡 萄球菌 （）口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清阴性对照 组口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清口浑浊 口澄清观察人/日期年 月 日年 月 日尢菌性检查48h12观察人/日期年 月曰注：代表配制麦康凯液体培养基代表配制麦康凯液体对照培养基可接受标准：促生长能力：与对照培养基比较，被检培养基试验菌应生长良好，液体浑浊；抑制能力：