220509 脂多糖PAGE银染试剂盒使用手册V1.0

1、天净沙系列CAT#:220509-10常温运输及保存脂多糖PAGE胶银染试剂盒LPS PAGE Silver Staining Kit使用手册V1.0江苏天净沙基因诊断技术有限公司网址：；电话：400-6005850；电邮：order 产品及特点脂多糖（Lipopolysaccharides， LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种特有成分，位于细胞壁的最外层并暴露于非荚膜细菌的细胞表面，有利于维持细胞外膜的完整性，保护细菌免受胆汁盐和脂类抗生素的破坏。 结构上，脂多糖由类脂A、核心多糖和O-多糖侧链组成。LPS可以引起免疫刺激的级联反应和机体的毒性病理生理活动，包括释放内毒素引起感染性休克从

2、而导致末梢血管虚脱。临床常通过检测LPS的存在来诊断脑膜炎。LPS还具有高免疫性，强力激活携带CD14/TLR4/MD2受体复合物的免疫细胞，因此LPS是生命科学研究领域的重要课题。LPS银染是研究分析LPS的重要方法，本产品就是基于LPS银染技术开发的产品，它具有下列特点：一站式，用户不需要单独配制各种溶液和优化条件。快速，整个银染过程只有不到80分钟。操作简单，只有预处理、染色和显色三步。检测灵敏度比过碘酸-希夫染色法（Periodic Acid-Schiff，PAS染色法）高100倍，最低能检测到100ng的脂多糖条带。能同时检测光滑型脂多糖和粗糙型脂多糖。本规格可足够10次mini银染

3、，每次三种液体的用量按100mL计算。本产品只能用于科研。规格及成分本试剂盒采用小扁盒包装成份编号规格包装材料脂多糖PAGE预处理液成分1 220509a1100 mL120mL本色瓶脂多糖PAGE银染液成分1220509b110 mL10mL本色瓶脂多糖PAGE银染液成分2220509b213 mL15mL本色瓶脂多糖PAGE银染液成分3220509b30.8g105mL棕色瓶脂多糖PAGE显色液成分1220509c1500 uL1.5mL蓝盖管脂多糖PAGE显色液成分2220509c2500 uL1.5mL本色管使用手册100810sc1份无运输及保存常温运输及保存，有效期一年。自备试剂去

4、离子水，无水乙醇，乙酸。使用方法注意：最好使用三个干净的玻璃盘进行本操作对纯化的LPS进行PAGE电泳。可使用4%的浓缩胶和12.5%的分离胶。在第一个玻璃盘中，加入40mL无水乙醇，5mL乙酸，10mL预处理液成分1，去离子水45mL加在一起摇晃混匀5分钟。此溶液为脂多糖PAGE预处理液。将脂多糖PAGE胶转移到预处理液中，室温摇晃处理20分钟。确保预处理液在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。用100 mL自备的去离子水漂洗3次，每次5分钟。在洗涤的空隙，在第二个玻璃盘中，加入100mL去离子水，再按顺序加入0.1mL的1 脂多糖PAGE银染液成分1， 1.3mL 脂多糖PAGE银染液成分2

5、。再将4mL去离子水加入到5mL装有脂多糖PAGE银染液成分3的棕色瓶子中，摇晃让干粉溶解，然后逐滴加入到上面的溶液中。此溶液为新鲜配制的脂多糖PAGE银染液。将第4步洗涤后的PAGE胶转移到100mL新鲜配制的脂多糖PAGE银染液中，室温摇晃处理10分钟。确保脂多糖PAGE银染液在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。倒掉脂多糖PAGE银染液，用100 mL自备的去离子水快速漂洗3次，每次5分钟。在洗涤的空隙，在第三个玻璃盘中，加入100mL去离子水，1mL 脂多糖PAGE显色液成分1，50uL 脂多糖PAGE显色液成分2，摇晃待用。此溶液为脂多糖PAGE显色液。将PAGE胶转移到100mL上步

6、配制的脂多糖PAGE显色液中，使脂多糖PAGE显色液在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到LPS电泳条带显现（一般需要10分钟左右）。迅速将PAGE胶置于适当背景下照相留存。胶的颜色肯能会逐渐加深，如果有必要保存胶，可以用自备的10%的乙酸终止显色。技术资料LPS银染注意事项银染主要染色PAGE胶的表面，故用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。染色的每步都需要摇晃，一般选择40-60 rpm.如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条带。减少巯