原代培养细胞课件

1、动物的克隆“动物的细胞和组织培养” 是动物克隆的技术基础“细胞培养”也是细胞生物学的主要技术基础。将动物体内的一部分组织取出分散成单个细胞人工控制的培养条件下细胞得以生存并保持生命活动现象生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等机械消化、胰酶消化（一）定义： P28一、动物细胞的培养原理：细胞增殖无菌、无毒 （消毒、灭菌 ；可添加抗生素；定期更换培养液，清除代谢废物 ）营养： （液体培养基：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等） 温度和pH ：（36.50.5，pH7.27.4 弱碱性）气体环境：O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）（二）操作流程及过程解读： 离体的动物细胞

2、如何才能保证其正常的生命活动？需要哪些条件？ 1、培养条件：CO2培养箱,维持培养的PH值可以补充合成培养基中缺乏的物质动物体内一部分组织分散成单个细胞 机械消化 或 胰蛋白酶酶解原代培养传代培养细胞悬浮液细胞株或细胞系动物培养液细胞形成生长晕并增大取样剪碎分装含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。2、过程：（P29图）应选择幼龄动物组织或胚胎使细胞与外界充分接触；与外界物质交换更迅速高效；？取动物胚胎或幼龄动物器官和组织因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强机械消化：剪碎组织胰蛋白酶酶解消化分散成单个细胞，制成细胞悬浮液2、过程：（P29图）消化分解动物组织间的胶原蛋白和

3、其他成分，获取单个细胞转入培养液中进行原代培养分瓶进行传代培养 贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理使其从瓶壁上脱落下来，分散成单个细胞，制成细胞悬液？特点：贴壁生长、接触抑制接触抑制细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白,也叫做糖被,他在细胞上起识别作用。当细胞增殖到一定程度,也就是互相挨在一起的时候,糖蛋白识别了这种信息,就会使细胞停止继续繁殖,这种现象就叫做接触抑制。细胞系、细胞株原代培养细胞系（可传代）原代培养物在首次传代时就成为细胞系 连续细胞系 有限细胞系可连续传代传代培养 细胞株（具特殊性质）连续细胞株有限细胞株挑选细胞系：泛指可以传代的细胞；细胞株：具有特殊性质的细胞系不可连续传代原代

4、培养：即直接从体内取出细胞、组织和器官立即进行培养；没有分瓶培养之前的细胞培养。传代培养：将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中（分瓶），使其继续生长、增殖。即称为传代培养。强调几个概念：细胞系:（2）连续细胞系:（1）有限细胞系：连续细胞株：连续多次有限细胞株：次数有限细胞株:泛指可传代的细胞不能连续培养下去的细胞系能连续培养下去的细胞系、认为其发生了转化：遗传物质发生了改变 大多数具有异倍体核型；有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性，不保留接触抑制，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌）例：二倍体细胞通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞具有恒定的染色体

5、组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性。强调几个概念：（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰 素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质。（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。通过细胞培养检测有毒物质动物细胞培养的应用：？如何获得纯系的细胞系？ “克隆培养法”或“细胞克隆 ” 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。 概念：产物具备怎样的特点？遗传性状均一、表现的性状相似，称为纯系？一个细胞克隆培养法（细胞克隆）纯系适合于克隆的细胞： （原因？） 无限细胞系、转化细胞系、肿瘤细胞 对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞？ 怎样保证是纯系？ 基本要求：必

6、须保证所建成的克隆来源于“单个细胞”。？原代培养细胞、有限细胞系 如何提高细胞克隆的形成率？选择适宜的培养基添加血清 以滋养细胞支持生长激素刺激（如胰岛素）使用CO2培养箱，调节pH ？(胎牛血清最好，可以补充合成培养基中缺乏的物质)维持培养的pH值促进对糖的利用液体培养基失去增殖能力的小鼠成纤维细胞 成纤维细胞：是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的中胚层的间充质细胞分化而来。胞体多突起，呈星状，细胞质丰富、核较大从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。例如研究缺少某种特殊蛋白的细胞，可以发现正常细胞中这种蛋白的功能。作为科研材料，是研究遗传规律和生理特性的重要材料。细胞克隆最主要

7、的用途？动物细胞培养、组织培养、器官培养严格来说，从单个细胞开始、从组织开始、从器官（器官的原基、器官的一部分或整个器官）开始的培养分别叫做细胞培养、组织培养、器官培养。但无论怎么样，三种培养中主要的生命活动都是以“细胞”为单位的，且长期培养的结果通常只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养，这三种培养一般统称为“组织培养”。4、 动物组织培养技术的发展：1.1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。2.1903年，将皮肤及白细胞培养于腹水及血清中，细胞存活达一个月，且观察到细胞分裂3.1907年，将蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，成功看到神经末端的阿米巴运动。4.1912年，对鸡胚心

8、脏组织块进行培养。5. 1943年，获得长期培养细胞系L-细胞系。书P29 1951年，获得海拉细胞系。“组织培养”一词产生真正的组织培养开始；创立了悬浮培养法成功进行了传代培养；发明了卡氏瓶；研制了人工培养液大量细胞系的建成标志着组织培养工作进入了全新阶段五、动物组织培养技术的发展：真正开始1885年鸡神经板在生理盐水中培养成活组织培养一词诞生1903年 皮肤及白细胞培养于腹水和血清中，结果细胞的成活期达1个月，并且看到细胞分裂1907美国科学家将一部分蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，成功看到了神经纤维末端的阿米巴运动，解决了神经纤维起源问题，并创立了悬浮培养法萌芽1912年鸡胚细胞的培养1943科学家在致癌物20-甲基胆蒽的诱导下培养小鼠结缔组织，获得了能在小鼠体内生长肉瘤的L-细胞系1951通过对黑人妇女的宫颈癌组织的体外连续培养，获得肿瘤细胞系即不死细胞系-海拉细胞系组织培养工作进入了全