药监系统官方培训 201310体外诊断试剂溯源-王军

1、体外诊断试剂的量值溯源王军国家食品药品监督管理局北京医疗器械质量监督检验中心2013年10月07日目录一、为什么要谈溯源二、什么是溯源三、怎么溯源四、举例一、背景为什么要谈溯源？什么是“计量溯源性”？溯源性有多种概念：样品可追溯性，文件可追溯性，仪器可追溯性，其含义是某项目的历程或轨迹计量学溯源性 metrological traceability JJF1001-1998通用计量术语及定义：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家测量标准或国际测量标准联系起来的特性。 JJF1001-2011：通过文件规定的不间断的校准链，测量结果

2、与参照对象（可以是一个测量单位、测量程序、标准物质或其组合）联系起来的特性，校准链中的每项校准均会引入测量不确定度。 什么是计量溯源性？不间断校准链为什么有这条链不间断问题的引入:为什么体外诊断试剂要谈溯源临床检验的特点临床检验样品高度复杂样品量有限样品数目巨大时效要求高 发展和应用微量、简便、快速、易自动化的方法（即常规方法）是十分必要的。问题的引入:为什么体外诊断试剂要谈溯源一方面由于体外诊断技术的迅速发展，使大量体外诊断设备进入实验室。不同地区、不同实验室，甚至在一个实验室内，对相同项目的检测，都可能使用不同的检测系统。不同的检测系统由于仪器、检测原理、试剂、检测条件等的不同，其结果、生

3、物参考区间、不准确度、可报告区间等都有相当的差异。另一方面某些方法实现简便性的同时在一定程度上降低了特异性、抗干扰性等性能。 现实中常见的一种现象：不同的临床实验室或同一实验室不同的检测系统、不同的试剂对于同一个标本的检测结果不一样，甚至差别很大缺乏足够的可比性 例1：2009年国家食品药品监督管理局体外诊断试剂监督抽验 61个国产TG试剂CV最大值为3.5%，最小值为0.4测试国家标准物质GBW09147，最大的正偏倚达到27.8，最大负偏倚为-29.7“中国成人血脂异常防治指南”和美国“国家胆固醇教育计划” 可接受的标准为：CV5，bias5，total error15。所有TG试剂的CV

4、均符合要求，26bias 5， 79% total error15例1： 2009年国家食品药品监督管理局体外诊断试剂监督抽验 61个国产TG试剂新鲜混合血清最大正偏倚为22.1，最大负偏倚为-18.9，39% bias 5例2： 2009年国家食品药品监督管理局体外诊断试剂监督抽验 44个国产HDL-C试剂CV最大值为2.7%，最小值为0.4最大的正偏倚达到77.3，最大负偏倚为-30.0“中国成人血脂异常防治指南”和美国“国家胆固醇教育计划” 可接受的标准为：CV4，bias5，total error13CV均 4， 25 bias 5， 50 total error 13例3：2011年

5、肌钙蛋白行标验证(SRM2921)制造商测量值（ug/L）A4.78B6.56C1.69D2.77E1.96F3.30G6.01H4.07 CV46%临床检验结果实现可比的途径所有实验室使用相同的分析系统? 不可能，也不现实 对科学技术进步缺乏敏感性在实验室内部一般是通过以下三种方式解决可比性的问题：a.调整检测系统参数，使结果向一个检测系统看齐；b.采用同样的检测系统以避免此问题，例如门诊、病房、急诊等不同地点检验同一般项目时采用相同的检测系统；c.针对不同的检测系统，制订不同的参考区间在不同的实验室间采取上述方式现实吗？要想达到各个实验室间检验结果的可比，只有各个实验室的不同检测系统的检验

6、结果实现了溯源：使所有分析系统的结果与公认参考标准相联系溯源!溯源性有多重要？临床检验：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告准确性不足是重要的临床检验质量问题影响检验结果“临床准确性”的因素是多方面的样品采集与处理，病人准备，(生物变异)，人为错误方法：正确度（校准）、精密度、特异性、线性、检测限等溯源理论上解决的是正确度问题(校准问题)二、什么是体外诊断试剂量值溯源体外诊断试剂溯源的5个指南性文件ISO 17511（GB/T 214152008）体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性ISO 18153（YY/T 06382008）体外诊断医疗器械 生物样

7、品中量的测量 校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学溯源性ISO 15193 （ GB/T 197022005 ）体外诊断医疗器械 生物源性样品中量的测量 参考测量程序的说明ISO 15194 （ GB/T 197032005 ）体外诊断医疗器械 生物源性样品中量的测量 参考物质的说明ISO 15195 （ GB/T 219192008 ）检验医学 参考测量实验室的要求 关于标准物质的溯源性文件有： GB/T 15000.3-2008/ISO Guide 35:2006标准样品工作导则（3） 标准样品 定值的一般原则和统计方法 CNAS对于量值溯源方面有以下文件：CNAS-CL06:2011

8、量值溯源要求CNAS-GL29:2010标准样品 定值的一般原则和统计方法CNAS-GL18:2008量值溯源要求 在医学测量领域的实施指南溯源性相关文件几个概念分析物和被测量例：24小时尿液(系统)中葡萄糖(组分)的物质的量(量类)分析物(analyte)：被测量中的组分名称，如上例中的葡萄糖被测量(measurand)：待测的特定量，如上例中的整个短语方法和程序测量方法(method of measurement)：一般性描述的测量操作逻辑次序测量程序(measurement procedure)：用于特定测量的、根据给定的测量方法具体描述的一组操作。一个测量程序一般可直接用于相应特定量的

9、测量，测量方法一般不能测量程序有相对固定的性能参数，测量方法则不具备一个测量程序一般只是在一种情况下，针对一个特定量，而一个测量方法则可以产生出多个测量程序，每个测量程序的性能也可能不同测量程序有时也称为分析方案(analytical protocol)或标准操作程序(standard operating procedure, SOP）量值、真值、约定真值、参考值量值(value of a quantity)：由一个数乘以测量单位表示的特定量的大小真值(true value)：与给定的特定量的定义一致的值。真值只有通过完美的测量才能获得；按其本性是不确定的；真值可以有多个约定真值(conven

10、tional true value)：一个特定量的赋予值，对于给定的目的具有适当的不确定度，因而被接受为“真值”。约定真值也称为定值(assigned value)、最佳估计值(best estimate of the value)或参考值(reference value)分析特异性分析特异性 analytical specificity：测量程序只测量被测量的能力。 注1：对测量结果的干扰与分析特异性概念相关。缺乏特异性可被称为分析干扰。测量程序相对于样品的其它成分特异性越好，越不易于受到这些化合物的分析干扰。 注2：在免疫化学测量程序中缺少特异性可能由于交叉反应 注3：测量程序的特异性不应

11、和诊断特异性混淆。例：苦味酸法肌酐试剂盒 准确度、正确度、精密度准确度(accuracy): 一次测量的结果与被测量真值的接近程度正确度(trueness): 大量测量的均值与真值的接近程度精密度(precision): 在规定条件下获得的独立测量结果之间的接近程度精密度包括重复性(repeatability)、中间精密度(intermediate precision)、重现性(reproducibility)不能用数字表示其优劣，只能用“良好”、“不足”等词汇描述其反义概念可以用数字表示，分别为不确定度、偏倚、标准差或变异系数参考物质、校准物质、正确性质控物质、有证参考物质参考物质：一种材料

12、或物质，其一种或多种特性值足够均匀并被良好确定，用于校准测量系统、评价测量程序或为材料赋值校准物质(calibration material)或校准物(calibrator)：在校准函数中其值被用作自变量的参考物质正确性质控物质(trueness control material)：用于评价测量系统的测量偏差的参考物质一种参考物质在一个测量程序或测量系统中只能发挥其两种作用的一种 有证参考物质(certified reference material, CRM): 附有证书的参考物质，其一种或多种特性值用可建立溯源性的程序确定，使之可溯源至准确复现的表示该特性值的测量单位，每种确定的特性值都有

13、给定置信水平的不确定度有证参考物质和参考物质的区别是前者有溯源性和不确定度要求参考测量程序参考测量程序：是经过充分研究的测量程序，给出的值的测量不确定度适合其预期用途，尤其是评价测量相同量的其他测量程序的正确性和鉴定参考物质方面的用途一级参考测量程序 primary reference measurement procedure：具有最高级计量特性的参考测量程序，其操作能够被充分描述和理解，可用国际单位制（SI）单位表示完整的不确定度，不必使用测量的量的测量标准为参考，结果即可接受。决定方法(definitive method): 高度准确的、经充分论证的参考测量程序国际约定参考测量程序 in

14、ternational conventional reference measurement procedure：得到的测量值不能溯源至SI，但国际公认将该测量值作为某确定量的参考值的测量程序。参考物质的互通性互通性(Commutability)：互换性、替换性等，参考物质的重要属性，用不同测量程序测量该物质时，各测量程序测量结果之间的数字关系，与用这些测量程序测量实际临床样品时测量结果的数字关系的一致程度 造成互通性问题的原因：参考物质中添加替代分析物或分析物及有关物质存在形式的改变；基质效应基质效应 matrix effect：除被测量以外的样品特性，对特定测量程序测定被测量及其测量值的影

15、响溯源性计量溯源性(metrological traceability):通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。 测量不确定度(uncertainty of measurement): 与测量结果相联系的参数，表征可合理赋予被测量的值的分散性（对国际公认物质的测量、比对、能力验证） 量值溯源=（系列）校准 注：在CNAS-CL06-2011中把这种情形叫做特殊情况下的量值溯源完整校准等级和向SI的计量学溯源a)SI单位国际单位制单位，共有七个基本单位。国际单位制是计量学研究的基础和核心。特别是七个基本单

16、位的复现、保存和量值传递是计量学最根本的研究课题。物理量名称 单位名称 单位符号长度 米 m 质量 千克（公斤） kg时间 秒 s电流 安【培】 A热力学温度 开【尔文】 K发光强度 坎【德拉】 cd物质的量 摩【尔】 mol在计量上应尽可能追溯至SI制单位,无论是基本单位或导出单位b)一级参考测量程序应以已证实具有分析特异性的测量原理为依据，它不参考某相同量的校准品而提供向SI的计量学溯源性，并具有低的测量不确定度。同位素稀释/质谱(ID/MS)、库仑法、重量法、滴定法，用于重量摩尔渗透浓度测定的冰点降低测量等。一般由国际计量机构或国际科学组织批准，不应发展国家一级参考测量程序。实施该测量程

17、序的实验室应经权威机构认可。在一定时间内为一级校准品某给定类型的量赋值时，可以由一个以上的一级参考测量程序（用两个这样的程序对指定被测量得到的值间不应有显著性差异，均在规定的不确定度内）赋值。C)一级校准品具有最高计量特性的参考物质，由一级参考测量程序赋值。 是具有最小测量不确定度的测量单位的实物体现。一级校准品应直接用一级参考测量程序赋值，或用适当的分析方法确定该物质杂质后间接赋值。一级校准品一般是高纯度的、物理化学性质明确的分析物，经过稳定性和组成完整性检验，并附有证书（有证参考物质 CRM）。一级校准品的认证通常在具有最高计量学能力的实验室内进行，如国际或国家计量机构。d)二级参考测量程

18、序二级参考测量程序应是一或多个一级校准品校准的测量系统。可以由国家计量机构、或经权威认可机构认可的参考测量实验室内建立二级参考测量程序。其测量原理可以不同于一级参考测量程序。e）二级校准品二级校准品应由一或多个二级参考测量程序为之赋值，通常附有证书。二级校准品通常将测量单位从国家计量机构传递至经认可的校准实验室和制造商的校准中心。二级校准品通常是具有基质的物质，使其相似于终端用户常规测量程序所测量的人体来源的样品。f）制造商选定测量程序制造商选定测量程序应是一或多个现有的一级或二级校准品校准的测量系统。制造商选定测量程序可以是二级参考测量程序。g）制造商工作校准品制造商工作校准品应由一或多个制

19、造商选定测量程序赋值。此校准物有时称为“制造商主校准品”（或内部校准品），应证明该校准物质在制造商选定测量程序及被校准的测量程序间有互换性。制造商工作校准品通常是具有基质的物质，相似于终端用户常规测量程序所测量的人体来源的样品。h）制造商常设测量程序制造商常设测量程序应是由一或多个制造商工作校准品或更高级的校准品校准、并已验证了分析特异性的测量程序。制造商常设测量程序的测量分析原理和方法可与常规测量程序相同。若希望具有较低的测量不确定度，应通过如大量重复测量和严格的控制系统来实现。i）制造商产品校准品制造商产品校准品应由制造商常设测量程序赋值，用于终端用户常规测量程序的校准。制造商产品校准品一

20、般是具有基质的物质，相似于终端用户常规测量程序所测量的人体来源的样品j）终端用户常规测量程序应是由一个或多个制造商的产品校准品进行校准的测量系统，常由制造商提供。 溯源的五种结构1、具有一级参考测量程序和一级校准品、能在计量上溯源到SI2530个项目电解质： Cl-, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, . 代谢物（glucose, cholesterol, creatinine, urea, uric acid, triglycerides, . ）甾体激素及某些甲状腺激素（cortisol, thyroxine, estradiol, progesterone, testostero

21、ne, .）药物（ digitoxin, digoxin, theophylline, . ）酶（ALT, AST, CK, LDH, amylase, GGT）一级参考测量程序 一级校准品 二级参考测量程序制造商工作校准品制造商常设测量程序制造商产品校准品示例-建立人血清中LDH测量结果的溯源性SI单位SI单位SI单位SI单位SI单位 SI:kat/L工作校准品：混合血清产品校准品IFCC,37，L-D手工方法与IFCC方法相同全自动生化分析仪同常规方法方法定义不能溯源至SI单位人体样品中分析物定义不充分在实现物质的量的单位摩尔（mole）时的技术问题，即难以获取指定化学化合物的超纯物质：c

22、TnI校准品中分析物的非均一性（异构体、衍生物），难以阐明其物理化学性质，如酶、抗体、糖蛋白等情况 测量程序对给定校准品中的分析物有不同的特异性和选择性：特别是免疫测定测量的各人体样品中分析物和校准品分析物间有微小不均一性，如用白蛋白溶液校准双缩脲反应测量血清中的（总）蛋白浓度；免疫化学测量血清铁蛋白浓度时，因分析物的微小不均一性，不同的单克隆抗体对各个异构体的识别程度不同人体样品基质与校准品基质不同校准品具有不适宜的“替代分析物”样品测量过程中，包括分析物的物理或化学修饰不能溯源至SI单位不能溯源至SI的参考测量系统，有必要建立国际约定，以避免不同国家或地区的参考测量系统提供不同的计量学溯源

23、链，使患者样品测量结果不一，因而妨碍跨时空的可比性。 不能在计量上追溯至SI的，仍然需要仪器设备的溯源性，涉及的如体积、时间、质量、压力、温度等参数的也要进行法定计量。 2、有国际约定参考测量程序（非一级） 和国际约定校准品血红蛋白A1c 国际约定参考测量程序 国际约定校准品制造商选定测量程序制造商工作校准品制造商常设测量程序制造商产品校准品示例-建立HbA1c测量结果的溯源性国际约定参考测量程序HPLC-ESIMS VS HPLC-CE （IRMM/IFCC 466）BCR-405(RM),CRMML工作校准品ML产品校准品HPLC法乳胶凝集法3、具有国际约定参考测量程序（非一级），无国际约

24、定校准品30个项目HDL-胆固醇、血细胞计数和某些凝血因子国际约定参考测量程序 制造商工作校准品制造商常设测量程序 制造商产品校准品示例-建立PLT测量结果的溯源性ICSH 参考方法，FCMML工作校准品ML选定的测量程序：二级标准器ML产品校准品ML常设的测量程序4、具有国际约定校准品（非一级），但无国际约定参考测量程序300个项目B型肝炎表面抗原（ad亚型）和绒毛膜促性腺激素及其抗体 国际约定校准品，用国际公认方法赋值，其单位有时是规定的非SI（如WHO国际单位）制造商选定测量程序 制造商工作校准品制造商常设测量程序制造商产品校准品示例-建立HCG测量结果的溯源性HCG定值方案HCG 3r

25、d、4th 标准品ML工作校准品ML产品校准品ML选定的测量程序ML常设的测量程序WHO International Biological Reference Preparations300，绝大多数为生物大分子或复合物(蛋白、核酸等)，包括过敏原、动物抗血清、抗生素、凝血因子、纤溶有关物质、免疫球蛋白与人抗血清、血小板有关物质、血液安全有关物质、细胞因子与生长因子、内分泌物质、疫苗与毒素部分非临床检验项目International biological measurement standardreference reagentinternational reference panel未给出不

26、确定度不能溯源至SI单位 WHO标准品目录：AlphMay20111.pdfHIV研制报告：BS2011.2178HIV1.pdfWHO International Biological Reference PreparationsThe WHO Biological Reference Materials are established through a standard procedure, found in TRS 932, Annex 2, in which representative materials (often one of several candidates donat

27、ed to WHO for the purpose) are tested by participating laboratories using their own methodologies. These scientific studies are designed and coordinated by a responsible WHO Collaborating Center. Upon establishment of the reference preparation by the ECBS, the material is assigned a unitage, often i

28、n International Units, and serve as the comparator against which results from laboratories, regardless of location or methods employed, can be standardized and compared.TRS 932 Annex 2Procedures for the preparation, characterization and establishment of international and other biological reference s

29、tandardspdf, 334kbTRS932Annex 2_Inter _biol ef standards rev20041.pdf 5、具有制造商选定测量程序，但既无国际约定参考测量程序，也无国际约定校准品300个项目纤维蛋白降解产物（D-二聚体）、肿瘤标记物如癌抗原125（CA125）、衣原体抗体制造商选定测量程序 制造商工作校准品制造商常设测量程序，有时同制造商选定测量程序制造商产品校准品示例-建立CA19-9测量结果的溯源性ML 内部程序(参照RIA)1116-NS-19-9抗原ML产品校准品化学发光免疫法关于溯源性的几点强调17511 不适用于：没有赋值及只用于评价一个测量程序

30、的精密度，即其重复性或重现性的控制物质（精密度控制物质）；用于实验室内质量控制的控制物质，此类物质具有建议的可接受结果值区间，此区间由不同实验室针对某具体测量程序协议制定，其限值无计量溯源性；在相同的计量水平下，测量相同量的两个测量程序的测量结果具相关性，但是这样的“水平”相关不提供计量可追溯性；以不同计量水平的两个测量程序结果间相关作校准，但是测量的量的分析物特性不同。常规结果可溯源至产品校准品的计量溯源性及其与医学判断限值的关系；含有名义标度的特性，即无量级的值（例如血细胞分类）。关于溯源性的几点强调当校准等级中一对连续的水平被省略时（校准品和测量程序，或相反），不确定度会降低。原则上，如

31、制造商声明其产品校准品赋值在计量上可溯源至SI制单位，则SI单位、一级参考测量程序和产品校准品 应是必不可少的。关于溯源性的几点强调患者新鲜标本的检验结果具有可追溯性是ISO17511的主线。说明校准品的可追溯性是为实验室每天标本的检验结果的可追溯性服务的。单纯追求校准品或控制品的可追溯性没有意义。对标本的检验，必须使用仪器、试剂、校准品、和操作程序组合的检测系统。没有检测系统的固定组合，也就不可能实现标本检验结果的可追溯性。关于溯源性的几点强调溯源理论上解决的是校准问题。ISO17511的要求是建立在已经具有良好性能的检测系统上，在精密度、可报告范围、分析特异性、分析灵敏度、参考区间等有足够

32、证据的前提下，才能去谈溯源性。关于溯源性的几点强调关于溯源性的几点强调在建立溯源性时，需对被测量作出足够定义cholesterol: C27H46O, MW 386.67 apolipoprotein (a):Kringle IV and V and protease domainsheterogeneity from Kringle IV type 2 repeats (n = 3- 40), MW 300-800 kD30 carbohydrates content, heterogeneous in size and structure 关于溯源性的几点强调分析特异性：测量程序只测量被测

33、量的能力常规测量过程特异，测量量与参考测量过程测量量完全一致，是量值溯源的前提。对于某些项目的常规方法(不仅免疫化学分析方法)，实现特异性十分困难，分析特异性仍是目前突出的问题 Two direct HDLC methods compared to UC/HPLCspecific, but has biascan be corrected by traceability unspecificcant be improved by traceability Zhao H, et al. Chinese J Lab Med 2009Specificity and traceability Two

34、direct HDLC methods compared to UC/HPLCspecific, but has biascan be corrected by traceability unspecificcant be improved by traceability Zhao H, et al. Chinese J Lab Med 2009关于溯源性的几点强调互通性：用两程序测量此物质所得结果的数字关系，与用这两个程序测量实际样品所得结果的数字关系一致，也就是该物质的理化性质与实际临床样品的接近程度。原因：分析物自身因素：添加、替代物、动物源加工：冻干、添加稳定剂、防腐剂基质效应基质：标

35、本中除待测物外其它一切成分及其物理化学性质基质效应：标本中除待测物外其它一切成分对分析物的影响或基质对分析方法准确测量分析物的干扰。评估基质效应：EP14-A2 Evaluation of matrix effects；Approved gudiline second edition临床检验量值溯源，理想情况“基质效应”基质效应的作用三、怎么溯源参考系统参考系统检验医学溯源联合委员会Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine(JCTLM)2002年6月国际计量局（BIPM）、国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）和国际实验室

36、认可合作组织（ILAC）合作成立 ，秘书处设在BIPM目标：为促进和指导国际公认的医学检验等效测量及向适当测量标准溯源提供全球平台 任务：为医学检验可比、可靠和等效提供支持，从而达到改善卫生保障和促进体外诊断器具贸易的目的 /jctlm/jctlm/WG-1的主要任务是对现有参考测量程序和参考物质进行鉴别和评审，并公布符合要求的参考测量程序和参考物质；WG-2的主要任务收集现有候选参考测量实验室信息，鼓励和促进参考测量实验室网络的形成，评审和公布参考测量实验室。JCTLM WG1 and WG2 Review TeamsWG1工作程序 提名 评审 ISO 15193 ISO 15194 公布

37、比较WG2工作程序 提名 评审 ISO 17025和15195认可 使用JCTLM公布参考方法 参加参考实验室室间质评 公布JCTLM Database JCTLM list: reference measurement procedures JCTLM list: reference measurement procedures About 60 analytes (Type A), 120 proceduresOrganizations: NIST, IFCC, U Ghent, DGKC, CDC, LGC, Mayo Clinic, .JCTLM list: CRMs, high pu

38、rity materials JCTLM list: CRMs, blood serumJCTLM list: reference materials High purity materials:About 30 analytes, 40 materialsBlood serum materials:About 30 analytes, 70 materialsLyophilized or frozen, mostly lyophilizedJCTLM list: reference measurement services(About 25 analytes, 13 labs)有证参考物质的

39、应用注意：公认水平（如国际级、区域级或国家级）；发布权威机构（如WHO、BCR、IRMM、NIST）；证书情况（有证、无证）；材料来源（如无机的、人或动物的、植物的、或微生物的等）；制备（如合成的、天然的或重组的）；分析物的分子形式或替代物（如氨基酸的空间异构体，或用甘油替代甘油酯）；基质（如缓冲的牛白蛋白溶液）；聚集状态（气体、液体、固体）；物相（溶液、混悬液、冻干品）；预期用途谁应该溯源？体外诊断试剂/系统生产厂家？ EU Directive, ISO 17511、18153临床实验室(质量保证)？ ISO 15189, ISO 17025 方法评价、参考物质使用，室内质控/室间质评 非配

40、套分析系统的使用完整校准等级和向SI的计量学溯源建立溯源性几点强调溯源性是制造商在产品设计时就要考虑到的问题几点强调在溯源的过程中要至始至终考虑到分析特异性问题，即参考测量程序和常规测量程序所测相同的量几点强调应始终考虑参考物质的互换性制造商应同时使用参考测量程序和常规测量程序，测量制造商工作校准品和一组相关的人体样品，评估工作校准品的互换性。应同时使用参考程序和经校准的常规程序测量准备由常规测量程序测量的某类型的一组实际样品，将结果作比较，以证实制造商产品校准品的互换性。应对每个样品用参考和校准的常规程序进行重复测量。为达到计量溯源性，常规程序的结果应与参考程序的结果相关，如一定的概率下线性

41、回归的斜率为1、截距为零。基质效应评价Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)document EP14-A2 Evaluation of Matrix Effects; Approved Guideline Second Edition (2005)1、待评方法、比对方法2、新鲜标本和校准品3、线性回归分析或多项式回归分析4、计算95%预测区间：基质效应评价5. 基质效应评价判断标准:对给定的X值，其Y值是否包含在相应的95%预测区间内。a.若Y值超过预测区间的上限，则说明此样品在该测定系统上显示正基质效应；b.若Y值低于预测区间的

42、下限，则说明此样品在该测定系统上显示负基质效应；c.若Y值包含于预测区间内，则在该测定系统上无基质效应。四、举例例子一：校准品定值方法-混合血清校准校准品定值方法IVD-DirectiveCE-marked productsDecember 7, 2005 Only products with CE-mark are allowed to be sold in EU countries. 常规测量程序5个浓度患者血清例子二：校准品定值方法-参考物质校准参考物质工作校准品（仪器、试剂）工作校准品赋值必须比较和确定参考物质和临床标本的互通性，确定无基质效应或具有相同基质效应。当用纯的参考物质进行校

43、准时，临床标本产生的反应可能不同于参考物质。 本公司首选：冰冻人血清基质的参考物质SRM965GBW09174&GBW09175结果满意参考物质工作校准品人血清样品工作校准品赋值国际/国内参考物质（冰冻人血清基质）工作校准品商品校准品（初赋值）（仪器、试剂）商品校准品赋值工作校准品商品校准品人血清样品商品校准品赋值内部验证：定值血清盘外部验证：卫生部正确度验证 不确定度评定定值均匀性稳定性扩展不确定度:95%产品校准工作校准二级一级SI例子三：蛋白质量值传递Company LogoERM-DA471/IFCC 胱抑素C非糖化、小分子半胱氨酸蛋白酶抑制剂，反映肾小球滤过率变化的内源性标志物；心血

44、管病、糖尿病、肾功能、肾移植官方机构IFCC: International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine;WG-SCC：the IFCC working group for the standardization of Cystatin C ；IRMM：The Institute for Reference Materials and Measurements 赋值方法酶放大单辐射免疫扩散法；颗粒增强透射免疫比浊法；颗粒增强散射免疫比浊法；ERM-DA471颗粒增强透射免疫比浊法PETIA颗粒增强散射免疫比浊法

45、PENIA候选胱抑素C标物方法试剂仪器公司PETIADAKOHitachi 7180中生，九强，北检、利德曼RocheHitachi 7180迈瑞DAKOHitachi 7060复星PENIASiemensBN ProSpec北检溯源途径合作定值DA471研制报告定值原理Siemens BN ProSpec SystemHitachi 7180直线拟合测试得到FR（j）候选标物六个浓度稀释作为待测物ERM-DA471六个浓度稀释作为“校准品”与CTM颗粒增强透射免疫比浊法称量稀释；质控比值：1.000.05；测试结果:（总平均值3SD）；线性相关系数0.98；-4SD0.98；-4SD0.01

46、每组测试至少四个点有效；完全相同的条件下，完成4组测试，至少2组有效；CR(i)=FR(i)*CR=Fc(j)*CcCT(i)=FT(k)*CT=Fc(j)*CcCc=CT*FT(k) /Fc(j)Cc=CR*FR(i) /Fc(j)CT/CR=1/2制备制备重组胱抑素制备候选标物向50mmol/L HEPES缓冲液中添加0.1%的BSA、0.9mol/L的NaCl、0.09%的NaN3，搅拌均匀，得到溶液A；用NaOH溶液将溶液A的pH值调整为7.4，并用0.2m的滤膜过滤，得到溶液B；向B中添加CysC重组抗原5mg/L，用市售试剂盒进行浓度的初测；在十万级净化车间进行分装，1mL/瓶，压

47、盖密封，28冷藏保存。 瓶内均匀性检验项目Q1Q212FF0.05Q2/2SH2瓶内均匀性0.0009197780.0008266675122.673.116.8889E-053.83556E-05统计方法：方差分析法测量原理：DAKO透射免疫比浊试剂盒，Hitachi7180测量方法：FF0.05，瓶内是均匀的 ；SH2相对于Q2/2可忽略不计，不均匀性误差不必计入总的不确定度。 测试瓶数1取样从上到下依次取100L，分成六份测试次数3次/份样本测试顺序第一次：1 3 5 2 4 6第二次：654321第三次：2 4 6 1 3 5瓶间均匀性检验项目Q1Q212FF0.05Q2/2SH2瓶内

48、均匀性0.003764850.00644219401.231.841.6105E-041.2367E-05统计方法：方差分析法测量原理：DAKO透射免疫比浊试剂盒，Hitachi7180测量方法：F0.98；-4SD0.01定值盲样测试定值作业指导书（Turbidimetry）定值作业指导书（Nephelometry）No.实验室第一组第二组第三组第四组平均值SDPETIA1迈瑞4.334.394.394.344.36 0.03 2利德曼4.634.734.494.494.59 0.12 3复星长征4.52-4.434.48 0.06 4九强4.414.414.454.584.46 0.08 5中生-4.434.394.41 0.03 6北检4.354.454.434.474.43 0.05 PENIA7北检4.474.634.454.544.52 0.08 协作定值 A对各个实验室的测量结果，进行技术可疑值和统计可疑值的判断和剔除； No.r1