免疫实验课：实验十四 血小板计数

1、实验十四 血小板计数【目的】掌握血小板的显微镜计数方法。【原理】血液经一定比例稀释和破坏红细胞后，滴入计数板，在显微镜下计数一定范围内的血小板数量，经换算求出每升血液中血小板的数量。【器材】1.试管、试管架2.吸管、吸耳球3.微量吸管、胶吸头、干脱脂棉玻棒计数板、盖玻片、绸布【试剂】草酸铵稀释液草酸铵：溶血EDTANa2：抗凝、防Plat聚集【标本】 EDTAK2抗凝静脉血或末梢血。【操作】1. 加稀释液：0.38ml2. 取外周血：20ul3. 稀释血液：擦净插入打出冲洗混匀静置10min 4. 充液：擦净盖上混匀充入静置10-15min5. 计数 放大倍数：高倍（40） 范围：中央大方格内

2、四角及中央共五个中方格 顺序、压线细胞计数原则：同WBC6. 计算：PLT/L=N51020106/L =N109/L 7. 报告：PLT/L= 109/L镜下Plat待征：无色，柔和折光性的圆、椭圆小体，针尖大小WBC未溶解RBC血小板放大400倍放大200倍：未溶解红细胞白细胞血小板【注意事项】1.穿刺深度（23）mm,吸血及注入稀释液动作应快2.静置15min，Plat完全下沉后计数3.所用器材清洁、无灰尘及斑点4.计数时用暗光，注意与杂质区别：Plat：圆、椭圆，柔和折光，（1/31/5）RBC；杂质：形态、大小、折光性不一致5.采血后1小时内计数完毕，否则Plat减少【参考值 】（1

3、00 300） 109/L实验十五凝血酶原时间测定【目的】掌握凝血酶原时间测定（PT）的试管法。【原理】在血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原转化为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。测定从加入钙离子到血浆开始凝固所需时间，即为PT。【器材】1.水浴箱2.试管、试管架3.吸样枪、吸头4.离心机5.秒表【试剂】PT试剂盒1.PT试剂（内含脑粉提取物、缓冲液、稳定剂、防腐剂）,ISI=1.222.PT缓冲液【标本】109mmol/L枸橼酸钠抗凝的静脉血（血液与抗凝剂之比为9：1）【操作】1.分离乏血小板血浆 3000r/min离心10min2.平衡温度 参比血浆、PT试剂置室温15

4、min3. 试剂的配制 PT试剂+2ml缓冲液. 4.温浴 参比血浆、 待测血浆、配好的PT试剂37水浴5min5.测定参比血浆的PT (1)参比血浆0.1ml 37水浴30s,加入预温的PT试剂0.2ml，立即混匀并启动秒表。(2)终止计时 倾斜试管，记录至液体停止流动所需的时间。（3）重复测定2-3次，取平均值即为PT值。6.测定待检血浆的PT值 同步骤57.报告方式 PT= 秒 PTR= INR= 【参考值】 PT:成人11-13s,新生儿延长2-3s,早产儿延长3-5s PTR:0.85-1.15 INR:将INR2-4作为口服抗凝剂治疗 的适用范围【注意事项】1.采血要顺利，否则可激

5、活凝血因子。采血后应仔细观察标本有无溶血、黄疸、脂血和血凝块。2.血液与抗凝剂要充分混匀，血液与抗凝剂比例9：1要准确。3.采血后应在1h内完成测定。4.分离血浆时离心条件要确保3000r/min离心10min,以获得乏血小板的血浆。5.水浴温度要控制在（37.00.5），温度过高或过低都可影响测定结果。实验十六活化部分凝血活酶时间测定【目的】掌握活化部分凝血活酶时间测定（APTT）的试管法。【原理】在37.0条件下，以白陶土（激活剂）激活因子，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供的催化表面，再加入适量的Ca2+即可满足内源性凝血的全部条件。测定从加入Ca2+到血浆凝固所需的时间即为APTT

6、。【试剂】APTT试剂盒1.APTT试剂即鞣花酸 (内含脑磷脂、鞣花酸稳定剂、防腐剂)2. 25mmol/LCaCl2 (内含氯化钙、防腐剂)【标本】109mmol/L枸橼酸钠抗凝的静脉血（血液与抗凝剂之比为9：1）【器材】1.水浴箱2.试管、试管架3.吸样枪、吸头4.离心机5.秒表【操作】1.分离乏血小板血浆 3000r/min离心10min2.平衡温度 用蒸馏水溶解正常人参比血浆，置室温15min，混匀。3.温浴 将25mmol/LCaCl2溶液于37水浴3min4.测定参比血浆的APTT (1)温浴活化 参比血浆0.1ml+APTT试剂0.1ml,混匀， 37水浴30min。(2)计时 加入温浴的25mmol/LCaCl2溶液0.1ml，立即混匀并计时。倾斜试管，记录至液体停止流动所需的