一轮复习 浙科版 微生物的培养和利用（89张） 课件

1、微生物的培养和利用第1课时课标要求1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。3.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。5.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。6.活动：接种、培养并分离酵母菌。7.活动：能分解尿素的微生物的分离与计数。考点一酵母菌的培养和分离考点二显微镜计数法与选择培养内容索引重温高考 真题演练课时精练酵母菌的培养和分离考点一1.培养基梳理归纳 夯实必备知识生长繁殖代谢产物蛋

2、白胨、酵母提取物蔗糖的豆芽汁酵母浸膏氯化钠菌落渗透压化学成分不恒定生物发酵高压灭菌基础烘箱中烘干超净工作台黏附2.无菌操作(1)实验器具与培养基灭菌(2)较高温度会分解的有机化合物的灭菌和使用过的器皿、废弃物的处理对尿素、葡萄糖的灭菌：采用已灭菌的、孔径最小的 过滤除菌。对含葡萄糖的培养基，可采用适当降低 、 以及延长时间的高压灭菌方法灭菌。所有使用过的器皿、废弃物等必须先经过 后再洗涤或倾倒。温度G6玻璃砂漏斗压力高压灭菌(3)接种过程中的灭菌和无菌操作接种环和涂布器的灭菌a.接种环：接种前在明火上 ，待 后再接种。b.涂布器：使用时浸泡在75%的 中，接种前将涂布器在酒精灯火焰上 ， 后涂

3、布。瓶口或试管口的灭菌：接种过程中，在酒精灯火焰上 灭菌。接种时要靠近酒精灯的 原因是：防止空气中微生物落入培养基。冷却灼烧酒精灼烧冷却灼烧火焰3.对目标微生物的分离和纯化(1)马铃薯蔗糖培养基制备斜面培养基时的注意事项：a.注意控制好温度，防止培养基_。b.不要让培养基粘在 。c.试管中的液体量约为试管长度的1/4。制作棉塞应该使用普通棉花，而不能使用脱脂棉的原因是_。凝固提前试管口脱脂棉吸水后容易引起污染(2)纯种和接种利用微生物需要使用纯种的原因：保证实验的可 性和结果的_性。人为接种：挑取目标微生物的纯种转移到液体培养基；保存菌种在斜面培养基上 ；在固体培养基上采用划线或 的方法接种。

4、可靠重复连续划线稀释涂布项目平板划线法稀释涂布平板法主要步骤接种环在固体培养基表面连续_划线、_划线和多次连续平行划线系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种工具_能否用于计数不能计数可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板(3)两种纯化方法的比较扇形平行涂布器接种环培养结果共同点都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征4.活动：接种、培养并分离酵母菌(1)目的要求用 法或稀释涂布平板法接种酵母菌。用 培养基大量扩增酵母菌。平板划线液体(2)方法步骤底部灼烧灭菌培养容器内壁稀释中央不接种菌液斜面(3)实验结果的分析培养未接种的培养基的目的是检查培养

5、基制备是否合格。未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。在接种酵母菌的固体培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。若在固体培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。考向一培养基与无菌操作1.在酵母菌的培养与分离实验中，下列相关操作正确的是A.实验中所需的棉花应使用脱脂棉，因为脱脂棉不易吸水，可以防止杂 菌污染B.在LB固体培养基配制过程中，可以用蒸馏水，不需要无菌水C.灭菌后，通常将实验器具放入4050 烘箱中烘干以除去灭菌时的水

6、分D.制备LB固体培养基时需用500 g/cm2压力灭菌20 min考向突破 强化关键能力脱脂棉吸水后容易引起杂菌污染，因此实验中所需棉花不应使用脱脂棉，A错误；在LB培养基配制完成后需要灭菌，因此在配制过程中无需用无菌水，B正确；灭菌后，通常将实验器具放入6080 烘箱中烘干以除去灭菌时的水分，C错误；制备LB固体培养基时需用高压锅在1 kg/cm2压力、121 下灭菌20 min，D错误。2.(2022绍兴一模)下列有关生物技术实践实验中的灭菌方法，错误的是A.用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌B.尿素培养基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可C.含葡萄糖的培养基须在500 g/cm2压力下灭菌30

7、 minD.接种环在使用的过程中常通过灼烧灭菌考向二接种、培养并分离酵母菌3.如图所示为实验室使用某种接种方法在培养基上培养某种微生物的结果。下列相关说法正确的是A.该图最可能是用稀释涂布平板法进行接种的B.在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格的消毒 和灭菌C.该种微生物有可能是H5N1病毒D.该培养基上的菌落分布不均匀，代表纯培养失败题图是用平板划线法进行接种的，A错误；病毒不能在培养基上生存繁殖，C错误；平板划线法随划线次数的增加，菌落密度逐渐减小，因此分布不均匀，D错误。4.(2022湖丽衢联考)黑腐皮壳菌是一种能引发苹果植株腐烂病的真菌。现欲对该菌进行分离培养和应用的研究，下表是分离培

8、养时所用的培养基配方。请回答：(1)上述配方中，可为真菌生长繁殖提供碳源的是_；氯霉素的作用是_。(2)培养基制备时应_(填“先灭菌后倒平板”或“先倒平板再灭菌”)。待冷却凝固后，应将平板_，以防止冷凝水污染培养基。物质马铃薯葡萄糖自来水氯霉素琼脂含量200 g20 g1 000 mL0.3 g20 g马铃薯、葡萄糖抑制细菌等杂菌生长先灭菌后倒平板倒置(3)为检测某苹果植株黑腐皮壳菌感染程度，需对该植株患病组织进行病菌计数，故应将提取的菌液采用_法进行接种。(4)科研人员将该真菌分别置于液体培养基和固体培养基中培养，获得下图所示的生长速率曲线。图中_(填“a”或“b”)曲线表示该菌在液体培养基

9、中的生长曲线。17 h后，该菌生长速率偏低的原因可能是_(答出两点即可)。稀释涂布平板a培养基中的营养成分不足、有害有毒的物质积累、种群数量大、种内竞争激烈显微镜计数法与选择培养考点二1.稀释涂布平板法测定微生物数量(1)在保证能准确计数的前提下 。(2)将相同稀释度下的多组数值取 后再进行计算。即：每毫升菌液中微生物细胞的数量某一稀释倍数下至少3个培养皿的 菌液稀释液体积 。梳理归纳 夯实必备知识减小稀释度平均值平均菌落数稀释倍数2.血细胞计数板计数法(1)计数板：红细胞计数区又分成25(或16)个 ，每个中方格分为16(或25)个 。(2)计数先将专用盖玻片盖在计数板上，再用吸管在中央平台

10、 滴加摇匀的酵母菌悬液，让菌液渗入盖玻片下直至充满 区。酵母细胞计数可在红细胞计数区进行。对有25个中方格的红细胞计数区选取四个 和 的五个中格(总计80个小方格)进行细胞计数。中方格小方格盖玻片边缘计数角正中央为了避免重复计数，压在小方格边缘线上细胞的数目，只计数每一小方格 和 线条上的细胞数，即“数上不数下”“数左不数右”。计算公式为：酵母细胞个数/mL80个小方格细胞总数/8040010 000稀释倍数。上方左侧某同学在三种稀释倍数下吸取0.1 mL的稀释菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1 mL菌液中活菌数(一般选择菌落数30300的平板进行计数)。 平板 菌落数稀释倍数

11、平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318提示105的稀释倍数下取0.1 mL的稀释菌液涂布的三个平板上的菌落数在30300之间，计算其平均值为(212234287)/3244。进一步可以换算出1 mL菌液中活菌数为(2440.1)1052.44108(个)。培养基中营养物质的浓度和比例营养物质的浓度过高过低_微生物生长不能满足微生物生长的需要营养物质比例微生物发酵生产谷氨酸C/N为41C/N为31N/P为4.5大量繁殖繁殖_微囊藻生长最好生长条件光能自养型只提供水和无机盐，不提供有机物，但必须提供_需氧型微生物进行_培养以保证氧气供应厌氧型微生物静置

12、或培养基表面添加用于隔绝空气的_3.影响微生物生长的因素抑制减缓光照振荡液体石蜡4.选择培养基(1)概念：在培养基中添加(或减去)某种 ，使得只有某些 的微生物能够生长， 微生物均不能生长。(2)作用：从混杂的微生物群体中 出所需种类的目标微生物，也可以从已知种类的混杂的细胞群体中筛选出特定细胞。化学成分特定其他快速筛选特性主要用途设计原理加入青霉素分离酵母菌等真菌青霉素能抑制非抗性细菌生长，对真菌无作用不加_分离固氮微生物固氮微生物能利用空气中的氮气不加_分离自养型微生物自养型微生物能利用无机碳源(3)几种选择培养基的举例氮源碳源5.活动：能分解尿素的微生物的分离与计数(1)实验原理唯一脲酶

13、酚红红(2)方法步骤G6玻璃砂漏斗移液器由大到小酒精灯火焰0.1底部均匀恒温培养箱提示该培养基中唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能够分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，会因缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用该培养基能够筛选出分解尿素的细菌。(1)从功能上看尿素固体培养基属于 培养基。(2)尿素固体培养基是如何实现对分解尿素的细菌的筛选？选择考向一微生物的数量测定与鉴定1.(2022绍兴市上虞区模拟)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3供植物吸收和利用。下列关于土壤中分解尿素的细菌分离和计数的相关叙述，正确的是A.分解尿素的细菌是以尿素的分解产物CO2作为碳源的B.接种时应单手

14、打开皿盖，然后取出浸泡的玻璃刮刀直接涂布C.本实验采用稀释涂布平板法接种，可能导致实验结果偏小D.若实验组菌落平均数为37个/平板，空白对照平板上有3个菌落，则 本组菌落数的平均值为34个/平板考向突破 强化关键能力2.下列关于微生物数量测定的相关叙述，正确的是A.通过稀释涂布平板法统计的活菌数一般低于实际的活菌数B.利用显微镜进行计数时，可使用普通的载玻片完成计数C.平板划线法除可以用于分离微生物外，也常用于统计细菌数目D.应尽量选菌落数少的平板来统计，以确保一个菌落来自单个细菌利用稀释涂布平板法统计活菌时，当两个或多个细胞连在一起时，会形成一个菌落，导致计数低于实际的活菌数，A正确；利用显

15、微镜进行计数时，需要使用血细胞计数板，B错误；平板划线法只适用于分离微生物，不能用于统计细菌数目，C错误；利用平板计数时，在保证能准确计数的前提下减小稀释度，因为菌液稀释度过大，存在较大的随机误差，D错误。考向二土壤中尿素分解菌的分离与计数3.下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。请分析回答：(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。尿素酚红红脲酶能够催化尿素分解释放出氨和二氧化碳，因此选择培养基中应以尿素为唯一氮源。挑取单菌落接种到加有酚红指示剂的鉴别培养基中，培养一段时间后，菌落周围的氨增加，pH升

16、高，酚红指示剂将变红。(2)在3个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为156、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；显微镜计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_。稀释涂布平板法1.75少该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。利用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，应选择菌落数在30300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数为(156178191)3175个。每克土壤样品中的细菌数为1750.11051.75108个。显微镜计数法能将死细胞计算在内，而稀释涂布平板法只能计数活细胞(

17、只有活细胞才能在平板上生长)，故一般显微镜计数法要比稀释涂布平板法的结果大。4.(2022浙江台州高三模拟)下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程，请回答下列问题：(1)该实验培养基不能含有_。A.尿素 B.氯化钠C.葡萄糖 D.琼脂D本实验所用的培养基中尿素应为唯一氮源，琼脂成分复杂，含有一定量的含氮化合物，应用琼脂糖代替，D符合题意。(2)尿素溶液可用_使之无菌。若要检查B过程灭菌是否彻底，可以采用的方法是_。(3)图中步骤C为_。相对于划线分离法，过程D涂布分离法的优点是_。G6玻璃砂漏斗过滤将空白培养基放在适宜温度下培养一段时间，观察有无菌落出现倒平板单菌落更易分开(4)如果

18、菌落周围出现_色环带，说明该菌落能分泌脲酶。鉴定尿素分解菌采用酚红指示剂，尿素分解产生的氨使指示剂变为红色，如果菌落周围出现红色环带，说明该菌落能分泌脲酶。红重温高考 真题演练1.(2021浙江6月选考，17)下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是A.测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B.红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数C.稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细胞计数D.酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度12341234活细胞的细胞膜具有选择透过性，红墨水中的色素分子不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，红墨水中

19、的色素分子能进入细胞，所以可用红墨水检测细胞的存活状态并计数，B正确；平板划线法不能用于细胞计数，C错误；酵母细胞的密度与浑浊度指标存在一定的数量关系，所以酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度，D正确。2.(2020浙江7月选考，19)下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是A.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B.配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC.酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D.适宜浓度的酒精可使醋酸菌活化12341234以尿素为唯一氮源的固体培养基是选择培养基，让能利用尿素的微生物生长，其他微生物不能生长，但不能迅

20、速杀死其他微生物，A项错误；不同微生物生长的适宜pH不同，如培养霉菌时需将培养基的pH调至中性偏酸，培养细菌时需将培养基的pH调至中性偏碱，B项正确；酵母菌酿酒时直接利用的物质是葡萄糖，因此酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒，C项正确；醋酸发酵时，适宜浓度的酒精可使醋酸菌活化，较高浓度的酒精会抑制醋酸菌的活化，D项正确。3.(2018浙江11月选考，32节选)回答与微生物培养及应用有关的问题：(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从_时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采用_方式可较快地进行过滤灭菌。(2)与酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原

21、料制醋，需增加_的过程。某醋酸菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是_。1234达到设定的温度或压力值抽滤将淀粉分解成糖作为碳源(3)为筛选胞外-淀粉酶分泌型菌种，一般从_(A.果园树下B.肉类加工厂周围C.米酒厂周围D.枯树周围)获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个_比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取_用于检测酶活性。1234C水解圈直径与菌落直径上清液1234筛选富含-淀粉酶的菌种要在富含淀粉的环境中筛选。

22、水解圈直径与菌落直径比值越大说明菌种分泌的酶活性越高。1234.(2016浙江10月选考，32节选)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：(1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母浸膏、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加_，灭菌备用。4琼脂LB固体培养基的组成成分是蛋白胨、酵母浸膏、氯化钠、蒸馏水、琼脂。123(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用_灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗_，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。4高压蒸汽尿素固体培养基的制备：先将含有酚红的固体培养基高压灭菌，待冷却至60 时加入灭菌的尿素

23、溶液，但要注意尿素溶液的加入需用到高压蒸汽灭菌后的G6玻璃砂漏斗过滤，原因是G6玻璃砂漏斗的孔径小，细菌不能滤过，便于除菌。孔径小，细菌不能滤过123(3)取适量含产脲酶细菌的104、105两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_(A.105稀释液尿素固体培养基B.105稀释液LB固体培养基C.104稀释液尿素固体培养基D.104稀释液LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生_所致。4A红色区域氨(或NH3)1234LB固体培养基含有的营养元素全面，培养基上会

24、有较多菌落，而尿素培养基只有尿素为唯一氮源，培养基上有较少菌落。尿素培养基上细菌产生的脲酶将尿素分解为NH3，使菌落周围的含酚红的培养基变成红色环带。课时精练123456789101112一、选择题1.(2022温州模拟)下列关于多种培养基的叙述，错误的是A.用于“菊花组织培养”的发芽培养基与生根培养基浓度有差异B.尿素固体培养基是将尿素涂布到固体平面培养基上制成的C.醋酸菌扩大培养液中甘露醇的主要作用是提供碳源D.LB培养基中的蛋白胨和牛肉膏既作碳源，又作氮源2.下列有关微生物培养基的成分与配制过程的相关说法，错误的是A.培养基的成分需根据培养微生物的目的进行适当调整B.固体培养基与液体培养

25、基相比，其中含有琼脂成分C.在培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱酸性D.配制培养基过程中应先调pH值后再进行高压蒸汽灭菌123456789101112细菌要求在中性偏碱的环境中生成，需要将培养基调至中性或弱碱性，C错误。3.下列有关微生物培养与分离的操作叙述中正确的是A.G6玻璃砂漏斗用完后用HCl浸泡，并抽滤去酸，直接保存B.在将培养基转移到三角瓶和试管时使用取样器C.在超净台操作时需打开紫外灯和过滤风D.玻璃刮刀在涂布前后都要进行灼烧处理123456789101112G6玻璃砂漏斗抽滤去酸后应再用蒸馏水冲洗至中性之后再保存，A错误；将培养基转移到三角瓶和试管时必须使用玻璃漏斗，B错误；在

26、超净台工作时需要关闭紫外灯，C错误。4.为了分离某种微生物，实验室配制的培养基成分如下：葡萄糖、氯化钠、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水和尿素溶液。下列叙述错误的是A.葡萄糖的作用是提供碳源并调节渗透压B.配制该培养基时，必须使用无菌水C.加入尿素溶液之前，需先调好pHD.该培养基能用于分离以尿素为氮源的微生物123456789101112配制该培养基时，不必使用无菌水。5.下列关于制备大肠杆菌培养基的叙述，错误的是A.制作培养基时，可不加入琼脂B.倒好培养基的培养皿要立即将平板倒过来放置C.大肠杆菌培养基可用高压蒸汽灭菌法灭菌D.制备斜面培养基可用于大肠杆菌的保存123456789101112

27、等培养基冷凝后才能将平板倒过来放置，B错误。6.平板划线法和稀释涂布平析法是纯化微生物常用的接种方法，二者的共同点有都需要使用接种工具进行接种都需要在酒精灯火焰旁进行接种，防止杂菌污染都能稀释分散菌种，达到分离、纯化目的菌的目的都可以用于计数A. B.C. D.1234567891011127.某同学依据下图操作步骤，从土壤中分离以尿素为氮源的微生物。其中尿素固体培养基和尿素液体培养基均以尿素为唯一氮源。下列叙述正确的是A.尿素固体培养基只比尿素液体培养 基多了琼脂B.以尿素为唯一氮源的培养基的灭菌 方式是过滤灭菌C.利用液体培养基的培养需要振荡以 提高营养成分的利用率D.两种步骤获得的菌落比

28、值相等(甲1/甲2乙1/乙2)123456789101112二、非选择题8.幽门螺杆菌是一种致病菌，其危害主要是引起胃黏膜的炎症，形成急慢性胃炎及消化性溃疡。现从患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验的基本步骤如下，请回答：123456789101112(1)幽门螺杆菌能够以尿素为氮源，是因为其能产生_，在培养基中加入酚红指示剂，若有幽门螺杆菌，则菌落周围会出现_。脲酶红色区域只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，幽门螺杆菌含有脲酶，能够在以尿素为唯一氮源的培养基中生长。幽门螺杆菌中的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的pH升高，如果在培养基中加入酚红指示剂，若有幽门螺杆菌，则菌落周围

29、会出现红色。123456789101112(2)若利用尿素培养基来分离幽门螺杆菌，该培养基需采用的灭菌方法是_。(3)测定菌液中的幽门螺杆菌的菌体数量时，一般采用_法将一定量的菌液接种到尿素固体培养基上，培养一段时间后，统计_的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏_(填“大”或“小”)，原因是_。123456789101112高压灭菌及G6玻璃砂漏斗过滤稀释涂布平板菌落小由于有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以对微生物进行计数；采用这种方法计数时，统计菌落的数量来代表菌体数；由于有些活菌在培养过程中死

30、亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的，因此这种检测方法测得的结果一般偏小。1234567891011129.酸奶因营养丰富和口感美味而深受大众喜爱，且含有活性乳酸菌，对身体大有益处。常见的乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。现采用如下步骤对酸奶中的乳酸菌进行筛选、分离：酸奶选择适宜稀释度涂布MRS琼脂培养基适宜温度培养挑取单个菌落接种于MRS琼脂平板或MC琼脂平板菌种鉴定接种MRS液体培养基菌种保藏请回答下列有关问题：(1)制备MRS琼脂培养基时，采用_法灭菌1520 min。123456789101112高压灭菌(2)倒平板操作时，应在_附近进行，待平板冷凝后将平板倒置的目的是_。

31、(3)制备稀释液时，先将酸奶样品充分摇匀，以无菌吸管吸取样品_mL放入装有225 mL无菌水的锥形瓶中，充分振荡，制成110的样品液。(4)培养一段时间后，从MRS固体培养基上挑取多个单菌落，使用_法接种于MC琼脂平板或MRS琼脂平板上，于361 _(填“无氧”或“有氧”)条件下倒置培养48 h后，再挑取单个菌落进行菌种鉴定。(5)菌种鉴定后将其接种至MRS液体培养基的目的是_。123456789101112酒精灯火焰防止皿盖上的水珠落入培养基25划线无氧扩大培养，增加菌种数目12345678910111210.(2022慈溪市适应性考试)测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌

32、的数目。滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样水样中的细菌留在滤膜上将滤膜转移到伊红美蓝的培养基(EMB培养基)上培养统计菌落数目。流程示意图如图所示。其中，指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色。请据图回答问题：123456789101112(1)过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，均需要进行灭菌处理，与过滤有关的操作都要在超净台上酒精灯火焰旁进行。待测水样过滤完之后，还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上的操作为：在无菌条件下用_冲洗滤杯，并再次_。无菌水过滤123456789101112(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的_操作。

33、从物理状态角度分析，EMB培养基属于_培养基，为检测培养基灭菌是否彻底，对于固体培养基应采用的检测方法是_。接种固体将未接种的培养基在恒温箱中培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生123456789101112(3)某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10 mL待测水样加入到90 mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为84，紫黑色菌落数平均为21，则推测1 L待测水样中的大肠杆菌数目为_个。2 100123456789101112(4)在配制尿素培养基的过程中，由于尿素具有_的特性，导致其无法使用高压蒸汽灭菌法灭菌，通常通过选用合适_的滤膜代替G6玻璃砂漏斗，也可达到去除尿素溶液中杂菌的目的。培养后的菌种用_培养基保存。加热会分解孔径斜面11.下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。实验步骤：把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。123456789101112待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基2上，随即再影印到含有链霉素的培养基3上，进行培养。在培养基3上出现