一轮复习 浙科版 微生物的培养 学案 浙江专用

1、第32讲微生物的培养课标要求3.1.获得纯净的微生物是发酵工程的基础。活动：(1)通过配制培养基、灭菌、接种和培养等实验操作获得纯化的酵母菌落。(2)能分解尿素的微生物的分离与计数。考点一微生物的培养需要适宜条件1培养基为目标微生物提供适宜的生长环境eq avs4al(提醒)培养基中加入的凝固剂，如琼脂，琼脂在培养基中仅作为凝固剂，不能为微生物提供能量和营养。2灭菌和无菌操作技术(1)灭菌(2)消毒eq avs4al(提醒)灭菌的效果比消毒要好。活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。(3)防腐3接种4配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基(1)目的要求：配制液体培养基和固体培养基。(

2、2)方法步骤：计算配制20%马铃薯浸汁制备斜面、固体和液体培养基制作棉塞。(1)所有的培养基中都要加入琼脂。()(2)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。()(3)培养不同微生物的培养基成分完全一样。()(4)获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。()(5)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底。()(6)倒平板后，待平板冷凝之后需将其倒置。()答案：(1)(2)(3)(4)(5)(6)1培养基中营养物质的确定方法(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源可由大气中的CO 2提供，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，

3、氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(3)几种微生物的营养和能量来源微生物碳源氮源能源蓝细菌CO2NHeq oal(,4)、NOeq oal(,3)等光能硝化细菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖类等有机物N2有机物酵母菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物2.消毒和灭菌的比较项目条件结果常用方法应用范围消毒较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药物消毒法用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线消毒法接种室、接种箱、超净工作台等灭菌强烈的物理、化学方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具等干热灭

4、菌法玻璃器皿、金属工具等高压蒸汽灭菌法培养基、容器等突破1无菌操作技术核心素养生命观念1(2019高考江苏卷)下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是()A培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基解析：选A。接种环、涂布器需进行灼烧灭菌，A错误。2培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒法灼烧灭菌法干热灭菌法紫外线消毒法高压蒸汽灭菌法巴氏消毒法ABC D解析：选A。培养基用高压灭菌锅进行高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需进行干

5、热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速、彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭；空气可用紫外线消毒法来消毒；为了不破坏牛奶的营养成分，可采用巴氏消毒法对其进行消毒。突破2微生物的实验室培养核心素养科学探究3(2020浙江7月选考)下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌(醋酸菌)活化解析：选A。利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不能直接杀死其他微生物，而是其他微生物不

6、能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误。4(2022舟山模拟)下表表示某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.从用途看，该培养基属于选择培养基B培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C该培养基没有提供维生素等营养D该培养基调节到合适的pH后就可以接种使用答案：B事实概述类1牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。答案：在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少2分离培养酵母菌通常使用_(填“LB液体”“MS”或“马铃

7、薯蔗糖”)培养基，该培养基应采用_灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后可观察到菌落，菌落的含义是_。答案：马铃薯蔗糖高压蒸汽由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团原因分析类3在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？_，原因是_。答案：不能空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生，从而造成污染4培养基灭菌后，需要冷却至60 时，才能倒平板的原因是_。答案：倒平板时高于60 则会烫手，低于60 时若不及时操作，琼脂会凝固5采用下表配方配制的培养液分离果胶酶产生菌时，该表X处的成分应是_(填“葡萄糖”

8、或“果胶”)，不选另一种成分的原因是_。K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4XH2O0.1 g0.5 g3 g0.01 g2 g加至1 L答案：果胶大多数微生物以葡萄糖作为碳源，不具有选择作用开放思维类6经多次规范操作、重复实验，平板上均出现_的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是_。答案：金黄色葡萄球菌为增强实验结论的严谨性，应增加空白对照组考点二纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得1对目标微生物分离和纯化的方法(1)平板划线法(2)稀释涂布平板法2微生物的数量测定(1)稀释涂布平板法(2)显微镜计数

9、法3选择培养基(1)不同自然环境中生活着的微生物代谢类型不尽相同。(2)许多微生物的代谢方式并不唯一。(3)培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长。(4)选择培养基：在培养基中添加(或减去)某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长。4能分解尿素的微生物的分离与计数(1)原理当培养基中只有尿素作为氮源时，只有能分泌脲酶的微生物才能在该培养基中生长。它们可以通过脲酶将尿素降解为氨，作为其生长的氮源。微生物分解尿素产生的氨会使培养基的碱性增强，若在培养基中加入在酸性情况下呈黄色、碱性情况下呈红色的酚红指示剂，就可根据菌落周围是否出现红色区域，进一步鉴定尿素分解菌

10、。在相同培养条件下，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。eq avs4al(提醒)尿素为该培养基的唯一氮源，只有能产生脲酶的微生物才能将尿素分解为氨，供自身利用，其他微生物由于缺少氮源而无法生长繁殖。(2)方法步骤1选择培养基的制作方法2两种纯化细菌的方法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法纯化原理通过接种环在琼脂固体培养基表面划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞主要步骤平板划线操作系列稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环涂布器3.平板划线法操作的注意事项(1)灼烧接种环之后，要待其冷却后才能

11、蘸取菌液，以免温度太高杀死菌种。(2)在作第二次及以后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样才能使微生物的数目随着划线次数的增加而减少，最终得到由单个微生物繁殖而来的菌落。(3)划线时最后一次的划线不要与第一次的划线相连。(4)划线力度要适当，防止用力过大将培养基划破。(5)平板划线操作中几次灼烧接种环的目的项目第一次划线前灼烧每次划线前灼烧划线结束后灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种均来自上一次划线的末端杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者4.微生物的分离与计数实验中对照组和重复组的设置及作用(1

12、)两种对照组的设置及作用判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设置LB固体培养基进行接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目，进行对比得出结论。(2)重复组的设置及作用：为排除偶然因素对实验结果的干扰，在每一稀释度下宜设置至少3个平板作重复组，用“平均值”代入计算公式予以计算菌落数。突破1微生物的选择培养核心素养生命观念1(2022杭州期末)下列有关土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述，正确的是()A培养基中以尿素作为唯一氮源，该培养基是鉴别培养基B微生物培养常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法C细菌合成的脲酶能将尿素分解成氨，

13、氨会使培养基的酸性增强，pH降低D若上述培养基被杂菌污染，则培养基上会有多种杂菌菌落出现答案：B2某研究小组从黄色短杆菌(能合成L亮氨酸)中筛选L亮氨酸缺陷型(不能合成L亮氨酸)突变菌株，实验流程如下图所示。回答下列问题：(1)培养基灭菌常用的方法是_。(2)过程的接种方法是_。过程接种时，先将灭菌后的金丝绒与培养皿A中的菌落接触一次，然后像盖印章一样将菌种连续接种到培养皿B和C的培养基表面，这种接种方法便于将来比较培养皿B、C中菌落的差异，原因是_。(3)培养皿A、B、C中的培养基都要使用固体培养基，原因是_。若培养皿B的培养基中含有L亮氨酸，培养皿C的培养基中不含L亮氨酸，培养一段时间后菌

14、落生长情况如图所示，研究人员应该从培养皿_(填“B”或“C”)中选取目的菌落。答案：(1)高压蒸汽灭菌法(2)稀释涂布平板法培养皿B、C中的菌种接种位置相同(3)便于观察菌落特征和分离目的菌株B突破2微生物的分离与计数核心素养科学探究3(2022浙江绍兴高二期末)下列有关能分解尿素的微生物的分离与计数实验的叙述，正确的是()A实验中采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液B分离土壤中能分解尿素的微生物时，应选择以尿素为唯一氮源的培养基C测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜计数法D接种土壤微生物稀释液时，平板划线法通过连续划线的操作使微生物均匀分布解析：选B。在分离土壤中的尿素分解菌实验中

15、，采集的土样经高温灭菌后，土样中的微生物被杀死，再制取土壤稀释液接种并培养，不会得到菌落，A错误；分离土壤中能分解尿素的微生物时，应选择以尿素为唯一氮源的培养基，只有能利用尿素的微生物才能生长繁殖，B正确；测定土壤样品中的活菌数目，常用稀释涂布平板法，显微镜计数法是将活菌和死菌一同计数，C错误；接种土壤微生物稀释液时，稀释涂布平板法的操作使微生物均匀分布，D错误。4尿素容易保存，是目前使用量较大的一种化学氮肥，尿素分子并不能直接被农作物吸收，只有被尿素分解菌分解成氨之后，才能被植物利用。下图是从土壤中分离、计数尿素分解菌的过程，有关分析正确的是()A若过程稀释了10倍，则乙锥形瓶里盛有9 mL

16、无菌水B的接种方法可用平板划线法或稀释涂布平板法Ca、b、c培养基可以用LB固体培养基D若过程稀释了10倍，a、b、c培养基上的菌落数依次为57、58、56个，则10 g土样中的尿素分解菌数量为5.7109个解析：选D。过程加入了2 mL菌液，若稀释了10倍，则乙锥形瓶里应盛有18 mL无菌水，A错误；平板划线法不能计数，的接种方法不能用平板划线法，B错误；酵母浸膏和蛋白胨均可提供氮源，a、b、c培养基应以尿素为唯一氮源，C错误；a、b、c培养基上的菌落平均数为57个，10 g土样加入90 mL无菌水相当于稀释了10倍，则由题图可知，共稀释了1106倍，根据稀释涂布平板法的计算公式，每克样品中

17、的菌株数(570.1)1065.7108(个)，所以10 g土样可含有尿素分解菌5.7109个，D正确。原因分析类1在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_。答案：培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果2为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。答案：尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用3在实验中，研究者每隔24 h统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_。答案：因培养时间不足导致遗漏细菌数目4对细菌计数时往往会产生实验误差，稀释涂布平板法计数的值比实际值_，原因是_；显微计数法计数的结果比实际值_，原因是_。答案：偏小当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落偏大显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞5我国的卫生标准是每1 000 mL饮用水中大肠杆菌不得超过3个，在培养基上每1 000 mL合格饮用水形成的菌落数却大于了3个，原因是_。答案：饮用水中还有其他细菌，形成的菌落数远大于3个6某同学计划统计污水池中目的菌的总数，他选用104、105、106稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿，从设计实验的角度看，还