生物技术实验技能训练课-北大生命科学学院

1、.：.；生物技术实验技艺训练课魏春红生物技术专业是生物学领域一个新兴的本科专业，该专业的设立旨在顺应生物学运用研讨型人才培育的需求，以效力于我国新兴生物技术产业快速开展的需求。对于生物技术专业的学生要求遭到严厉的科学思想训练，掌握一定的科学研讨方法，有务虚创新的认识和革新精神；在生物技术研讨与开发领域具有较好的综合分析素养和价值效益观念。根据这一目的，结合我院的现状，在强调内容的先进性、手段的新颖及现代化的根底上，我们曾经开设了以基因工程为主的实验，在教学中我们一直注重实验技艺训练及实习课对学生的作用，学生经过实验技艺训练，一是掌握了方法，二是学会了对方法及其结果的分析

2、，三是激发了学生研讨兴趣，四是启发了学生的研发观念，使学生有了进一步进修的根底和开展的潜能。使我们的学生有才干顺应相关的科研和科研成果的运用开发任务。一、教学内容 中的生物技术实验依学时开设了科研运用中彼此关联的三个实验，有农杆菌介导的烟草基因转化、DNA的SOUTHERN分析及外源基因在原核中的表达 ，这三个实验常在同一科研阿工程中用到。如获得转基因植物后，对转基因植物中目的基因及目的基因表达量进展检测时用到后两个实验，SOUTHERN分析不但可以证明目的基因能否转入植株，还可以检测目的基因在植株中的拷贝数；原核中表达目的蛋白质的纯化品用来制备抗体，用于目的蛋白在植物中表达量的初步检测。二、

3、教学方式主要以启发式教学理念为指点，把提高学生的实验设计才干、实验操作技艺、分析处理问题的才干及强化对科研兴趣贯穿在整个实验课中，从多方面、多层次使学生有时机得到锻炼，以到达我们实验课的目的。到达我们实验课目的的途径如下： 讲课:讲课前先了解学生掌握的有关实际的知识，在此根底上结合实验流程把关键部分作为重点讲解内容，其中适当提问与学生进展互动交流，启发学生的思索，另外把实验过程中问题点传送给学生。分组实验:两人一小组，添加同窗的操作时机，另外以10-16人大组，分组的目的是对不同实验设计和影响实验结果的不同要素进展讨论，丰富实验结果，经过全班同窗的总结讨论，加深培育学生对不同方法结果的分析总结

4、，以到达我们多方面、多层次的教学目的。实验内容:选择前沿的、专业代表性强的实验内容和方法，使学生经过我们实验课学习能顺利进入随后的相关研发任务。三、实验课按排 每个学年的第一学期开课，普通为该学期的第一星期到第三星期，每个星期三到星期五开设一个实验。详细上课时间依院里的按排。实验一：农杆菌介导的烟草基因转化1时间按排星期三：讲实验、清点玻璃器皿、领物品；开场配试剂；开场灭菌；接菌；培育菌液。星期四：预备培育平皿；侵染烟草；暗培育侵染叶片。星期五：预备挑选培育平皿；转移叶片；定光阴照培育。表1 每个小组用超净台的时间和为所在大组要预备的试剂两人一个小组星期四侵染烟草时间星期五转移烟草时间第一大组

5、的小组第二大组的小组第三大组的小组第四大组的小组第五大组的小组预备的试剂用野外苗8819172533灭菌水500ml，灭菌烧杯500ml三个，洗叶子用，本小组用。9：30 9 210182634100ml液体LB，灭菌。50或100ml小三角瓶2个，灭菌。为所在大组做培育菌农杆菌。10：30 10 31119273550ml液体MS灭菌后给教师，为本大组用。11：30 11 41220283612：30 12 51321293713：30 13 61422303814：30 14 71523313915：30 15 8162432402实验原理3实验操作1侵染用菌的预备2叶片的侵染3再生苗的获

6、得3部分实验结果 烟草的组织培育和再生植株实验二、外源基因在原核中的表达1时间按排星期三：讲实验；开场配试剂；开场灭菌；接菌；培育菌液。星期四：活化接菌；培育菌液，诱导蛋白表达，得蛋白样品。星期五：配胶；蛋白质电泳；制干胶。表2 每个小组用超净台的时间和为所在大组要预备的试剂星期三接菌时间星期四活化时间星期四诱导时间第一大组的小组第二大组的小组第三大组的小组第四大组的小组第五大组的小组预备的试剂13：81219172533液体LB 150ml分两份，本大组公用。周二上午灭菌，13:00前放到超净台公用。13:158:1012:05210182634组织领回TIMID 50L，10%APS 40

7、0L ，2上样缓冲液，本大组公用。13:258:15 12:1031119273510%SDS 10ml，本大组公用。13:358:20 12白电泳缓冲液1000ml，4个小组公用一份，领蛋白Marker。13:458:25 12:20513212936固定液200ml，本大组公用染色液有旧的。14:558:30 12:25614223037脱色液600ml，本大组公用。14:058:35 12:30715233138配蛋白胶pH6.8缓冲液50ml，本大组用。14:158:40 12:35816243239配蛋白胶pH8.8缓冲液50ml，本大组用。2实验原理1la

8、c支配子的调控模型2GST标志交融蛋白的纯化过程3实验操作4实验结果表达蛋白质的电泳结果其中“1是规范分子量蛋白质，“2是谷胱甘肽琼脂糖纯化后的表达的目的蛋白样品，“3是表达目的蛋白质的 E.coli DH5菌株含质粒pGEX2Gst-R9的总蛋白样品，“4是E.coli DH5菌株含质粒pGEX2Gst的总蛋白样品。实验三、DNA的SOUTHERN分析1时间按排星期三：讲实验、DNA的琼脂糖胶电泳、DNA转膜。星期四：烤膜、预杂交、杂交、显色。星期五：预备MS平皿、转移叶片。表3 每个小组用超净台的时间和为所在大组要预备的试剂星期五转移叶片第一大组第二大组第三大组第四大组第五大组预备的试剂8

9、：019172533TAE电泳缓冲液1000 ml，可配成50贮液9：0210182634025N HCl : 小组数100ml ，10：0311192735变性液:小组数50ml11：0412202836中和液:小组数50ml，灭菌12：0513212937显色液I和II:一张膜各用30 ml13：0614223038显色液III:一张膜30 ml14：0715233139配6DNA loading buffer15：0816243240配10 SDS 10ml16：0一切同窗把所领物品交还教师2实验原理3实验操作1DNA的电泳2对胶的处置3DNA的转膜4DNA的杂交及显色3实验结果图3：southern结果 其中M：