食品安全性毒理学评价程序和方法

1、 食品安全性毒理学评价程序和方法标准 GB15193.1-151932014 国家食品安全风险评估中心李 宁 食品安全性毒理学评价程序和方法 GB15193.1-15193.19-1994食品安全性毒理学评价程序和方法 GB15193.1-15193.21-2003食品安全性毒理学评价程序和方法 GB15193.1-15193.262014标准修订历史 规划计划立项起草工作组：收集资料，调研，反复论证，征求意见审查：秘书处审查，食品安全国家标准审评委员会检验方法与规程分委员会审核、食品安全国家标准审评委员会主任会议审核批准发布修订过程 修订原则和思路借鉴或者采纳国际认可指南及方法，逐步与国际接

2、轨， 如OECD，美国FDA考虑我国国情科学性和合理性、协调性和有效性，以及通俗性和规范性修订内容GB15193.1-15193.21-2003：现行标准21项GB15193.1-15193.262014：修订后26项，取消一项，未修订一项，修订19项，新增6项发布17项9项近期发布 2015年5月1日开始实施 方法目录修订情况序号 现行标准 修订后标准1食品安全性毒理学评价程序(GB15193.1-2003)修订为食品安全国家标准食品安全性毒理学评价程序2食品毒理学实验室操作规范(GB15193.2-2003)修订为食品安全国家标准食品毒理学实验室操作规范3急性毒性试验（GB15193.3-

3、2003）修订为食品安全国家标准急性经口毒性试验4鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（GB15193.4-2003）修订为食品安全国家标准细菌回复突变试验5骨髓细胞微核试验（GB15193.5-2003）修订为食品安全国家标准哺乳动物红细胞微核试验6哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验（GB15193.6-2003）修订为食品安全国家标准哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验7小鼠睾丸染色体畸变试验（GB15193.8-2003）修订为食品安全国家标准小鼠精原细胞/精母细胞染色体畸变试验8显性致死试验（GB15193.9-2003）修订为食品安全国家标准啮齿动物显性致死试验9非程序性DNA合成试验（GB1

4、5193.10-2003）修订为食品安全国家标准哺乳动物细胞DNA损伤修复/非程序性DNA合成体外试验10果蝇伴性隐性致死试验（GB15193.11-2003）对文本形式和文字编辑修改后转化为食品安全国家标准果蝇伴性隐性致死试验 方法目录修订情况序号 现行标准 修订后标准11体外哺乳类细胞（V79/HGPRT）基因突变试验（GB15193.12-2003）修订为食品安全国家标准体外哺乳类细胞HGPRT基因突变试验1230天和90天喂养试验（GB15193.13-2003）修订为食品安全国家标准90天经口毒性试验13致畸试验（GB15193.14-2003）修订为食品安全国家标准致畸试验14繁殖

5、试验（GB15193.15-2003）修订为食品安全国家标准生殖毒性试验15代谢试验（GB15193.16-2003）修订为食品安全国家标准毒物动力学试验16慢性毒性和致癌试验（GB15193.17-2003）修订为食品安全国家标准慢性毒性和致癌合并试验17日容许摄入量（ADI）的制定（GB15193.18-2003）修订为食品安全国家标准健康指导值18致突变物、致畸物和致癌物的处理方法(GB15193.19-2003）修订为食品安全国家标准致突变物、致畸物和致癌物的处理方法19TK基因突变试验（GB15193.20-2003）修订为食品安全国家标准体外哺乳类细胞TK基因突变试验20受试物处理

6、方法（GB15193.21-2003）修订为食品安全国家标准受试物处理方法21小鼠精子畸变试验（GB15193.7-2003）废止方法目录修订情况新制定6项食品安全国家标准体外哺乳类细胞染色体畸变试验28天经口喂养试验慢性毒性试验致癌试验生殖发育毒性试验食品安全性毒理学评价中病理学检查技术要求 修订后的目录 （一）食品安全性毒理学评价程序 （二）食品毒理学实验室操作规范 （三）急性经口毒性试验 （四）细菌回复突变试验 （五）哺乳动物红细胞微核试验 （六）哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 （七）小鼠精原细胞/精母细胞染色体畸变试验 （八）啮齿动物显性致死试验 （九）哺乳动物细胞DNA损伤修复/非程

7、序性DNA合成体外试验 （十）果蝇伴性隐性致死试验 （十一）体外哺乳类细胞HGPRT基因突变试验 （十二）28天经口毒性试验 （十三）90天经口毒性试验（十四）致畸试验 （十五）生殖毒性试验 （十六）毒物动力学试验 （十七）慢性毒性和致癌合并试验 （十八）慢性毒性试验 （十九）致癌试验 （二十）健康指导值 （二十一）致突变物、致畸物和致癌物的处理方法 （二十二）体外哺乳类细胞TK 基因突变试验 （二十三）受试物处理方法 （二十四）体外哺乳类细胞染色体畸变实验 （二十五）生殖发育毒性试验 （二十六）食品安全性毒理学评价中病理学检查技术要求 毒理学程序修订要点范围本标准适用于评价食品生产、加工、保

8、藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的安全性检验对象包括食品及其原料、食品添加剂、新食品原料、辐照食品、食品相关产品(用于食品的包装材料、容器、洗涤剂、消毒剂和用于食品生产经营的工具、设备)以及食品污染物。毒理学程序修订要点毒理学试验方法四阶段内容GB15193.1-15193.21-2003第一阶段：急性毒性试验第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验 第三阶段：亚慢性毒性试验-90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验） GB15193.1-15193.12014 删去四个阶段的划分。急性毒性试验增加“限量法（Limi

9、t test）、上-下法（Up-down Procedure）”，遗传毒性试验删除“小鼠精子畸变试验”，增加“体外哺乳动物染色体畸变试验”并明确了试验组合“30天和90天喂养试验”改为“28天经口毒性试验”和“90天经口毒性试验”，“繁殖试验”改为“生殖毒性试验”，增加“生殖发育毒性试验将“代谢试验”改为“毒物动力学试验”；毒理学程序修订要点毒理学试验方法四阶段内容组合原则：考虑原核和真核；体外和体内试验相结合；受试物特点组合1：细菌回复突变试验；哺乳动物红细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；小鼠精原细胞/精母细胞染色体畸变分析或啮齿类动物显性致死试验组合2：细菌回复突变试验；哺乳动

10、物红细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；体外哺乳类细胞染色体畸变试验或体外哺乳类细胞TK基因突变试验其它备选遗传毒性试验：显性致死试验、果蝇伴性隐性致死试验、体外哺乳细胞DNA损伤修复（非程序性DNA合成）试验），体外哺乳类细胞HGPRT基因突变试验 毒理学程序修订要点遗传毒性组合凡属我国首创的物质，特别是化学结构提示有潜在慢性毒性、遗传毒性或致癌性或该受试物产量大、使用范围广、人体摄入量大，应进行系统的毒性试验，包括急性经口毒性试验、遗传毒性试验、90天经口毒性试验、致畸试验、生殖发育毒性试验、毒物动力学试验、慢性毒性试验和致癌试验(或慢性毒性和致癌合并试验)。 凡属与已知物质（指

11、经过安全性评价并允许使用者）的化学结构基本相同的衍生物或类似物，或在部分国家和地区有安全食用历史的物质，则可先进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验、90天经口毒性试验和致畸试验，根据试验结果判定是否需进行毒物动力学试验、生殖毒性试验、慢性毒性试验和致癌试验等。凡属已知的或在多个国家有食用历史的物质，同时申请单位又有资料证明申报受试物的质量规格与国外产品一致，则可先进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验和28天经口毒性试验。毒理学程序修订要点不同受试物试验原则香料毒理学安全性评价 凡属世界卫生组织（WHO）已建议批准使用或已制定日容许摄入量者，以及香料生产者协会（FEMA）、欧洲理事会（COE）和国际

12、香料工业组织（IOFI）四个国际组织中的两个或两个以上允许使用的，一般不需要进行试验。凡属资料不全或只有一个国际组织批准的，先进行急性毒性试验和遗传毒性试验组合中的一项，经初步评价后，再决定是否需进行进一步试验。凡属尚无资料可查、国际组织未允许使用的，先进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验和28天经口毒性试验，经初步评价后，决定是否需进行进一步试验。凡属用动、植物可食部分提取的单一高纯度天然香料，如其化学结构及有关资料并未提示具有不安全性的，一般不要求进行毒性试验。毒理学程序修订要点不同受试物试验原则食品添加剂毒理学安全性评价 凡属毒理学资料比较完整，世界卫生组织已公布日容许量或不需规定日容许量

13、者或多个国家批准使用，如果质量规格与国际质量规格标准一致，则要求进行急性经口毒性试验和遗传毒性试验。如果质量规格标准不一致，则需增加28天经口毒性试验，根据试验结果考虑是否进行其他相关毒理学试验。凡属有一个国家批准使用，世界卫生组织未公布日容许量或资料不完整的，则可先进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验、28天经口毒性试验和致畸试验，根据试验结果判定是否需要进一步的试验。对于由动、植物或微生物制取的单一组分、高纯度的食品添加剂，凡属新品种的，需要先进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验、90天经口毒性试验和致畸试验，经初步评价后，决定是否需进行进一步试验。凡属国外有一个国际组织或国家已批准使用的，则

14、进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验和28天经口毒性试验，经初步评价后，决定是否需进行进一步试验。毒理学程序修订要点不同受试物试验原则酶制剂毒理学安全性评价 由具有长期安全食用历史的传统动物和植物可食部分生产的酶制剂，世界卫生组织已公布日容许摄入量或不需规定日容许摄入量者或多个国家批准使用的，在提供相关证明材料的基础上，一般不要求进行毒理学试验。对于其他来源的酶制剂，凡属毒理学资料比较完整，世界卫生组织已公布日容许摄入量或不需规定日容许摄入量者或多个国家批准使用，如果质量规格与国际质量规格标准一致，则要求进行急性经口毒性试验和遗传毒性试验。如果质量规格标准不一致，则需增加28天经口毒性试验，根据

15、试验结果考虑是否进行其他相关毒理学试验。对于其他来源的酶制剂，凡属新品种的，需要先进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验、90天经口毒性试验和致畸试验，经初步评价后，决定是否需进行进一步试验。凡属一个国家批准使用，世界卫生组织未公布日容许摄入量或资料不完整的，进行急性经口毒性试验、遗传毒性试验和28天经口毒性试验，根据试验结果判定是否需要进行进一步的试验。通过转基因方法生产的酶制剂按照国家对转基因管理的有关规定执行。毒理学程序修订要点不同受试物试验原则 急性经口毒性试验GB15193.1-15193.21-2003：霍恩氏法，寇氏法，最大耐受剂量法B15193.1-15193.21-2014：删除

16、最大耐受剂量法，增加上下法（Up-And-Down Procedure）和限量法（Limit Tests） 急性经口毒性试验限量方法限量方法：每组20只动物，雌雄各半，试验剂量为10g/kgbw如果达不到10g/kgbw,则给予最大剂量作为试验剂量 细菌回复突变试验GB15193.4-2003规定的Ames试验（鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验）, 而OECD、USEPA和USFDA均采用了鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌联合的方法，能够更好检测各种类型的基因突变GB15193.4-2003修改为细菌回复突变试验 细菌回复突变试验Ames 试验菌株：TA97，TA98，TA100，TA102细菌回

17、复突变试验：荐采用下列的菌株组合：a） 鼠伤寒沙门氏菌TA1535； b） 鼠伤寒沙门氏菌TA97a 或TA97 或TA1537； c） 鼠伤寒沙门氏菌TA98； d） 鼠伤寒沙门氏菌TA100； e) 鼠伤寒沙门氏菌TA102 或大肠杆菌WP2uvrA 或大肠杆菌WP2uvrA(PKM101) 细菌回复突变试验结果验证：明显阳性结果不需要验证阴性结果：改变试验条件进行验证，如改变试验剂量，组间间隔等。 GB15193.5-2003：30h给药法。两次间隔24h，第二次给予后6h，取骨髓GB15193.5-2014：两次间隔24h，第二次给予后6h，取骨髓增加了多种染毒时间和采集标本时间：一次

18、给药后，24h和48h采集标本；或2次间隔24小时给药后，1848小时采集标本增加外周血进行微核观察的方法的选择每只动物计数200个红细胞，“观察嗜多染红细胞在总红细胞中的比例；将“每只动物计数1000个嗜多染红细胞”改为“每只动物计数2000个嗜多染红细胞”。将微核率明确为含微核细胞率。 哺乳动物红细胞微核试验 GB15193.8-2003： 小鼠睾丸染色体畸变试验中所列试验方法主要为精母细胞染色体畸变的方法GB15193.8-2003：增加了精原细胞染色体畸变的方法，取材时间不同精原细胞：，一般为一次给予受试物。高剂量组应于末次给予受试物后的第24h和第48 h处死动物采样，中、低剂量组的

19、动物均在末次给予受试物后24 h处死动物采样精母细胞：给予动物受试物5天，第一次给受试物后12天14天采标本小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验 分组：必要时增设未处理对照组”，增加了“若试验结束做恢复期观察，对照和高剂量需增设卫星组”，剂量设计：涵盖100倍，尽可能高，最大给予剂量掺入饲料：不超过5，超过，考虑营养平衡观察指标：增加眼科检查血液检查：增加“红细胞压积、血小板计数、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）”指标、如果对血液系统有影响，增加“网织红细胞、骨髓涂片细胞学检查” 28天经口毒性试验 血生化检查：明确采血时间及条件，增加“谷氨酰转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（AKP）、氯、钾、钠测定”和“必要时可检测钙、磷、总胆汁酸（TBA）、尿酸（UA）、胆碱酯酶、山梨醇脱氢酶、高铁血红蛋白、激素”等指标增加尿液检查内容病理组织学检查：增加“脑、甲状腺、胸腺、心脏、肾上腺、结肠、胰、肠系膜淋巴结、膀胱” 等器官组织学检查，必要时对“脊髓（颈、胸、腰）、垂体、食道、空肠、回肠、直肠、唾液腺、颈淋巴结、气管、肺、动脉、子宫、乳腺、附睾、前列腺、骨和骨髓、坐骨神经和肌肉、皮肤和眼睛” 等器官加测病理组织学检查，及“对肉眼可见的病变或可疑病变组织进行病理组织学检查”，增加“应有组织病理学检查报告，病变组织给出病理组织学照片”的内容 28天经口毒性试验 分组：必要时增