MM的实验室检测概述课件

1、多发性骨髓瘤的实验室检测北京朝阳医院西区 检验科2016.04.14第1页，共40页。多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)MM是一种恶性浆细胞病，其肿瘤细胞起源于骨髓中的浆细胞，而浆细胞是B淋巴细胞发育到最终功能阶段的细胞。发病率占所有肿瘤的12% ，血液肿瘤的10%常见于中、老年人(50-70岁居多,40岁以下少见)。第2页，共40页。临床表现骨痛、病理性骨折：最常见肾功能受损、肾衰贫血血钙水平异常免疫功能失调，感染心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变MM的临床表现多样化, 常常因此就诊于骨科、肾脏内科等, 漏诊、误诊可达到70%以上！第3页，共40页。多发性骨髓瘤的现状死亡

2、率 就诊晚2/3 确诊时已达中晚期骨折预后差增加负担感染发生率高肾脏病变不可逆重视实验诊断早发现 早治疗误诊率高1/3非血液科首诊第4页，共40页。MM的实验室诊断常规检查生化检查骨髓检查M蛋白鉴定分型诊断免疫分型浆细胞标记指数染色体测定基因异常检测IL-6检测影像学检查第5页，共40页。常规检查血常规：Wbc 减少、贫血、Plt 减低血沉： 加快 红细胞呈缗钱样排列血液生化检查血清钙磷和碱性磷酸酶：增高血清2微球蛋白：增高肾功能：BUN、Cr升高血液流变学检查：血清粘滞度增加CRP：升高高尿酸血症血清总蛋白、白蛋白LDH增高第6页，共40页。骨髓检查骨穿：骨髓原、幼浆细胞（骨髓瘤细胞）明显增

3、多。骨髓瘤 细胞在骨髓内呈弥漫性分布，或灶性、斑片状分布。 需要多次多部位穿刺，以免漏诊数量：国内标准为浆细胞15%,并有异常浆细胞或组织活检证 实。国外最低标准为异常浆细胞10%或组织活检证实 形态：细胞浆呈灰蓝色，可见多核（2-3个核），核仁1-4 个，初浆区消失，胞浆内可有少数嗜苯胺蓝颗粒，偶 见嗜酸性球状包涵体或大小不等的空泡。核染色质疏 松，有时凝集成大块，但不呈车轮状排列第7页，共40页。 多发性骨髓瘤血象 多发性骨髓瘤骨髓象（浆细胞样骨髓瘤细胞）第8页，共40页。多发性骨髓瘤骨髓象第9页，共40页。血M蛋白鉴定 M蛋白是单克隆浆细胞恶性增殖产生的均一蛋白。 MM常为单株浆细胞的前

4、体细胞恶性增生，形成庞大的单克隆浆细胞群，此种浆细胞可分泌大量结构均一的免疫球蛋白或肽链亚单位，临床上称之为单克隆免疫球蛋白（monoclonal proteins, M蛋白）第10页，共40页。血清蛋白电泳是检测M蛋白的唯一方法第11页，共40页。血清蛋白电泳（SPEP）：M蛋白形成异常浓集带，位于 区内，或 、2 区内可见一窄底的高峰。由于尿液可以浓缩许多倍，因此检查游离轻链时尿蛋白电泳（UPEP）比SPEP灵敏。80%的MM患者可发现M蛋白Alb12白蛋白1抗胰蛋白酶触珠蛋白转铁蛋白IgG前白蛋白1酸性糖蛋白铜蓝蛋白C3a、C3bCRP1脂蛋白抗糜蛋白酶2巨球蛋白IgA、IgM、IgD、

5、纤维蛋白原、1脂蛋白、血凝素第12页，共40页。琼脂糖凝胶电泳原理-+蛋白加样位置阴极 阳极0-+-电场作用力第13页，共40页。正常的电泳图谱第14页，共40页。 出现单克隆免疫球蛋白的电泳图谱第15页，共40页。出现在a2区域的单克隆免疫球蛋白炎症症状肾病综合征出现游离轻链第16页，共40页。出现在 b 区域的单克隆免疫球蛋白第17页，共40页。游离轻链病第18页，共40页。检测结果阐述电泳的结果是以%的形式给出的, 但是对于临床诊断, 结果必须要以浓度的形式给出g/LM蛋白的诊断标准IgG35g/LIgA 20g/LIgM 15g/LIgD 2.0g/LIgE 2.0g/L本-周蛋白阳性

6、1.0g/24h 蛋白浓度出现异常时,必须要进行其它的补充检测免疫固定电泳第19页，共40页。M蛋白？什么类型？为什么要做免疫固定电泳G A M kappa lambda第20页，共40页。 在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条带的蛋白出现异常增加 电泳结果显示为低免疫球蛋白血症, 或者免疫球蛋白定量结果显示可能是游离轻链病 尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链),查看患者是否做过血清蛋白电泳,如果有必要需要进行血清的免疫固定电泳 什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测?第21页，共40页。 免疫固定电泳一种电泳加沉淀反应技术。可用于各种蛋白质的鉴定。将血清直接加于电泳后蛋

7、白质区带表面， 抗原与对应抗体直接发生沉淀反应，形成的复合物嵌于固相支持物中。第22页，共40页。 血清免疫固定电泳ELP 泳道: 固定液G 泳道： 抗 IgG 重链抗血清A 泳道： 抗 IgA 重链抗血清M 泳道： 抗 IgM 重链抗血清K 泳道： 抗 轻链抗血清L 泳道： 抗 轻链抗血清仪器： Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪 试剂：免疫固定电泳试剂灵敏度：125mg/L第23页，共40页。正常血清第24页，共40页。确认IgM 型M蛋白血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （1）IF在区 发现疑似M蛋白 第25页，共40页。确认IgM + IgM 型 双克隆M蛋白在区发现疑似双克隆M蛋白IF血清蛋白

8、免疫固定电泳应用举例 （2）第26页，共40页。IgG Lambda型M蛋白单克隆M蛋白出现在Alpha2-Beta区带 血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （3）第27页，共40页。* 纤维蛋白原，严格避免血浆标本血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （4）第28页，共40页。寡克隆免疫球蛋白电泳图谱多条(2)窄的条带，通常比较微弱。由于个别免疫球蛋白克隆增生。 Ig G型寡克隆电泳图谱IF血清蛋白免疫固定电泳应用 特殊情况第29页，共40页。寡克隆条带在以下情况时常会出现 :治疗引起的免疫缺陷骨髓或者器官移植*自体免疫疾病风湿性关节炎 干燥综合症红斑狼疮*感染引起的 免疫缺陷病毒: HIV,病毒性肝炎,

9、 EBV, CMV 细菌和寄生虫感染: 脑膜炎, 脑炎第30页，共40页。轻链病血清蛋白免疫固定电泳特殊病例免疫固定结果显示为单独的 l 成分第31页，共40页。 免疫固定电泳对骨髓瘤进行分型，敏感性是SPEP的10倍，不能定量第32页，共40页。尿蛋白检测尿常规：蛋白尿、血尿、管型尿尿蛋白：尿液中出现的自由轻链即本-周蛋白分型尿本周蛋白阳性率 IgG-MM 50-60% IgA-MM 40%-50% IgD-MM 80% IgM-MM10%30% POEMS综合征 阴性 MGUS可有各型MM本周蛋白阳性率第33页，共40页。本周氏蛋白1844年Henry Bence Jones 在一个骨髓瘤

10、患者尿中发现一种具有特殊凝溶性质的蛋白4060发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀轻链二聚体大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白第34页，共40页。浆细胞增生症影响血液中出现游离轻链尿液中出现起因结果骨髓瘤巨球蛋白血症CLL慢性白血病MGUS.肾小管损伤淀粉样病变轻链沉淀病本周氏蛋白第35页，共40页。正常免疫球蛋白的合成 18分钟10分钟浆细胞一条重链一条轻链组合一分子免疫球蛋白过剩轻链肾小球滤过10%在肾小管分解代谢80%重吸收10%随尿排出第36页，共40页。异常免疫球蛋白的合成 18分钟10分钟恶变的浆细胞一种重链一种轻链组合单克隆免疫球蛋白大量过剩轻链肾小球滤过本周氏蛋白尿肾毒性、异常沉积第37页，共40页。本周氏蛋白阳性患者多表现为肾脏损害极易误诊为慢性肾炎轻链有3种形式出现在血清或尿中正常的轻链过剩 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病伴随轻链单一轻链第38页，共40页。重链参考泳道复合轻链游离轻链第39页，共40页。1.是一种检测体内是否存在克隆性浆细胞的高