2022医学课件单个核细胞

1、第十四章 免疫细胞的别离及其外表标志检测技术第一页，共三十二页。第二页，共三十二页。免疫细胞的别离 外周血单个核细胞别离 淋巴细胞的别离 T细胞和B细胞的别离 T细胞亚群的别离 第三页，共三十二页。外周血单个核细胞别离 外周血单个核细胞peripheral mononuclear cells, PMNC包括淋巴细胞和单核细胞monocyte。 Ficoll别离液法主要用于别离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的别离法。 第四页，共三十二页。细胞分选和根本原理不同细胞密度不同不同细胞外表生物学特性不同不同细胞外表分化抗原不同第五页，共三十二页。不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.0

2、93 粒细胞密度为1.092 单个核细胞淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076-1.090 第六页，共三十二页。不同细胞密度不同第七页，共三十二页。用1.0770.001的分层液可将细胞别离 第八页，共三十二页。密度梯度离心(Ficoll)离心第九页，共三十二页。淋巴细胞别离去单核细胞贴壁粘附法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法 Percoll 别离液法 连续密度梯度离心第十页，共三十二页。E花环沉降法 尼龙毛柱别离法 T细胞和B细胞的别离T细胞亚群的别离 亲和板结合别离法 磁性微球别离法 荧光激活细胞别离仪别离法 第十一页，共三十二页。细胞外表分化抗原CD抗原适用于T、B细胞的别离能看出CD抗原细胞亚

3、群的别离未知CD抗原细胞亚群的别离阴性分选第十二页，共三十二页。第十三页，共三十二页。磁珠大小可以选择第十四页，共三十二页。大小免疫磁珠别离细胞的特点比较 比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。 收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。分离成本成本低。需要很强的磁场来分离细胞，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行。第

4、十五页，共三十二页。第十六页，共三十二页。第十七页，共三十二页。免疫磁珠法细胞分选过程第十八页，共三十二页。免疫磁珠细胞分选装置第十九页，共三十二页。全自动细胞分选系统第二十页，共三十二页。荧光激活细胞别离仪别离法 第二十一页，共三十二页。流式细胞分析仪第二十二页，共三十二页。 淋巴细胞标志及亚群分类 常用于鉴定和检测淋巴细胞外表标志是簇分化抗原Cluster of differentiation，CD。 第二十三页，共三十二页。T细胞外表标志及其亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 help T cell,ThCD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞cytotoxic T cell,Tc

5、 or CTLCD4+CD25+调节性T细胞 regulatory T cell,Tr or Treg第二十四页，共三十二页。B细胞外表标志 SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，局部CD分子是B细胞的重要外表标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。 CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。 第二十五页，共三十二页。NK细胞外表标志 人类NK细胞外表标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。 第二十六页，共三

6、十二页。T细胞及NK细胞第二十七页，共三十二页。抗原提呈类细胞第二十八页，共三十二页。免疫细胞外表标志的检测抗体致敏细胞花环法 免疫细胞化学法 免疫荧光法 流式细胞分析法 第二十九页，共三十二页。淋巴细胞外表标志检测的临床意义 淋巴细胞外表标志检测是评价免疫功能的重要指标。 对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反响的监测。 第三十页，共三十二页。临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化 第三十一页，共三十二页。内容总结第十四章。T细胞和B细胞的别离。不同细胞密度不同。不同细胞外表生物学特性不同。不同细胞外表分化抗原不同。密度梯度离心(Ficoll)离心。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。常用于鉴定和检测淋巴细胞外表标志是簇分化抗原Cluster of