了哥王中芫花素含量的高效液相色谱法测定

1、了哥王中芫花素含量的高效液相色谱法测定【摘要】目的建立了哥王中芫花素含量测定方法，为了哥王的质量评价提供根据。方法采用HPL法测定其芫花素的含量，色谱柱：AlltehDS(4.6250,5)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(体积比5545)；流速为1.0lin-1；检测波长346n，柱温为35；进样量10l。结果芫花素在0.242.40g范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为Y=84069X+34.648，r=0.9998。平均回收率为100.57%，RSD=1.76%(n=5)。结论该法具有操作简便准确，回收率好，精细度、重复性高，分析快速的优点，可作为了哥王药材的质量控制方法。【关

2、键词】高效液相色谱了哥王芫花素含量测定Abstrat:bjetiveTestablishaethdfrthedeterinatinfthententfgenkanininikstreiaindiaL.A.ey(.india).ethdsThententfgenkaninin.indiaasdeterinedbyHPLithAllteh_(18)(2504.6,5)lun.Aixturefethanland0.2%phsphriaidslutin(5545)asusedasbilephase,theflrateas1.0lin-1andUVdetetinavelengthasat346n.Tep

3、eratureas35andsaplesizeas10l.ResultsThelinearrelatinshipasgdithintherangef0.242.40g(r=0.9998).Theaveragereveryas100.57%,RSDas1.76%.nlusinTheethdissipleandaurateithgdseparatin.TheresultsaresensitiveandreprduibleandaybeusedinthequalityntrlfgenkanininikstreiaindiaL.A.ey.Keyrds:HPL;ikstreiaindia;Genkani

4、n；Deterinatin中药了哥王为瑞香科植物了哥王ikstreiaindiaL.A.ey.的枯燥根或根皮,主产于两广，浙江、江西也有出产。性味苦寒、微辛，有毒。功能清热解毒，化痰散结，消肿止痛。主治风湿性关节炎，淋巴结炎，瘰疬，痈肿，跌打损伤，具有抑菌、抗病毒抗炎镇痛、止咳祛痰等作用。本品有毒，对皮肤有刺激性，所含树脂有强烈的泻下作用1，文献报道含有黄酮、多糖类、酸性树脂、挥发油、甾体类、皂苷等成分。了哥王含有南荛酚、牛蒡苷元、松脂酚、山萘酚等多种化学成分，还含芫花素、西瑞香素等2。了哥王提取液中有效成分的含量测定目前尚无研究报道，因此，我们采用高效液相色谱法测定了哥王超声提取液中芫花素的

5、含量。现报道如下。1仪器与材料1.1仪器Didnex-P680高效液相色谱仪；PDA-100PhtditeArray检测器；Q2250超声波清洗仪(上海声源仪器)；FA1104N电子分析天平上海精科天平厂。1.2试药芫花素对照品由广州药物研究所提供，经归一法标定，含量为99.3%，流动相甲醇为色谱纯美国Tedia公司，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。1.3药材了哥王购于广州市清平药材市场，由广东药学院天然产物化学系王定勇教授鉴定为了哥王ikstreiaindiaL.A.ey的枯燥根茎。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为AlltehDS柱4.6250,5,；流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液体积

6、比5545；流速1.0lin-1；检测波长346n；进样量10l；柱温：35；在此条件下供试品中芫花素成分能与其他成分到达较好的别离。对照品、供试品在约19in一样时间有一色谱峰，见图1。2.2对照品溶液的制备精细称取芫花素对照品12g，置于50l的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.24gl-1的对照品溶液，经0.45微孔滤膜过滤，即得。2.3供试品溶液的制备取了哥王生药研成细粉，过40目筛，精细称取细粉约25g，置具塞锥形瓶中，参加100l甲醇，称定重量，超声处理45in，放置室温，加溶剂补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45微孔滤膜过滤，即得。2.4线性关系考察分别精细汲

7、取芫花素对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，10.0l，分别置于10l量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别汲取10l，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定其峰面积，并以对照品含量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，得回归方程为：Y=84069X+34.648r=0.9998。结果说明：芫花素对照品在0.242.40g范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.5精细度实验精细汲取同一份供试品溶液10l，按上述色谱条件，重复进样7次，测定供试品溶液中芫花素峰面积值。结果供试品峰面积值的相对标准偏向RSD=1.46%(n=7)，说明仪器精细度良好。转贴于论文联盟.ll.2.6重复性实验精细

8、称取同一批次样品5份各25g，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，结果RSD=2.34%(n=5)，说明此方法的重复性良好。2.7稳定性实验精细汲取供试品溶液，按上述色谱条件，每隔0.5h，测定供试品溶液中芫花素峰面积值，共测定到第4小时，结果RSD=1.21%，供试品溶液在所测的4h内较稳定。2.8加样回收率实验分别精细称取含量的样品5份，每份约25g，按供试品制备方法制备，分别参加芫花素对照品适量并测定，计算回收率。结果平均回收率100.57%，RSD=1.76%n=5。结果见表1。表1芫花素含量测定回收率实验结果略2.9样品的测定取不同批次了哥王的枯燥药材5份，每份约25g，按供试品制备

9、方法制备，分别精细汲取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表2。表2样品中芫花素含量的测定结果略3讨论3.1流动相的选择分别以甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水、乙腈-水-磷酸为流动相比拟别离效果。其中甲醇-水-磷酸为流动相时可以到达最正确别离效果，故采用甲醇-水-磷酸为流动相3。流动相的pH值对别离影响较大，以甲醇和磷酸水溶液作为流动相，pH值越低，别离效果越好，考虑到色谱柱对pH值的耐受性，因此选择体积分数为0.2%的磷酸水溶液。3.2提取方法的选择分别考察超声提取和回流提取两种方法。结果说明，超声提取的效果较好，峰面积较大，含量较高，应选择超声提取方法。3.3提取溶剂的选择

10、精细称取了哥王25g共3份，分别置于锥形瓶中，称定重量，参加甲醇、乙醇、醋酸乙酯各100l，超声处理45in，放至室温，加溶剂补足重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液，测得芫花素含量分别为0.27,0.24,0.18gg-1。甲醇提取物中芫花素含量较高，杂质对别离度干扰小，供试品峰的别离效果好，故采用甲醇作为提取溶剂。3.4提取时间的选择精细称取了哥王25g共4份，分别置于锥形瓶中，各参加甲醇100l，称定重量，分别超声处理20，30，45，60in，放至室温，加溶剂补足重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液，测得芫花素含量分别为0.18，0.24，0.27，0.27gg-1，45in与60in提取效果较好，应选用45in提取时间。目前,对了哥王化学成分的研究文献报道的很少。本实验研究说明芫花素为了哥王中可控成分之一,故将其作为药材中的指标性成分进展含量测定,可有效地控制了哥王的质量