降血压肽ACE抑制活性及降压功能研究

1、降血压肽ACE抑制活性及降压功能研究【摘要】讨论了AE血管紧张素转换酶抑制活性的检测方法,并以贻贝为原料制取降血压肽，研究了不同酶解条件对其AE抑制活性的影响，然后利用SHR饲喂试验检测其降血压活性。结果说明，降血压肽有较好的AE抑制活性：其AE抑制率可达88.08%。同时动物试验说明其降压效果明显,在SHR饲喂后26h之内均有显著降压效果，平均降低为1628Hg。【关键词】降血压肽血管紧张素转换酶抑制活性降血压【Abstrat】ThetestingethdfAEinhibitryativitiesasstudied,andtheantihypertensivepeptideserederiv

2、edfrytilusrusus,thentheAEinhibitryativitieserestudiedndifferentnditins;theantihypertensiveeffetseretestedbySHR-feedingethd.Theresultsereasflls:theantihypertensivepeptidehadstrngAEinhibitryativities,theAEinhibitryratias88.08%,andtheantihypertensiveeffetasbviusin2t6hurs,theaveragereduedbreadthis1628Hg

3、.【Keyrds】antihypertensivepeptide；angitensin-nvertingenzyeAEinhibitryativities；antihypertensiveeffets降血压肽本质是一种血管紧张素转换酶抑制肽，它通过抑制血管紧张素转换酶AE，阻碍有升高血压作用的血管紧张素的生成，同时抑制具有降血压作用的血管舒缓激肽的分解，从而使血压下降，此即降血压肽的作用机理1。近年来国际学术界对降血压肽的研究较多，已报道有以牛奶、乳酪、大豆、鱼肉、蔬菜、小麦蛋白等食物为原料，经蛋白酶酶解产生了具有较好AE抑制活性的降血压肽27。Eiji等8水解了12种食物蛋白进一步研究发现，

4、从鱼肉、虾、蟹等水产动物蛋白中制得的降血压肽其降压活性优于其他食物性蛋白。我国在降血压肽领域的研究起步相对较晚，现有报道以大豆、蛇毒、老酒、茶叶为原料，对降血压肽的制备工艺和活性基团等方面进展了一定研究913；对于最适宜用于降血压肽制备的水产动物蛋白的开发研究，那么鲜有报道。贻贝，又名海红、淡菜，近年来人工养殖获得重大成功，在我国东南沿海产量丰富。但由于加工手段和技术的落后，在收获季节产出的大量贻贝因得不到及时处理而造成极大浪费14。本研究以贻贝为原料，经酶解、活性修饰等方法制取降血压肽，然后利用SHR饲喂试验检测其降血压活性，并分析了其相对分子质量分布和氨基酸组成，以期为贻贝酶解降血压肽的开

5、发提供理论探究。1材料与方法1.1材料与设备贻贝：市售。AE标准样品：Siga试剂。复合生物酶P1本工程组自行配制，其组分均购自上海生物化学试剂公司。降血压肽制备所需其他试剂，均为生化纯，上海生物化学试剂公司提供。降压功能试验用动物：SHR自发性高血压大鼠，上海高血压研究所提供。仪器设备：HPLaters600高效液相色谱仪，大鼠血压仪RBP-1B及常用试验仪器假设干。1.2实验步骤按上面实验所确定的酶解条件，取新颖贻贝去壳，捣碎，酶解，纯化，然后参加活性修饰剂A1,提取，冷冻枯燥，制备降血压肽，以备分析检测之用。将制备的降血压肽样品利用SHR饲喂试验来分析其降压活性。1.3实验方法将各酶解液

6、反响值与空白样品对照，分析所得酶解降压肽的AE抑制率P。计算公式为：P=AAntrlA%测量方法：尾动脉法测量收缩压SBP。2结果2.1AE抑制活性检测方法的研究不同浓度HippuriAid吸光值结果见表1、表2及图1、图2。表1不同浓度HippuriAid吸光值0.010.05表2不同浓度HippuriAid吸光值0.100.502.2酶解条件对降血压肽AE抑制率的影响将在不同的酶解条件下处理所得降血压肽样品按前述方法进展AE抑制活性的检测,分析其AE活性抑制率,研究不同酶解条件对降血压肽AE抑制率的影响,结果见表3。2.3降血压肽的降压效果降血压肽样品动物试验，将样品以3.0g/kg体重的

7、样品剂量进展灌喂。灌喂前和灌喂之后第2、4、6、8、10h分别检测收缩压一次，记录各血压值。结果见表4。2.4统计学分析采用各组别服用降血压肽前后收缩压的变化情况来反映降压效果，数据以xs表示，采用SPSS11.0frinds系统处理数据，并进展单因素方差分析，各组间进展Dunnettt多重比较。分析结果见表5。表3不同酶解条件对AE抑制效果影响表4降血压肽样品对收缩压降压效果注：0.050.013结论3.2P1酶最正确酶解条件对于AE抑制结果进展回归分析，所得回归方程为:Y=70.464-1.195X1+15.299X2+11.971X3-4.310X22+0.194X1X2-0.141X3

8、X4根据方程分析最正确的AE抑制活性为90.23%。但由实验结果在此条件下的实际AE抑制率为86.55%,所以N1为最正确条件。其AE抑制率为88.08%，对应的最正确酶解条件为：酶量25IU/l；酶解时间2h；pH7.0；酶解温度60。详细分析P1的酶解情况，酶量从25IU/l到175IU/l，酶解时间27h,随着酶量的增加和酶解时间的延长，其酶解程度增加，但所得降血压肽的AE抑制率下降。这是因为随着酶解的进展,蛋白质逐渐被水解成不同长度的肽断，其中部分因构造上的某些活性基团而具有降血压活性；但随着酶解程度进步，部分具有AE抑制活性的短肽被酶解成氨基酸或其活性基团被破坏，从而导致其AE抑制活

9、性下降。这一点与Ki等18通过牛皮胶制备酶解降血压肽的研究得到的结论相吻合，在酶解过程中控制酶解程度非常重要，既要使蛋白质得到充分的酶解，使更多的活性肽断被水解出来，但同时又要适当控制酶解程度，即并非酶解程度最大时其降压活性最好。3.3降血压肽的降压效果由方差分析结果，查表得F0.052,94.26，可知对于处理4h和6h血压变化的F值F0.052,9，说明服用降血压肽4h和6h效果差异有显著性0.05。同时，由上述实验结果可知，降血压肽在26h之内均有显著降压效果0.05，平均降低为1628Hg。在6h处降压效果到达最大值为28Hg，且效果极为显著0.01。根据国内外大量随机对照的临床试验结果，收缩压降低1014Hg和舒张压降低56Hg，冠心病减少1/6，总的主要心血管事件减少1/319，从这个意义上讲，贻贝酶解降压肽的降压效果非常显著，随着今后进一步研究，其有望作为一种高