比色法测定知母总皂苷含量

1、比色法测定知母总黑苷露量【摘要】目的创坐测定知母提与物中甾体黑苷露量比色要发。要发用茴喷鼻醛硫酸溶液做隐色系统，测定波少430n，肯定了最好真止前提。成效标准直线正在25150g线性关连良好，相关连数0.9998，平均采与率98.2%(RSD=3.18%)。结论该要发稳定性战反复性较好，可用于知母提与物甾体黑苷类物量杂度检查。【关键词】知母；比色法；甾体黑苷；茴喷鼻醛知母为百开科动物知母AnearrhenaasphdelidesBge.的枯燥根茎,性热，味苦苦，具有浑热泻水、死滋润燥之成效，用于中感热并下热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘1。知母甾体黑苷是主要有效成分之一。药理研讨

2、说明，知母甾体黑苷具有“抗血小板靠拢做用2“上调脑2受体及总受体3“对受体调整做用4“降低心率“降血压“对心肌缺血/复灌注毁伤的保护做用5“降血糖6等做用。如今，测定知母总黑苷的要发主要有比色法。本文采与比色法，对没有同隐色系统举止了没有俗观察，测定知母黑苷提与物中的黑苷类物量露量，为知母提与物的量量操做研讨供应参考按照。1仪器与材料TU-1901单光束紫中可睹分光光度计北京通用，喷鼻草醛3-甲氧基-4-羟基苯甲醛、茴喷鼻醛对甲氧基苯甲醛、对两甲氨基苯甲醛、无水乙醇、甲醇、硫酸等均为AR.级。知母黑苷A比力品上海第两军医年夜教药教系供应，下效液相回一化要发测杂度为97.2%知母药材提与物，共9

3、个批号060512，060515，060521，060622，060728，060808，060816，060908，060928，本真验室自止提与别离。2要发与成效2.1比力品溶液粗稀称与知母黑苷A比力品适当,减甲醇消融并造成每毫降约露0.5g的溶液，做为比力品溶液。2.2供试样品溶液粗稀称与知母提与物粉终100g，置50l容量瓶中，减甲醇消融并稀释至刻度，造成每毫降约露2g的溶液，做为供试品溶液。2.3隐色剂的挑选为没有俗观察最好隐色剂，参考文献报导7，没有俗观察了喷鼻草醛、茴喷鼻醛、对两甲氨基苯甲醛等隐色剂的隐色成效战稳定性，配造要发战用量分别为：A：1%喷鼻草醛无水乙醇溶液1l+硫酸-

4、无水乙醇7101l；B：0.5%茴喷鼻醛硫酸溶液0.5l0.1l茴喷鼻醛+1l硫酸+18.9l无水乙醇；：0.35l/L对两甲氨基苯甲醛水溶液1l0.08l/L盐酸乙醇1l；要发：粗稀吸与比力品溶液、供试品溶液各100l，置10l具塞试管中，挥干溶剂，与出，分别按上述要发参与没有同的隐色剂，振摇平均后，置100水浴中减热5in，与出，坐即置冰水浴中摆设5in，各管粗稀参与无水甲醇10l，摇匀，分别以各隐色试剂一样操做管为空黑，照分光光度法?中国药典?2022年版部附录A举止扫描，测定最年夜吸与波少处的吸与度。每隔5in测定一次，没有俗观察30in内吸与度的稳定性。成效睹表1。表1几种隐色剂的隐

5、色成效及稳定性略成效说明，喷鼻草醛为隐色剂时稳定性较好，对两甲氨基苯甲醛没有隐色，故挑选以茴喷鼻醛做为隐色剂，并进一步没有俗观察各种果素对隐色的影响。2.4隐色温度的影响粗稀吸与8份比力品溶液100l，至具塞试管中，挥干溶剂，与出，分别减0.5%茴喷鼻醛硫酸溶液0.5l,各与2份分别正在25，60，80战100下反响15in，与出，坐即置冰水浴中摆设5in，粗稀参与无水甲醇10l，摇匀，分别以各温度下的试剂管为空黑，测定最年夜吸与波少战吸光度。成效说明，反响温度对最年夜吸与波少无影响，均正在430n战504n波少处有最年夜吸与，但跟着温度降低，430n处吸与度降降，504n处吸与度降低，而正在

6、100前提下吸与度最下，较为水速，故挑选反响温度为100，测定波少430n。2.5隐色工夫的影响粗稀吸与6份比力品溶液100l，正在反响温度100前提下，没有俗观察了反响工夫5，10，15in对吸与度的影响，和吸与度的稳定性。成效睹表2。成效说明，100反响5in的吸与度较下，30in内的稳定性较好，故挑选100前提下，反响工夫5in为好。表2反响工夫对隐色的影响及稳定性略2.6线性范围没有俗观察分别粗稀吸与比力品溶液50，100，150，200，250，300l，至具塞试管中，挥干溶剂，与出，分别减0.5%茴喷鼻醛硫酸溶液0.5l,正在100水浴中反响5in，与出，坐即置冰水浴中摆设5in，

7、粗稀参与无水甲醇10l，摇匀，以试剂管为空黑，正在430n波少处测定吸与度，以比力品参与量为横坐标，吸与度为纵坐标，策画回回圆程。成效说明，知母黑苷A正在25150g范围内，呈线性关连，回回圆程Y3.7458X-0.0377(Y为吸与度,X为比力品毫克数)，r0.9998。2.7粗稀度真止按“2.6项下要发，粗稀吸与比力品溶液0.5l，反复测定，策画6次测定成效的平均值战相对标准缺面，评价要发的反复性。成效说明，本要发的反复性较好，RSD小于2.0%。2.8露量测定粗稀称与知母提与物约100g，置50l量瓶中，减甲醇消融并稀释至刻度，摇匀，粗稀吸与100l，按标准直线要发测定，策画黑苷露量。成

8、效睹表3。表3知母提与物露量测定成效略2.9减样采与真止粗稀吸与露量测定项下样品溶液50l，按露量测定要发处理，分别参与比力品液100l，测定吸与度，并以相一样品一样处理(没有减比力品液)为比力。成效睹表4。表4减样采与率测定成效略3会商喷鼻草醛、茴喷鼻醛战两甲氨基苯甲醛皆是断定黑苷经常使用的隐色试剂。没有俗观察成效说明，喷鼻草醛战茴喷鼻醛试剂(Anisaldehyde试剂,即A试剂)都可用做测定知母黑苷的隐色系统，但喷鼻草醛的稳定性没有及茴喷鼻醛，而正在以知母黑苷A做比力时，没有宜用盐酸两甲氨基苯甲醛试剂(Ehrlish试剂,即E试剂)做隐色系统。那是因为，F环闭环的单糖链黑苷战螺旋甾烷衍死黑苷只对A试剂隐黄色,对E试剂没有隐色，而呋甾既可对E试剂隐红色反响,也可对A试剂隐黄色反响8，9。因为知母黑苷A属于F环闭环螺甾黑苷，故没有能用E试剂隐色，但样品中果露有呋甾黑苷故呈现浓红色，但以知母黑苷A做比力时，应挑选A试剂做为总黑苷露量测定试剂。相比色前提劣化成效表示，本真验最好前提为100反响5in,与文献报导7，8的100反响15in稍有没有同，年夜要是黑苷品种没有同，该法标准直线正在25150g范围外线性关连良好,平均采