超高效液相色谱法测定龙胆药材中的獐芽菜苦苷和龙胆苦苷

1、超高效液相色谱法测定龙胆药材中的獐芽菜苦苷和龙胆苦苷曹悦，左代英，吴晓兰，刘敬武，孙启时【摘要】目的创立超高效液相色谱UPL法测定龙胆药材中活性身分的要领。要领接纳L934正交表摆设实行，确定最正确提取条件。色谱柱：Shiadzu183.075,1.7；活动相：乙腈-0.1%磷酸VV=5.594.5，流速0.80l/in；检测波长235,270n；柱温为40。效果獐芽菜苦苷、龙胆苦苷别离在0.15481.8580g/l，0.3225.152g/l范畴内呈精良的线性干系，均匀接纳率别离为102.09%，RSD=1.68n=6；103.80%，RSD=1.11n=6。结论接纳UPL法操纵龙胆质量，

2、操纵简朴,效果正确，要领可行。【关键词】龙胆超高效液相色谱獐芽菜苦苷龙胆苦苷Keyrds：RadixGentianaSabraBge.;UPL;Sertiaarin;Gentipirside龙胆为龙胆科植物条叶龙胆GentianaanshuriaKitag，龙胆GentianasabraBge，三花龙胆GentianatriflraPall或坚龙胆GentianarigesensFranh的枯燥根及根茎。具有清热燥湿，泻肝胆火的作用。用于湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，胁痛，口苦，惊风抽搐1。龙胆的重要有用身分为环烯醚萜类化合物，有龙胆苦苷Gentipirside、獐牙菜

3、苦苷Sertiaarin及獐牙菜苷Serside等,这类物质也是其苦味的物质底子2。如今接纳通例液相阐发时一样平常都必要较长的阐发时间，而超高效液相色谱(UPL)技能的应用，是我们在满意有用分散样品的同时，极大地收缩了阐发时间，有用地进步了事情服从，节省了本钱。而本文就是接纳UPL创立了一种快速、正确操纵龙胆质量的要领。1仪器与试剂岛津-UPL超高效液相色谱仪，L-slutin色谱事情站。獐芽菜苦苷比拟品北京中西宏大科技，批号070316纯度99.06%，龙胆苦苷比拟品中国生物成品检定所，批号110770-202210，磷酸为阐发纯，别的试剂均为色谱纯。2要领与效果2.1提取工艺的观察以獐芽菜

4、苦苷和龙胆苦苷为检测指标，拔取提取溶剂、提取要领、提取时间3个因素，每个因素3个程度，接纳L934正交表举行实行，按“2.4项制备样品溶液，按“2.5项条件举行测定。综合直不雅阐发和方差阐发的效果，确定最正确提取工艺为：甲醇超声提取30in。2.2检测波长的选择取獐芽菜苦苷和龙胆苦苷比拟品适量，加甲醇制成浓度为0.1g/l的溶液，在200400n举行紫外扫描，效果獐芽菜苦苷的最大汲取波长在235n，龙胆苦苷的最大汲取波长在270n。2.3比拟品溶液的制备别离细密称取獐芽菜苦苷和龙胆苦苷比拟品适量,加甲醇制成0.15g/l和0.3g/l的溶液。2.4供试品溶液的制备取龙胆药材，破坏成中粉，取1g

5、置具塞三角瓶中,细密参加甲醇25l，称定重量，超声处置惩罚30in严酷操纵水温，15in停1次，冷却至室温，以甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45微孔滤膜滤过，作为测定獐芽菜苦苷的样品溶液，细密汲取上述溶液5l，置25l量瓶中加甲醇溶液稀释至刻度，作为测定龙胆苦苷的样品溶液。2.5色谱条件色谱柱Shiadzu183.075,1.7；活动相为乙腈-0.1磷酸溶液5.594.5，流速0.8l/in，检测波长别离为235n和270n，柱温40，进样量4l。2.6线性干系别离细密量取獐芽菜苦苷比拟品溶液=0.1548g/l1，2，4，6l、母液=0.3097g/l4，6l注入液相色谱仪中，测定峰面积；

6、别离细密量取龙胆苦苷比拟品溶液，=0.322g/l1，2，4，8l、母液=0.644g/l6l、8l注入液相色谱仪中，根据“2.5项的要领测定峰面积，效果表白，獐芽菜苦苷、龙胆苦苷质量浓度X在0.15481.8580g/l和0.3225.152g/l与峰面积Y呈线性干系。回归方程别离为Y=889751X-9916.5，r=0.9998;Y=805953X+25881,r=0.9998。2.7细密度实行细密汲取同一供试品溶液4l，一连进样5次，獐芽菜苦苷和龙胆苦苷的峰面积RSD别离为1.92,0.32n=5。2.8重复性实行细密称取龙胆中粉1g,按“2.4项制备6份样品溶液，测定，盘算獐芽菜苦苷

7、和龙胆苦苷的含量，其RSD别离为0.79,2.0n=6。2.9不变性实行取同一供试品溶液别离在0，2，4，6，8，12，16h测定，效果表白獐芽菜苦苷和龙胆苦苷在16h内不变性精良，峰面积RSD别离为1.65,0.31。2.10接纳率实行别离细密称取质量分数的龙胆药材粉末，獐芽菜苦苷0.5g,龙胆苦苷0.1g,制备样品溶液，测定，效果獐芽菜苦苷的均匀接纳率102.09%，RSD为1.68n=6；龙胆苦苷的均匀接纳率103.80%，RSD为1.11n=6。2.11样品测定18批样品系辽宁天瑞绿色财产科技开拓提供的种植品。取样品1g,制备样品溶液，测定，效果见表1。色谱图见图14。表1样品测定效果

8、略3讨论从正交实行方案法的实行效果中创造，超声提取和回流提取两种要领，在利用甲醇作为溶剂、提取时间为30in时，所测定的两个指标性身分的含量根本同等，但思量到回流的操纵相对庞大，而且一旦超出划定的回流时间，两类身分含量丧失较大，阐发缘故原由是两类身分均为裂环烯醚萜苷类化合物，受热易剖析，因此选择了耐用性较好的超声提取要领，而且在操纵中严酷操纵温度。UPL法用于药品身分的检测如今还很少，其长处在于不影响正常分散度的环境下，通过缩小填料粒度、增长线流速的环境下，极大地收缩了阐发时间。同通例液相比拟，一样平常可以或许收缩410倍的阐发时间，进步了事情服从。獐芽菜苦苷和龙胆苦苷均为水溶性身分，极性较大，所接纳的活动相水的比例很大，接纳通例液相必要100in，而超高液相仅必要20多分钟，同时满意了獐芽菜苦苷的有用分散度。所测定的样品均为辽宁清原的道地药材，其龙胆苦苷的含量范畴为56.7585.61g/g，远高于?中国药典?1划定的10g/g的要求。獐牙菜苦苷的含量范畴为3.275.52g/g，其含量的凹凸根本与龙胆