γ谷氨酰转肽酶酶学性质的研究

1、-谷氨酰转肽酶酶学性子的研究蒋敏丽,孟佩佩,高鹏,胡立勇【摘要】目的相识地衣芽孢杆菌菌体细胞中-谷氨酰转肽酶的一些底子酶学性子。要领接纳溶菌酶法破裂细胞壁，经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后，接纳紫外分光光度法测定该酶的酶活力。效果该酶在2535的温度范畴有很好的耐受性，在碱性条件下保持必然的活性，最适反响温度为45，最适反响ph值为8.0，a2+、g2+等金属离子在得当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实行为使用该酶转化消费茶氨酸提供了根据。【关键词】-谷氨酰转肽酶;酶学性子;茶氨酸keyrds:-glutayltranspeptidase;enzylgialprperty;l-theanine1质

2、料与要领1.1重要质料与试剂菌种：地衣芽孢杆菌(bailluslihenifris)由本实行室挑选得到。试剂：tris购自北京普博欣生物公司;l-谷氨酰对硝基苯胺、双甘肽均购自广州威佳科技;硫酸铵为国产阐发纯。1.2地衣芽孢杆菌的产酶发酵用接种环在活化好的菌种歪面上刮下一环菌种，将其转入到种子造就基，30、240r/in摇床振荡造就16h。以20%接种量转接于发酵造就基(30l发酵液/300l三角瓶)中，在30下240r/in摇床造就28h后网络菌体。1.3-gtp粗酶的制备-gtp发酵瓶造就液离心(4800r/in,10in)，弃上清液，用te缓冲液(tri-hl缓冲液,ph8.0，10l/

3、l)重悬菌体,接纳溶菌酶法以及硫酸铵盐析法制备粗酶液。1.4酶对温度的耐受性以teph8.0为缓冲液，差异温度下保存20in，测定酶活力1。1.5酶对ph的耐受性1.6酶的最适反响温度以teph8.0为缓冲液，别离在差异温度下测定酶活力。1.7酶的最适反响ph1.8金属离子对酶活力的影响在反响体系中别离参加种种金属离子，终浓度均为5l/l，接纳酶活测试要领检测酶活力。2效果2.1酶对温度的耐受性-gtp对40及以上温度的耐受性较差，当温度到达50时，颠末短时间的保存,酶活力根本丧失。但在2535的温度范畴有较好的不变性，特殊是在常温下，颠末20in的收藏，酶活力根本未变。因此该酶的收藏条件比力

4、简朴，得当产业消费茶氨酸。见图1。ps1781;s*2图1-谷氨酰转肽酶对温度的耐受性figure1teperaturetleranef-gtp2.2酶对ph的耐受性-gtp对酸性环境的耐受性很差，在ph低于5.0时，短时间保存后酶活力根本丧失，而在碱性条件下，最高可以耐受ph11.0的环境而保持较高的酶活力。此中ph8.0是其最正确的收藏ph。因此可以选用ph8.0的缓冲液保存该酶。见图2。ps1782;s*2图2-谷氨酰转肽酶对ph的耐受性figure2tleranetphf-gtp2.3酶的最适反响温度-gtp对温度的顺应性很强，在3755以下均具有较高的酶活力，此中在45时酶活力最高。

5、因此可以确定根据-gtp酶活力检测要领得到-gtp的最适反响温度为45。见图3。2.4酶的最适反响ph值-gtp对酸性环境顺应力很差，而在弱碱性条件下表示出较高的酶活力，此中在ph8.0时酶活力最高。因此可以确定根据-gtp酶活力检测要领得到-gtp的最适反响ph为8.0。见图4。2.5金属离子对酶活力的影响在反响体系中参加5l/l的种种金属离子除亚锡离子外均会对酶的活力有促进作用。但在金属离子中，一价金属离子钾离子和钠离子以及三价金属离子铁离子和铝离子的参加对酶的促进作用显着低于二价金属离子锰离子、钙离子和镁离子。别的，添加重金属离子亚锡离子由于会引起卵白质的变性，致使酶活力消散;有的金属离

6、子如锰离子、镁离子等可较大程度的进步酶活力，这大概是由于这些金属离子会对-gtp的活性中央产生影响的缘故。见图5。ps1783;s*2图3-谷氨酰转肽酶最适反响温度figure3ptiureatinteperaturefr-gtpps1784;s*6/7图4-谷氨酰转肽酶最适反响phfigure4theptiureatinphfr-gtpps1785;s*2图5差异金属离子对-谷氨酰转肽酶酶活力的影响figure5effetsfvariusetalinsntheativityf-gtp在一样平常环境下，得当的金属离子及得当的浓度会对酶的催化活性产生促进作用，但假设反响体系中金属离子浓度过高，反

7、而会对酶卵白产生迫害作用。为此，可选择对-gtp影响较大的镁离子研究浓度与酶活力的干系。g2+浓度对酶活力的影响比力明显。在低于3.0l/l的浓度范畴内，酶活力随着g2+浓度的增长而增高，当浓度到达3.0l/l时酶活力最高，今后，酶活力随着g2+浓度上升而迟钝落落。由此可见，在图5所涉及的金属离子(除亚锡离子外)固然在5l/l的浓度下对酶活力均有促进作用，但在差异浓度下有些金属离子也会对酶起到按捺作用。见图6。ps1786;s*2图6镁离子浓度对-谷氨酰转肽酶活力的影响figure6effetsfg2+nentratinn-gtp3讨论地衣芽孢杆菌所产生的-gtp在2535的温度范畴有较好的不

8、变性，在50的温度下保存20in酶活力根本丧失，这为进一步使用该酶转化消费茶氨酸时的温度条件提供了根据。该酶对酸性环境无耐受性，相宜在碱性条件下保存，在ph低于11的碱性条件下保存30in，酶活力根本无丧失。使用-gtp消费茶氨酸必要反响体系ph为109，而该酶在此ph下比力不变，说明地衣芽孢杆菌所产生的-gtp得当于酶法转化消费茶氨酸。根据-gtp酶活力检测要领得到地衣芽孢杆菌所产-gtp的最适反响温度为45，最得当反响ph为8.0，在金属离子浓度为5l/l的环境下，钾离子、钙离子和镁离子等金属离子对酶的活力均无损害，此中有些金属离子(n2+,a2+)的存在对酶活力促进作用较大(见图5)，在

9、酶转化消费茶氨酸选择符合的离子浓度对酶活力的进步有较大的促进作用，如当镁离子浓度为3.0l/l时酶活力进步了55.9%。本文仅对-谷氨酰转肽酶的底子酶学性子举行了开端研究，有关催化动力学常数，以及使用该酶消费茶氨酸的符合工艺条件另有待进一步的探究。【参考文献】1eistera,tatess.-glutayltranspeptidasej.ethdsinenzylgy,1981,77:237-253.2talalayps.glutathinebreakdnandtranspeptidatinreatininprteusvulgarisj.nature,1954,174(4428):516-517

10、.3beninif,pigzzig,pzzia,etal.elevatinfserugaa-glutayltranspeptidaseativityisfrequentinhrnihepatitis,andisassiatedithinsulinresistanej.digliverdis,2022,41(8):586-590.4李公祥,孙宗钦.肾脏疾病患者尿液-谷氨酰转肽酶的测定j.职业与康健,2022,19(11)：57.5hideyukis,ykk,hidehikk.iprveentfthebittertastefainaidsthrughthetranspeptidatinreatinfbaterial-glutayltranspeptidasej.agrifdhe,2002,50(2):313-318.6kuagaih,ehigt,suzukih，etal.synthesisfgaa-glutayl-dpafrl-glutaineandl-dpabygaa-glutayltranspeptidasefesherihialik-12j.agriulturalandbilgialheistry,1988,52(7):1741-1745.7suzukih,yaada,katk.-glutaylpundsandtheirenzyatiprdutinusi