乳与乳制品微生物检验菌落总数的检测

1、乳与乳制品微生物检验菌落总数的检测 YLNB 3.1方法一： 1. 引用依据：GB/T4789.2-20032. 术语和定义菌落总数是指食品检样经处理后，在一定条件下培养后（如营养成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1ml（g）检样中所生长的细菌菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有的生长条件不能满足其生理要求，故难以生长。因此菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌

2、在食品中的繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。3. 仪器及器材3.1 恒温培养箱：361；3.2 冰箱：04；3.3 恒温水浴锅：461；3.4 天平；3.5 电炉；3.6 灭菌吸管；3.7 灭菌广口瓶或三角瓶：容量为500ml；3.8 玻璃珠：直径5mm； 3.9 灭菌平皿：直径约90mm；3.10 灭菌试管；3.11 放大镜；3.12 菌落计数器；3.13 酒精灯；3.14 均质器或乳钵；3.15 试管架；3.16 灭菌刀或剪子；3.17 灭菌镊子。4. 培养基和试剂4.1 营养琼脂培养基；4.2 生理盐水；4.3 75%乙醇溶液。5. 检验程序检样做成几个适当倍数的稀释液报

3、 告菌落计数选择2-3个适宜稀释度各以1ml分别加入灭菌平皿中每个皿内加入适量营养琼脂菌落总数的检验程序如下：361 482h6. 方法6.1 检样稀释及培养6.1.1 以无菌操作将检样25g（或ml）剪碎放于装有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以800010000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。6.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀

4、释液）振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。6.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。6.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内。6.1.5 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46的营养琼脂培养基（可放置于461水浴中保温）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内做空白对照。6.1.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置361培养箱内培养482h。 注：如果怀疑样

5、品中含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落之，琼脂凝固后，可在表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），并在报告上记录该操作。 6.2 菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。6.3 菌落计数的报告6.3.1 平板菌落数的选择选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数的测定标准，一个稀释度选用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，可计算半个平板后乘2代表全皿菌落数。平板内有链

6、状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。6.3.2 稀释度的选择6.3.2.1 应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表中例1）。6.3.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视两者的比值来确定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字，（见表中例2及3）。6.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表中例4）。6.3.2.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落

7、数乘以稀释倍数报告（见表中例5）。6.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告（见表中例6）。6.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表中例7）。6.3.3 菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面得数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示（见表1）。表1 稀释度选择及菌落数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数cfu/g或ml报告方式cfu/g或ml10-1

8、10-210-31多不可计164201640016000或1.61042多不可计295461.63775038000或3.81043多不可计271602.22710027000或2.71044多不可计多不可计313313000310000或3.1105527115270270或2.71026000110107多不可计305123050031000或3.11047. 注意事项7.1 培养基温度应在461，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混合，琼脂应放在水浴锅内，温度为461。7.2 尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。7.3 检样稀释

9、后，应尽快接种，倾到培养基。一般从检样稀释开始到倾到培养基，应在15min内操作完毕。注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少而高稀释度使菌落反而增大。7.4 对照试验。为了避免微小颗粒与细菌菌落发生混淆，可作一个检样稀释液与琼脂混合的平板，不经培养放到4环境中，以便计数菌落时用作对照。7.5 培养湿度。培养箱应保持一定的湿度，琼脂平板培养48h后，培养基失重不应超过15%。8. 菌落计数及报告注意事项8.1 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。8.2 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。8.3 如果稀释度大的平板上菌落数反比稀释度小的

10、平板上菌落数高，有两种可能性：一是检验工作中发生差错；二是受防腐剂影响。这二种情况均不可用作检样计数报告的依据。8.4 如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时，一个细胞块被分散所造成。一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链应作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。此外，如皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入，在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落，也不应分开来数。8.5 如果所有平板上都菌落密布，不要用多不可计报告，而应在稀释最大的平板上，任意数其中两个平方厘米中的菌落数，除以2求出lcm2内平均菌落数，乘以皿底面积63.6cm2，再乘以其稀释倍数，以此结果作报告，例如：10-110-3稀释度的所有平板上均菌落密布，而在10-3稀释度的平板上任意数两个平方厘米内的菌落数是60个，皿底直径为9cm，则该检样每克（或ml）中“估计”菌落数为：60