乳与乳制品微生物检验方法嗜冷菌的检测

1、乳与乳制品微生物检验方法嗜冷菌的检测 YLNB 3.3方法一：（仲裁法）1、引用依据：IDF标准101A：1991乳中嗜冷菌的检验，6.5，培养10天2、范围此方法用于原奶和巴氏杀菌奶的检验。3、试剂与培养基3.1 生理盐水；3.2 培养基：平板计数琼脂23.5g+脱脂奶粉1g,溶于100ml蒸馏水中。必要时用滤纸过滤。调节pH值为6.90.1。将培养基分装倒入三角瓶中，每瓶100-150ml。在1211下灭菌15min，如果培养基马上要用，用水浴锅冷却到461。如果不是，则为了不耽误培养基的使用，在实验开始前，将培养基放入沸腾水浴中使其完全熔化，然后再放入水浴中冷却到461。注：其中脱脂粉应

2、该不含有抑菌剂。4、仪器及器材4.1 恒温培养箱：361；4.2 冰箱：0-4；4.3 恒温水浴锅：461；4.4 天平；4.5 均质器或乳钵；4.6灭菌平皿：直径90mm；4.7 灭菌试管：18180和20200；4.8 灭菌吸管：1 ml和10 ml；4.9 灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml；4.10 灭菌玻璃珠：直径约5mm；4.11 酒精灯；4.12 试管架；4.13 灭菌刀、剪子、灭菌镊子等；4.14 pH计。5、方法5.1样品的稀释及培养5.1.1 以无菌操作，将25ml样品注入含有225ml灭菌生理盐水的三角瓶内，充分混匀，制成1：10的稀释液。5.1.2 用1ml灭菌吸管

3、吸取1：10的稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，充分混匀，制成1：100的稀释液。5.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支吸管。5.1.4 根据对样品污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。注：其他稀释方法可以使用，例如第一步稀释可以是10ml检测样品注入到90ml稀释液中，或11ml检测样品注入到99ml稀释液中。当样品和稀释液用量更大，方法的精密度和准确度就更高。5.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46

4、的培养基（可放置于461水浴保温）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。同时将培养基倾入空的灭菌平皿内作空白对照。注：从稀释样品到倾倒培养基，整个操作过程不应超过15min。5.1.6 待培养基凝固，翻转平板，放入6.5培养箱内培养10天。注：每叠皿不应超过6个，每叠皿之间以及与培养箱的壁之间应保持一定的间隙。5.2 菌落计数方法对平皿进行菌落计数时，应在柔和的光线下计数。为了便于计数，可使用适当的放大镜和（或）菌落计数器。以防极小的菌落遗漏，以及避免将平皿中杂质颗粒进行计数。仔细检查可疑的物质，如需要可使用更高倍数的放大镜，以区别菌落和外来物质。5.3 菌落计数的报告5.3.1 平板菌落

5、数的选择平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平板内若有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。5.3.2 稀释度的选择及报告5.3.2.1 选取菌落数在10-300之间的培养皿作为计数的测定标准。5.3.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数在10-300之间，则按下面的方法计数。计算每ml牛奶中微生物的个数N，用以下的公式：N=这里c： 是所有皿上菌落数的总和。n1： 是第

6、一个稀释度培养皿的个数。n2： 是第二个稀释度培养皿的个数。d： 是与第一个稀释液相对应的稀释因子结果保留两位有效数字，后面的数字以四舍五入计算。当第三位数是5时，看其左边的数是奇偶数进行数字取舍；如28500进行数字取舍为28000，11500为12000。结果以科学计数法表示。举例微生物计数给出以下的结果（包括两个带盖培养皿）：在第一个稀释度（10-2）：168和215个菌落在第二个稀释度（10-3）：14和25个菌落根据上面所说结果进行取舍为19000，结果为1.9104个/ml。注：如果有两个以上可以计数的稀释度，公式应修改为用多个稀释度进行计算。如为三个稀释度，由下面的公式可计算出每

7、毫升中微生物的数量。5.3.2.3 如果菌落数均小于10，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数，报告每毫升牛奶菌落的估计数。5.3.2.4 如果菌落数均超过300，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数，报告每毫升牛奶菌落的估计数。方法二：（快速法） 1、引用依据：IDF标准132A乳中嗜冷菌快速检测方法，21，25h。2、范围本标准描述的是通过21时快速菌落计数技术进行嗜冷菌菌数估算的方法。此方法用于原奶和巴氏杀菌奶的检验当需要很快的得到嗜冷菌估算值的时候。3、试剂与培养基3.1 稀释液生理盐水：0.85的氯化钠水溶液，灭菌。3.2 培养基平板计数琼脂23.5g+脱脂奶粉1g，溶于1000ml水中。必要时用滤纸过滤。调节pH值为6.90.1。将培养基分装倒入三角瓶中，每瓶100150ml。在1211下灭菌15min，如果培养基马上要用，用水浴锅冷却到461。如果不是，则为了不耽误培养基的使用，在实验开始前，将培养基放入沸腾水浴中使其完全熔化，然后再放入水浴中冷却到461。注：其中脱脂粉应该不含有抑菌剂。4、仪器及器材4.1 培养箱：2114.2 pH计 4.3 水浴：4614.4 三角瓶：250300ml，带合